鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因的原核表达及重组蛋白对强毒攻击的免疫保护作用

根据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pilA基因并将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后,将鸭源致病性大肠杆菌pilA基因正向插入原核表达载体pET-32a（+）的BamHⅠ和HindⅢ位点间,成功构建了重组表达质粒pET-32a-pilA。重组表达质粒pET-32a-pilA转化表达宿主菌BL21（DE3）,用IPTG诱导,表达出了大小约为36kD的pilA重组蛋白。表达产物用镍柱亲和层析纯化,与等量弗氏佐剂混合制备pilA重组蛋白疫苗,分别在1日龄、8日龄时两次对雏鸭进行免疫,二免后2周测定鸭血清中的ELISA抗体效价,并以10⁹PFU同源菌株GH1.2攻毒,根据攻毒后鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变等级来判定pilA重组蛋白的免疫保护效果。结果pilA重组蛋白免疫鸭的血清中ELISA抗体效价为1∶12800,全菌灭活苗免疫组的血清ELISA抗体效价为1∶200;同源菌株攻毒后,pilA重组蛋白免疫保护组鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变程度均比攻毒对照组下降且差异显著或极显著,与全菌灭活苗免组比较差异不显著。表明pilA重组蛋白对同源菌株GH1.2的感染具有一定的保护效果     

红莲型水稻细胞质雄性不育花粉总蛋白质初步比较分析

采用固相pH梯度/SDS-PAGE双向电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻的不育系(YTA)和保持系(YTB)二核期花粉总蛋白质进行了分离,通过银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。用PDQuest2DE软件可识别约1500个蛋白质点,其中差异表达的蛋白质点数为120。将其中15个差异点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionizaton time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行了肽质指纹图分析,通过采用Mascot软件对MSDB数据库查询,其中7个蛋白质点得到了鉴定。YTA相对于YTB有部分参与物质和能量代谢的蛋白质缺失或表达量降低,这些蛋白质分别是水稻线粒体H -转运ATPase(H -ATPase)α链、盐诱导型膜联蛋白、线粒体NAD -依赖型苹果酶和磷酸核糖焦磷酸合成酶等。这些蛋白质的表达下调或缺失可能与线粒体提供能量不足而导致的花粉不能正常发育有关。线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC)这一重要蛋白质在YTA中的上调表达有可能与花粉败育过程中细胞的程序性死亡相关。     

施硫对'豫麦50'籽粒灌浆特性及产量的影响

选用弱筋小麦品种‘豫麦50’为材料,通过大田试验研究了较高供氮水平下（施纯氮330kg／hm^2）施用低量（S20kg／hm^2）、中量（S60kg／hm^2）和高量（S100kg／hm^2）硫肥对小麦籽粒灌浆特性和产量的影响。结果显示,不同施硫处理的小麦籽粒灌浆进程均呈“慢-快-慢”的S型曲线,拟合的Logistic方程决定系数均大于0．9932,并达到极显著水平;灌浆持续期（T）、渐增期平均灌浆速率（V1）,快增期和缓增期持续期（T2、T3）、灌浆期各阶段干物质积累量（m1、m2、m3）和理论最大千粒重（K）均随施硫量增加而提高,并以中硫处理的各项灌浆参数表现较优;中硫处理的千粒重（46．47g）和籽粒产量（7416．0kg／hm^2）显著高于低硫处理,极显著高于对照（不施硫）和高硫处理。表明在当前较高施氮水平下,每公顷施纯硫60kg可有效改善小麦灌浆特性,显著提高籽粒产量。     

高同型半胱氨酸血症对心肌梗死后心肌组织中SCF表达的影响

目的通过观察高同型半胱氨酸血症(HHCY)对心肌梗死后大鼠心肌组织中干细胞因子(SCF)表达的影响,探讨HHCY在心肌梗死(MI)后干细胞归巢并修复梗死心肌过程中的作用。方法饮食诱导大鼠HHCY的动物模型;随后建立大鼠MI模型;利用免疫组织化学染色及RT-PCR技术分别检测HHCY对MI后大鼠MI区域及MI灶周围心肌组织内SCF表达的影响。结果MI后大鼠MI灶周围心肌组织中SCF的表达增强(与假结扎组相比);高蛋氨酸饮食组大鼠MI灶周围心肌组织内SCF的表达显著减少(与对照组相比);补充叶酸降低了大鼠血清中同型半胱氨酸浓度,增强了MI灶周围心肌组织内SCF的表达。结论MI上调了MI灶周围心肌组织中SCF的表达,有利于干细胞的归巢并修复梗死的心肌;HHCY抑制了MI灶周围心肌组织内SCF的表达,从而减少由SCF所诱导的干细胞归巢到MI区域,进而抑制了梗死后心肌的修复。     

人胚胎干细胞培养系统的研究进展

人胚胎干细胞（hESC）具有永久的自我更新和多潜能分化能力,可在一定条件下定向分化为三个胚层的各种细胞。这些特性使其在再生医学（细胞治疗）、药物筛选及早期胚胎发育研究中具有重要的应用前景;但人胚胎干细胞培养系统中大量的动物源性物质和复杂的未知成份大大阻碍了其医学应用价值,所以建立一个没有动物源物质、成份确定的人胚胎干细胞培养系统足非常重要的。本文简要介绍了为适应hESC临床应用和基础研究的需要,改良其培养系统的研究进展。     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因在毕赤酵母中克隆与分析

目的:克隆丙型肝炎病毒核心蛋白基因及其上游DNA序列,为此基因的表达研究作准备。方法:用反转录和PCR方法从HCV的总RNA中扩增得到核心蛋白基因及其上游DNA序列,连接到pMD18-T载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒,测序证明正确后,再将目的基因在毕赤酵母中进行克隆,鉴定。结果:重组质粒转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论:应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HCV核心蛋白基因。     

磷细菌PB12菌株的选育及培养条件的研究

以PB-1P为出发菌株,经紫外线诱变,获得1株解磷高产菌株PB12。在以磷酸三钙为惟一磷源的培养基中接种PB12菌株,28℃,振荡培养5d,培养基上清液中磷含量达61.21mg/L,是出发菌株的2.03倍。同时研究了各种理化因素对PB12菌株生长的影响,确定了最佳培养条件,即玉米粉1.0%,豆饼粉2.0%,pH7.0,装液量为100mL(500mL三角瓶),36℃培养42h,有效活菌数可达10.2×108cfu/mL。     

大型医院信息化网络平台的建设

现代化医院需要一个能够承载生命信息的数字化网络平台,面临大量的设备和众多的应用系统,网络架构的先进性、可扩展性、稳定性、可靠性和安全性是必须的。以瑞金医院信息网络平台建设为例,提出了大型现代综合性医院网络建设的难点和要点,认为网络系统建设可采用模块化、层次化的结构,提高网络的可扩展性和可管理性,减少网络广播的危害性,同时对关键节点采用冗余设备进行备份,对关键应用系统采用QoS、负载均衡技术优化网络总体性能,可加强网络运行的稳定性和安全性。     

湖南省小溪国家级自然保护区杀虫植物资源调查研究

实地调查了小溪国家级自然保护区内的杀虫植物资源的种类、生境、利用价值及现状。结果表明,小溪自然保护区的杀虫植物资源十分丰富,有87科171属242种及变种。菊科等11科植物含有6种以上的植物,为该区的优势类群。简要介绍了保护区内重要的杀虫植物28科40种的杀虫作用及部位、植物类型、繁殖方式和药用部位。针对保护区内的杀虫植物资源的开发利用现状提出了建议。     

原子力显微镜观察丹皮多糖分子的形貌结构及自组装行为

运用原子力显微镜(Atomic Force Microscopy,AFM)技术对丹皮多糖的形貌结构进行研究。采用多糖水溶液液珠滴降法制样,AFM非接触模式(non-contact mode)扫描。AFM图像显示,丹皮多糖分子呈现近似球形的结构形貌,小球形颗粒直径为50 nm~80 nm左右,推测是丹皮多糖的基本结构单位。在一定浓度和条件下,丹皮多糖分子小球形颗粒可发生聚集,其中以直径约170 nm~220 nm的圈状和中空球聚集体结构较有代表性。将多糖稀溶液80℃加热,可促进多糖分子发生自组装,缔合形成长链超分子结构。超分子结构中的每一亚单位亦由小球形颗粒聚集紧缩而成。AFM图像研究表明丹皮多糖分子在水溶液中倾向采取球状或线团构象并通过链间氢键作用形成分子缔合组装。