| 电穿孔介导小干扰RNA高效转染小鼠附植前胚胎 |
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| 引用本文： | 常博皞,彭辉,田进海,苏建民,张亨德,白学尧,张涌.电穿孔介导小干扰RNA高效转染小鼠附植前胚胎[J].生物工程学报,2012,28(5):613-622. |
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| 作者姓名： | 常博皞 彭辉 田进海 苏建民 张亨德 白学尧 张涌 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院 农业部生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育科技重大专项 (No. 2008ZX08007-004)，国家高技术研究发展计划 (863计划) (No.2011A100303) 资助。 |
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| 摘 要： | 使用Cy3标记的阴性对照小干扰RNA(siRNA)转染小鼠附植前胚胎,建立向小鼠附植前胚胎导入siRNA的电穿孔方法。通过控制透明带弱化程度、电压、脉冲时间和脉冲次数等条件,采用不同参数组合并结合使用不同介质作为电转缓冲液将Cy3标记的阴性对照siRNA转染小鼠附植前胚胎。在荧光倒置显微镜下,观察胚胎的存活率、siRNA转染率以及阳性转染存活胚胎的囊胚发育率。结果显示小鼠附植前胚胎在使用台氏液消化胚胎透明带10 s后,以opti-MEM作为电转缓冲液,电穿孔参数设置为30 V,1 ms,3次的条件下取得最佳转染效果。总之,电穿孔方法可实现siRNA简便、高效地转染小鼠附植前胚胎。
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| 关 键 词： | 小干扰RNA 电穿孔 透明带 RNA干扰 |
| 收稿时间： | 2011/10/9 0:00:00 |
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