农杆菌转化的植物细胞的若干特性

根癌农杆菌的质粒基因组中T-DNA在宿主细胞中的表达导致转化细胞具有以下特性:激素自主性生长、冠瘿碱合成、器官发生异常、特殊糖类的利用以及对某些氨基酸和碱基类似物具抗性等。深入揭示和认识这些特性有利于探讨外源基因在受体细胞中的表达与调控。     

植物组织中冠瘿碱合成酶活性检测的一种简便有效方法

由根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)感染引起的植物冠瘿瘤(crown gall)细胞除具激素自养性生长特性外,还具有一类特殊的基因产物,即冠瘿碱(opines)~[3]。常见的冠瘿碱主要有章鱼碱(octopine)和胭脂碱(nopaline)等。催化章鱼碱合成的酶为章鱼碱合成酶(oct-opine synthase),或叫Lysopine脱氢酶[D-(+)-lysopine dehydrogenase,简称LpDH]。催化胭脂碱合成的酶为胭脂碱合成酶(nopaline     

Ti质粒T区基因转移与整合分子机制的研究进展

由根癌农杆菌Ti质粒介导的转化系统现已发展成为向许多植物转移外源基因的有效途径。然而,长期以来,人们对Ti质粒T区基因（即T-DNA）转移、特别是整合的具体细节一直不甚了解。随着对Ti质粒分子生物学及其介导转化过程研究的广泛展开与不断深入,这一天更多然的基因转移与整合过程近几年来逐步被人们所揭示和认识。     

植物组织中冠瘦碱合成酶活性检测的一种简便有效方法

由根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) 感染引起的植物冠4瘤(crown gall)细胞除 具激素自养性生长特性外,还具有一类特殊的 基因产物,即冠瘦碱(opines)"'。常见的冠瘦碱 主要有章鱼碱(octopine）和胭脂碱(nopaline) 等。催化章鱼碱合成的酶为章鱼碱合成酶( octopine sy nthase),或叫Lysopine脱氢酶[D- （＋）一lysopine dehydrogenase, 简称LpDH] o 催化胭脂碱合成的酶为胭脂碱合成酶(nopaline sy nthase),或称胭脂碱脱氢酶(nopaline dehydrogenase, 简称NpDH)。即在NADH存在条 件下,LpDH催化丙酮酸与精氨酸的缩合反应, 形成章鱼碱;NpDH催化。一酮戊二酸和精氨酸 的缩合反应,形成胭脂碱。     

趋化因子受体CXCR4b在大肠杆菌中的高效表达、增溶及纯化

膜蛋白在细胞分化、信号转导等生理活动中发挥着重要作用,然而膜蛋白结构与功能的研究却受到高质量蛋白制备的严重制约。将斑马鱼趋化因子受体CXCR4b基因克隆到pMAL-p4x表达载体中,在大肠杆菌TB1中表达麦芽糖结合蛋白(MBP)-CXCR4b融合蛋白。通过系统优化其发酵表达条件,实现了CXCR4b的过量表达。最佳表达条件为:宿主菌选用大肠杆菌TB1,TB培养基,诱导剂IPTG浓度为0.5mmol/L,诱导时机为对数中后期。通过对10种不同表面活性剂的筛选,发现DM、FC-14和Brij35等表面活性剂对CXCR4b有较好的增溶效果。利用Ni2+亲和色谱和S200凝胶色谱两步纯化,得到CXCR4b的纯度可达90%以上。圆二色谱检测显示纯化的CXCR4b呈典型的α螺旋结构。     

单、双子叶植物的代谢物调节农杆菌Vir区基因表达的研究

本文研究了六种植物（三种单子叶植物,三种双子叶植物）愈伤组织的 渗出物和抽提物对农杆菌Vir基因表达的调节作用,其调节水平植物的不同而明显不同,但单,双子叶植物的代谢物对Vir基因表达的调节作用并非截然分开,即使在双子叶植物（如大豆）的抽提物与渗出物中也存在着抑制Vir基因表达的因子,而在单子叶植物（如玉米等）的抽提物与渗出物中也存在着促进Vir基因表达的调节因子,Vir位点的调节反应随渗出物与抽提物的种类不同而明显不同,不同Vir位点对同类渗出物或抽提物的反应也不同,渗出物对Vir基因表达的正调节效应优于抽提物,植物渗出物与AS对Vir区基因表达的调节并不表现简单的累加效应或协同作用,相反,在渗出物中还存在着不同程度阻抑AS对Vir基因表达正调节的因子。     

原生质体融合技术应用进展

本文着重介绍了原生质体融合技术在有关领域中应用的进展,分析了原生质体融合应用于作物改良的障碍及该领域今后的重点研究方向。     

一种检测转基因植物细胞中β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性的实用方法

APracticalMethodforDetectionofGUSActivityinTransgenicPlantCellsYinZhongchaoXuYaoYangFanLiBaojian(BiotechnolgyResearchCenter,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275)β－葡萄糖苦酸酶（GUS）基因是近年来在植物基因工程研究中应用得最为广泛的报告基因之一’‘’．其产物GUS活性的检测有多种方法,其中最常用的是组织化学染色法和荣光分析法．但前者为定性检测而且如操作不慎很容易产生假阳性,而后者虽可精确定量测定仅需要相应的配套仪器。我们采用的这种方法是首先将植物细胞粗提蛋白在非变性聚丙烯酚胺凝胶中进行…     

根癌农杆菌T-DNA在向日葵离体组织中的转移与表达

利用根癌农杆菌B6S3和T37菌株离体感染向日葵切伤的子叶、下胚轴外植体。感染处理的外植体与菌共培养三天后,在无激素条件下以60—96％的频率获得了离体转化的瘤组织。瘤组织在继代培养过程中具有激素自主性生长特性。在无激素培养基上瘤组织的生长速率显著高于正常愈伤组织。所有随机取样测定的瘤组织内均有相应冠瘿碱的存在。