基于CRISPR/Cas9系统的拟南芥双链结合蛋白AtHyl1基因编辑

RNA沉默是植物重要的抗病毒防御机制,双链RNA结合蛋白(dsRNA-binding proteins, DRB)是RNA沉默信号途径中的关键蛋白。DRB1/HYL1是拟南芥基因组编码的7个DRBs之一,本研究将人工合成含2个AtHyl1靶位点序列的串联t RNA-gRNA片段导入CRISPR/Cas9表达载体中,构建双靶点的CRISPR/Cas9表达载体,通过转化拟南芥dcl2drb4双突变体获得36株转基因阳性植株。对经测序分析可能已发生基因编辑的3株进行单克隆测序分析,测序结果表明均已发生编辑,获得了AtHyl1基因被编辑的拟南芥dcl2drb4突变体T_1代转基因植物。该结果为研究AtHyl1是否参与DCL4介导的抗病毒RNA沉默通路提供了帮助。     

陕西红碱淖棕头鸥孵卵行为

2014年5—6月,应用e-Science信息技术,对红碱淖棕头鸥的孵卵行为进行了研究。结果表明,不同孵化阶段昼夜间孵卵节律分别为:孵化前期换孵次数7.88±1.08(n=39)、5.00±0.89(n=39),坐巢方向变换27.75±2.04(n=39)、14.37±1.72(n=39),翻卵次数27.13±2.02(n=39)、11.25±1.08(n=39);孵化中期换孵次数3.11±0.19(n=65)、1.32±0.11(n=65),坐巢方向变换23.37±0.91(n=65)、10.95±0.86(n=65),翻卵次数21.11±1.11(n=65)、8.47±0.77(n=65);孵化后期换孵次数3.17±0.22(n=42)、0.95±0.05(n=42),坐巢方向变换20.06±1.46(n=42)、6.62±0.84(n=42),翻卵次数22.39±1.78(n=42)、5.33±0.55(n=42)。当大风或大雨时,对同一孵化阶段的换孵次数、坐巢方向变换和翻卵次数均存在极显著差异(P0.01)。双亲交替换孵主要集中于04:00—10:00、12:00—14:00等时间段内。孵化后期,亲鸟坐巢时长达到(713.29±40.62)min(n=42)。棕头鸥通过调节昼夜间的孵卵节律来控制卵的温度,以保证昼夜间卵胚胎的正常发育。同时与同域分布繁殖的遗鸥的孵卵节律进行了比较。     

标准四联法对幽门螺旋杆菌相关性消化道溃疡的临床研究

目的观察标准四联对幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)相关性消化道溃疡的临床效果和安全性。方法选取我院2013年5月至2014年6月收治的H.pylori相关性消化道溃疡患者160例,按照随机数字法随机分为观察组和对照组,每组80例。观察组采用兰索拉唑、阿莫西林、克拉霉素联合胶体果胶铋的标准四联法治疗;对照组采用兰索拉唑、阿莫西林、克拉霉素标准三联法治疗,对比分析两组临床症状缓解率、溃疡愈合率、H.pylori根除率及不良反应情况。结果两组治疗1周的临床症状缓解率相比差异无统计学意义(χ2=2.064,P0.05);治疗4周后观察组的临床症状缓解率为96.25%,显著性高于对照组的81.25%(χ2=9.014,P0.05)。观察组溃疡愈合率为88.75%,显著性高于对照组的77.5%(χ2=4.449,P0.05);观察组H.pylori根除率为91.25%,显著性高于对照组的76.25%(χ2=6.613,P0.05)。两组治疗期间均未发现肝肾功能异常及其他严重不良反应;两组不良反应发生率相比差异无统计学意义(χ2=0.278,P0.05)。结论标准四联对H.pylori相关性消化道溃疡的临床症状缓解率高、H.pylori根除率高、溃疡愈合率高,安全性高,值得临床推广。     

阿泰宁联合三联疗法根除幽门螺杆菌的疗效观察

目的探讨酪酸梭菌活菌胶囊(阿泰宁)联合三联疗法根除幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的疗效。方法将223例经胃镜检查行快速尿素酶试验阳性的慢性胃炎患者,随机分为A、B、C三组,A组:三联疗法(埃索美拉唑肠溶片+阿莫西林+呋喃唑酮,疗程10 d);B组(三联疗法+阿泰宁,疗程10 d);C组(三联疗法+阿泰宁10 d后再继续单独服用阿泰宁20 d),三组疗程结束后停药4周再行14C-呼气试验检测H.pylori,比较各组H.pylori的根除率、消化道症状缓解率以及不良反应发生率,并对治疗过程中影响疗效的相关因素进行分析。结果 (1)共208位患者完成随访,对A、B、C三组的根除率分别行ITT分析和PP分析:结果显示B组根除率(77.3%、84.1%)稍高于A组(72.2%、77.6%,P0.05),C组根除率(89.5%、94.4%)均高于A、B组(P0.05);(2)对三组消化道症状缓解率进行PP分析:B组症状缓解率(81.2%)稍高于A组(74.6%,P0.05),C组(93.1%)明显高于A、B组(P0.05);(3)对三组总不良反应发生率进行PP分析:B组(11.6%)低于A组(19.4%,P0.05),C组(8.3%)均低于A、B组(P0.05);对三组胃肠道不良反应发生率进行PP分析:A组(14.9%)明显高于B组(8.7%,P0.05)及C组(4.2%,P0.05);(4)对A、B、C三组影响因子行单因素分析和多因素Logistic回归分析均显示吸烟患者的H.pylori根除率低于不吸烟患者。结论阿泰宁序贯联用三联疗法10 d后,继续单独服用阿泰宁20 d可明显提高H.pylori根除率,增加消化道症状缓解率,减少抗生素引起的胃肠道不良反应,值得临床推广。此外,发现吸烟可降低H.pylori根除率。     

研究: 肺炎衣原体抑制LXRα-ABCA1途径促进巨噬细胞脂质蓄积

为探讨肝X受体α (LXRα)-三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)途径在肺炎衣原体 (C. pneumoniae)促巨噬细胞脂质蓄积中的作用和机制,以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为模型,采用高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,RT-PCR检测ABCA1和LXRα mRNA的表达,蛋白质印迹检测ABCA1和LXRα的蛋白质表达;使用LXRα的特异性激动剂T0901317对细胞进行预处理,再观察上述指标的变化．结果显示,C. pneumoniae可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量增加,抑制胆固醇外流,降低细胞ABCA1和LXRα的表达;使用ABCA1激动剂8-溴-环磷酸腺苷预处理细胞或LXR激动剂T0901317预处理细胞后,可明显减弱C. pneumoniae对THP-1细胞ABCA1的表达抑制,促进细胞胆固醇流出,降低细胞内胆固醇的含量．结果提示,C. pneumoniae促进巨噬细胞脂质蓄积及胆固醇流出障碍,其机制可能与LXRα-ABCA1途径有关．     

研究: 普罗布考通过调控ABCA1、SR-BⅠ、ABCG5、ABCG8表达及抗炎作用抑制高胆固醇血症兔动脉粥样硬化

作为一种有效的降脂药物,普罗布考能够降低血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平并抑制动脉粥样硬化,但其机制尚未完全阐明．本研究的目的旨在进一步阐明普罗布考降脂及抗动脉粥样硬化的机理．将新西兰白兔随机分为4组：正常饮食组、正常饮食+普罗布考组、高脂饮食组(HFD组)、高脂饮食+普罗布考组(HFD+P组)．结果显示,处理7周后,与HFD组比较,HFD+P组动脉粥样硬化病变程度、肝脏脂质蓄积明显减轻,血浆甘油三脂、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及HDL-C 水平降低,肝脏中清道夫受体-BⅠ(SR-BⅠ)以及肝脏与小肠中三磷酸腺苷结合盒转运体(ABC)G5(ABCG5)、ABCG8表达上调,肝脏中ABCA1表达下调,主动脉弓与血浆肿瘤坏死因子α、白介素1、白介素6、单核趋化蛋白1水平降低．这些结果表明普罗布考的抗动脉粥样硬化作用可能与其调控ABCA1、SR-BⅠ、ABCG5、ABCG8表达及抑制促炎介质的分泌有关．     

逆转录病毒载体pOZ-KLF5的构建及鉴定

为研究KLF5的相互作用蛋白从而深入探索其生物功能,构建了C端带有FLAG、HA、6x His三标签的p OZ-KLF5真核表达逆转录病毒载体。p OZ-KLF5载体可通过一次转录得到双顺反子转录单位,即一个转录物能表达两种独立存在的蛋白质:三标签融合蛋白KLF5-3x Tag和筛选标记——白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)。通过偶联IL-2Rα抗体的磁珠成功筛选出KLF5-3x Tag表达阳性的293T细胞,经Western-blot检测细胞内KLF5-3x Tag表达情况及其对293T细胞增殖及周期的影响,发现KLF5-3x Tag能够促进细胞克隆的形成并使S期细胞增多,且可被已知E3泛素连接酶WWP1降解,与已有报道一致。进一步通过免疫沉淀实验证明了与KLF5融合的标签的免疫反应性。该质粒的成功构建为研究KLF5相互作用蛋白及深入探索其生物功能奠定了基础。     

戈宝麻的三大价值

<正>生态价值戈宝麻是多年生宿根草本植物,宿根正常可存活30年左右,根系发达,新旧水平根每年萌发新株,连绵不断,具有极强的抗逆性,是美化荒漠、防风固沙、涵养水源、改善局域环境最好的生态植物和功效显著的健康食物。戈宝历吋12年,实施了前人未倣过的人工生态恢复工程总计18万亩,为新疆乃至中国荒漠化防治及传统产业转型建立了示范。     

三阴乳腺癌的异质性及靶向治疗

三阴乳腺癌指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)均为阴性的乳腺癌,占乳腺癌的15%~20%,具有侵袭转移率高、总生存率低、预后差等特点。三阴乳腺癌有很强的异质性,根据其基因表达特征,可分为基底细胞样1型、基底细胞样2型、间质型、间质干细胞型等7个亚类。由于其不表达ER、PR和HER-2,因此内分泌治疗和抗HER-2治疗无效,通常以化疗作为主要治疗方法。近年来,对其靶向治疗如EGFR、PARP、SRC等靶向治疗已有大量研究与应用报道,并显示了一定的治疗效果,提示靶向治疗是未来三阴乳腺癌的治疗方向。我们简要综述三阴乳腺癌的异质性、靶向治疗及预后诊断。     

PEG修饰有效提高热休克蛋白gp96抑制性多肽抗乳腺癌的功能

乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的肿瘤,严重威胁女性生命健康。其中三阴性乳腺癌因其特殊的生理学特点,成为乳腺癌中预后最差的亚型,因此急需寻找新的靶点进行治疗来提高患者预后及生存率。多项研究表明,热休克蛋白gp96在多种癌细胞的膜表面过表达,且胞膜gp96与乳腺癌的恶性程度与不良预后密切相关,因此其可能是乳腺癌治疗的新靶点。前期研究根据gp96的结构,开发一种靶向胞膜gp96 ATP结合区的α螺旋肽p37。虽然p37多肽作用位点专一,但其在体内容易被降解,因此本研究将多肽的N端或C端分别偶联PEG₂₀₀₀或PEG₅₀₀₀,得到4个具有抑瘤功能的PEG多肽：mPEG₂₀₀₀CY、mPEG₅₀₀₀CY、mPEG₂₀₀₀LC和mPEG₅₀₀₀LC。它们可以抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖和侵袭,其中抑制效果最明显的是mPEG₂₀₀₀CY。经测定,mPEG₂₀₀₀CY在体内的半衰期较多肽p37明显延长,且有效抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231小鼠移植瘤的生长。这为研发新型抗乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌的靶向药物提供了依据。