顺磁探针16－NS和荧光探针DPH在DPPG交插脂双层中的行为研究

研究了１６—ＮＳ和ＤＰＨ在被山莨菪碱诱导形成交插脂结构的ＤＰＰＧ脂质体中的行为。在交插脂双层结构中,标记在脂酰链末端的１６—ＮＳ的序参数明显增大,即同标记在靠脂酰链头部的５—ＮＳ的序参数的差距缩小。这些颇磁探针在交插脂双层结构中的运动比在非交插脂双层结构中受到更大的限制。ＤＰＨ荧光强度在ＤＰＰＧ由非交插脂双层转变为交插脂双层结构时急剧下降。引起这种下降的原因可能是膜脂在从非交插脂双层结构向交插脂双层结构的转变过程中使得ＤＰＨ处于一个更为亲水的环境中。     

螺旋藻藻胆体核心复合物结构与功能的研究──四种变藻蓝蛋白复合物的分离及光谱特性的研究

从螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｐｌａｔｅｎｓｉｓ）的藻胆体中分离出四种不同光谱形式的变藻蓝蛋白（ＡＰＣ）复合物：ＡＰⅠ、ＡＰⅡ、ＡＰⅢ、ＡＰＢ,利用吸收光谱、荧光先谱（室温和低温）以及荧光激发偏振光谱比较了ＡＰＣ复合物三聚体和单体的光谱特性。四种ＡＰＣ复合物三聚体的最大吸收和最大发射峰位置各不相同,ＡＰⅡ和ＡＰⅢ位于短波区（最大吸收波长在～６５０ｎｍ．最大发射波长在６６２～６６４ｎｍ）,ＡＰⅠ和ＡＰＢ位于长波区（最大吸收波长在～６５５ｎｍ,最大发射波长在～６８０ｎｍ）,低温下的荧光发射光谱均有红移。在能量传递中,各种不同形式的ＡＰＣ复合物表现出不同的功能,以实现能量的高效传递：ＡＰⅡ和ＡＰⅢ是能量传递的中介,ＡＰⅠ和ＡＰＢ作为终端发射基因,分别将激发能传给反应中心。通过荧光激发偏振光谱研究了四种ＡＰＣ复合物及其单体内各色团间的相互关系及其在能量传递中的取向和功能。     

激光时间分辨荧光谱仪＊以及荧光各向异性测量

就时间相关单光子计数荧光谱仪的工作原理、实验装置的建立等问题进行了探讨。利用国产的红离子锁模激光同步泵浦腔倒空输出染料激光器等器件与进口的时幅转换器、定时恒分器建成了激光时间分辨荧光谱仪,时间分辨率为８０ｐｓ。本文还建立了荧光各向异性的测量方法,利用该方法对Ｒ－ＰＥ的旋转弛豫时间进行了测量,并与英国Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ公司生产的２９９Ｔ型荧光谱仪的测量结果进行了比较,结果证明仪器及方法都是可靠的。     

用两相法纯化玉米精细胞质膜

纯系玉米(Zea mays L.)708的新鲜花粉经蔗糖溶液等渗温育、低渗胀破,用30％Percoll不连续密度梯度离心,制备大量的生活精细胞。精细胞用French压力室破碎后离心(90000×g,4℃),获得微粒体。随后,用16g的(6.2％Dextran T500/6.2％PEG3350)两相系统加以纯化。一级分离后,上相液(U_1)的K~ 刺激的Mg~(2 )-ATP酶活性稍低于下相液(L_1);对U_1进行二级分离后,U_2的K~ 刺激的Mg~(2 )-ATP酶活性远远高于下相液(U_2L),分离率达到61.1％。膜蛋白质的分离趋势与K~ 刺激的Mg~(2 )-ATP酶相似。选用细胞色素C氧化酶作为线粒体的标志酶,虽只经一级分离,但在U_1中已检测不到该酶活性。精细胞质膜的磷钨酸特异染色电镜观察结果显示,由二级分离所得质膜的纯度达到90％以上。     

荧光光谱法定量测定纤维素酶活性架构中单个氨基酸突变对底物结合力的影响

纤维素酶活性架构是酶分子中多个氨基酸残基构成的可结合并催化底物的功能区,其中色氨酸等芳香族残基在该区域中起着重要作用.本研究利用荧光光谱法,定量分析了纤维素酶Ch Cel5A活性架构中色氨酸与底物的结合动力学过程,通过色氨酸荧光猝灭的定量分析,确定了色氨酸特异性结合时的底物浓度范围,并且测定了Ch Cel5A活性架构中单个氨基酸突变导致的底物结合常数的变化,与催化动力学参数比较发现,荧光光谱法可准确表征纤维素酶与底物的结合力及其单个残基突变引起动力学参数的变化.此外,由于p NP中含有强的吸电子基团,因而以p NPC等为配体时会高估与色氨酸的结合常数约20~100倍.荧光光谱法可以测定纤维素酶结合糖分子底物的动力学参数,该方法具有灵敏和快速的特点,这为蛋白质与底物之间相互作用的定量分析提供了新的视角.     

更新方式对亚热带森林土壤溶液可溶性有机质数量及化学结构的影响

采用负压法对福建省三明市亚热带常绿阔叶林中米槠次生林(BF)、米槠人促更新林(RF)、米槠人工林(CP) 0～15、15～30、30～60 cm土层土壤溶液可溶性有机质(DOM)的浓度及光谱学特征进行研究.结果表明: 土壤溶液可溶性有机碳(DOC)浓度整体趋势为RF>CP>BF,而可溶性有机氮(DON)则为米槠人工林最高;且 DOC 和 DON 在表层(0～15 cm)土壤浓度皆显著高于底层(30～60 cm).芳香化指数大小为RF>CP>BF,且整体为表层较高.米槠人工林表层土壤以荧光强度高的短波峰(320 nm)为特征峰,表明其易分解物质含量高,腐殖化程度较低;而米槠人促更新林表层土壤则以宽平的中长波峰(380 nm)为特征峰,说明其腐殖化程度较高,有助于土壤肥力的储存.此外,30～60 cm深层DOM特性几乎不受森林更新方式的影响.     

滇池沉积物中厌氧氨氧化细菌分布的时空差异

正厌氧氨氧化作用(Anaerobic Ammonia Oxidation,Anammox)是细菌在厌氧条件下,以NO_2~-为电子受体,以铵离子为电子供体的氧化还原反应[1]。厌氧氨氧化细菌的生长极为缓慢,只能在高菌体浓度时才显示其氨氧化活性,且对氧的存在十分敏感,所以传统的微生物纯化、分离和培养的方法并不适用于厌氧氨氧化细菌。由于微生物可培养技术的局限性,因此实时荧光定量PCR技术成为定量描述难培养微生物分布和丰度的有力手段[2]。宋亚娜等[3]。利用荧光定量PCR方法对土壤中厌氧氨氧化细菌进行了检测,但对于高原湖泊底泥中厌氧氨氧化细     

A型流感病毒M2膜蛋白两亲性螺旋构象变化的FRET研究

A型流感病毒膜质子通道M2是一个重要的抗流感药物靶点,其通道功能与蛋白质构象变化紧密相关.M2跨膜螺旋结构与功能的研究已经取得了显著进展,但其膜内碳端两亲性螺旋的构象变化与M2功能的关系尚不明确.在这个两亲性螺旋中引入能与跨膜域色氨酸形成福斯特共振能量转移(FRET)作用的非天然氨基酸Phe CN,以便研究通道激活或抑制后M2蛋白膜内部分的构象变化.在酸性环境通道激活的条件下,两亲性螺旋与跨膜螺旋间的距离增大,其增大幅度基本不受药物抑制通道活性的影响.由此推测两亲性螺旋的构象变化与通道活性无关,反而很可能与M2在病毒出芽过程中的作用相关.     

叶绿素荧光动力学检测塑化剂对尖细栅藻的毒性效应

以汉江水华藻类尖细栅藻Scenedesmus acuminatus为材料, 研究了塑化剂(邻苯二甲酸二异辛酯, DEHP)对其光合系统的毒性效应。以不同浓度的DEHP处理S.acuminatus, 分析其光合系统电子传递特征及相关参数, 以及快速叶绿素荧光诱导动力曲线, 发现低浓度的DEHP (10 mg/L)对S.acuminatus活性反应中心的电子传递链中QA-的还原有促进作用, 而高浓度(50100 mg/L)则显著抑制; 光合活性则与DEHP浓度呈效应-剂量关系, 最大光化学效率降低; 同时DEHP显著降低SOD活性, 增加MDA含量, 而且随DEHP浓度升高, 处理时间的延长, 效果越明显。研究结果表明, DEHP处理对S.acuminatus的光合系统传递链和抗氧化系统有一定的影响,说明快速荧光动力方法能够应用于DEHP毒性效应的快速检测。     

小波变换及滚球算法在单分子荧光能量共振转移图像分析中的应用

单分子荧光共振能量转移技术是通过检测单个分子内的荧光供体及受体间荧光能量转移的效率来研究分子构象的变化．要得到这些生物大分子的信息就需要对大量的单分子信号进行统计分析,人工分析这些信息,既费时费力又不具备客观性和可重复性,因此本文将小波变换及滚球算法应用到单分子荧光能量共振转移图像中对单分子信号进行统计分析．在保证准确检测到单分子信号的前提下,文章对滚球算法和小波变换算法处理图像后的线性进行了分析,结果表明,滚球算法和小波变换算法不但能够很好地去除单分子FRET图像的背景噪声,同时还能很好地保持单分子荧光信号的线性．最后本文还利用滚球算法处理单分子FRET图像及统计15 bp DNA的FRET效率的直方图,通过计算得到了15 bp DNA的FRET效率值．