大豆花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和其在大肠杆菌中的表达

通过多聚酶连锁反应(PCR),我们合成了包括病毒外壳蛋白基因在内的病毒基因组3’端区域,并完成了其全部序列分析,比较SMV(北京分离物)和SMv—N株的序列发现;外壳蛋白基因的核苷酸序列同源性达93．D％,其氨氢基酸序列同源性高达98．5％,就基因组3,端非编码序列而言,其同源性达88．8％。Western b1ot分析结果表明所克隆的cDNA片段在大肠杆菌JMl07中能表达正常的病毒外壳蛋白。     

艾滋病病毒蛋白酶高效表达载体及体外活性检测系统的构建

艾滋病是本世纪８０年代初发现的一种烈性传染病,５年病死率为１００％,致病因子为人免疫缺陷病毒,该病毒的蛋白酶在病毒复制在成熟中具有决定性的意义。由于目前国内外尚未获得艾滋病病毒蛋白酶的高效表达的重组子及活性检测系统,限制了它的研究与应用。本文利用ＰＣＲ技术修饰了艾滋病病毒蛋白酶的基因,使其具有便于克隆及表达用的限制酶切位点及转录终止码,并在其Ｃ末端设置了一个可用于检验该酶活性的特殊序列。ＤＮＡ序列     

猪生长激素cDNA在芽孢杆菌中的表达

利用随机克隆的枯草杆菌启动子-信号序列构建茅孢杆菌分泌载体pUS186。用限制酶将切除了信号序列的猪生长激素cDNA从质粒pLY3-PGH 604切下,亚克隆至pUS186,并在该cDNA的下游接上地衣杆菌α-淀粉酶基因的转录终止子,构建猪生长激素表达质粒pSGH 1864,将此质粒转化蛋白酶双缺陷的枯草杆菌DB104及短小茅孢杆菌289。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检出在发酵上清液中多出一条22kD的蛋白带,抗猪生长激素血清免疫印迹法证明这一蛋白带具有免疫活性,表明猪生长激素cDNA已在枯草杆菌及短小茅抱杆菌中表达。     

光和蛋白合成抑制剂对水稻RubisCO大、小亚基和RubisCO亚基结合蛋白基因表达的影响

水稻RubiCO在体内周转率很低,而其亚基结合蛋白(rbcBP)的周转却很迅速。水稻黄化幼苗随照光时间增加,在24h内Ru—bisCO蛋白量迅速上升,而 rbcBP在照光 6h后,其蛋白含量即维持恒定。 在转录水平上,RubisCO小亚基(rbcS)对光最为敏感;同样,rbcS的转录对蛋白合成抑制剂的反应也最为敏感。用亚胺环己酮和氯霉素处理水稻叶片,得到结果与光处理基本一致。 光与蛋白质合成抑制剂对rbcL、rbcS和rbcBP在基因表达各种水平上均有不同程度的影响,而以翻译水平上的调控较为灵敏。rbcS在基因表达调控上可能起某种支配作用;rbcBP与 rbcL、rbcS表达调控协调性不很紧密。     

单、双子叶植物的代谢物调节农杆菌Vir区基因表达的研究

本文研究了六种植物（三种单子叶植物,三种双子叶植物）愈伤组织的 渗出物和抽提物对农杆菌Vir基因表达的调节作用,其调节水平植物的不同而明显不同,但单,双子叶植物的代谢物对Vir基因表达的调节作用并非截然分开,即使在双子叶植物（如大豆）的抽提物与渗出物中也存在着抑制Vir基因表达的因子,而在单子叶植物（如玉米等）的抽提物与渗出物中也存在着促进Vir基因表达的调节因子,Vir位点的调节反应随渗出物与抽提物的种类不同而明显不同,不同Vir位点对同类渗出物或抽提物的反应也不同,渗出物对Vir基因表达的正调节效应优于抽提物,植物渗出物与AS对Vir区基因表达的调节并不表现简单的累加效应或协同作用,相反,在渗出物中还存在着不同程度阻抑AS对Vir基因表达正调节的因子。     

用酵母α因子启动子前导肽系统表达tPA

本文首次选用酵母α-因子启动子前导肽系统有效地表达了组织型纤溶酶原激活剂基因。我们的实验结果表明3′端不翻译区的长度对表达有影响。     

兔肝细胞色素b5在大肠杆菌中的表达

利用体外特定点突变技术,将原核生物核糖体结合位点及十碱基间隔子(spacer)引科兔肝经胞色素b_5 cDNA的5′端,并构建了一个兔红血球b_5cDNA克隆,重组入表达载体pKK223-3质粒中,在大肠杆菌中成功地表达了兔肝和红血球两种形式的b_5蛋白。产量分别为每毫升培养液1.5μg和4.5μg。     

光/暗对高粱叶片磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因表达的调节

高粱幼苗黄化叶片经照光转绿后,其PEP-Case活性提高4～15倍,mRNA含量提高了1.03倍,并测定出PEPCase mRNA的分子量为3.4kb。以等量的总RNA及mRNA进行体外翻译,发现转绿后PEPCase专一性翻译活性提高了51％～53％。这表明光照可以在转录水平上调节PEP-Case的基因表达。