HPLC检测肠灌流模型中PMP衍生化葡寡糖含量的方法学建立

目的:建立肠灌流模型中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化葡寡糖含量的检测方法,并进行方法学考察.方法:采用HPLC法测定,色谱条件为,色谱柱:phenomenex C18(250×4.60mm,51μm);流动相:100mMNaAc/乙腈(梯度洗脱);流速:1.0mL·min,-1;紫外检测波长245nm;进样量:20μL;柱温:40℃.结果:PMP衍生化葡寡糖在此色谱条件下获得良好分离,肠灌流液、血浆样品及酚红对10种化合物的检测均无影响.结论:该方法准确可靠,重复性良好,为寡糖的吸收研究提供了技术支持.     

慢病毒载体介导的脂肪细胞SOCS-3RNA干扰及对瘦素反应的研究

体内存在瘦素抵抗是大多数肥胖者的共同特征,但如何缓解瘦素抵抗目前还无有效方法.通过应用慢病毒载体介导的RNA干扰技术对大鼠脂肪细胞中瘦素信号转导通路的负反馈抑制因子—细胞因子信号转导抑制因子-3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS-3)基因进行敲减,观察其对大鼠重组瘦素作用的反应.研究发现,阴性对照慢病毒和SOCS-3shRNA慢病毒对成熟脂肪细胞的感染率约为80%.利用real-time PCR和Westernblot法检测发现SOCS-3 shRNA慢病毒通过在成熟脂肪细胞内表达shRNA而造成SOCS-3基因在mRNA和蛋白水平的敲减,有效率分别为72%和57%;经50nmol/L瘦素处理6h后,感染阴性对照病毒的脂肪细胞SOCS-3mRNA表达有明显升高(P0.05),而感染SOCS-3 shRNA慢病毒的脂肪细胞SOCS-3mRNA表达则无明显变化(P0.05).结果表明,利用SOCS-3shRNA慢病毒去敲减脂肪细胞中SOCS-3的表达可能对于解除肥胖者外周瘦素抵抗具有一定的作用.     

北戴河朱鹮野化种群非繁殖期日间活动时间分配和行为节律

于2019年7月-2020年1月对北戴河朱鹮野化种群非繁殖期的日间活动时间分配和行为节律进行了分析。结果表明,休息（41.8%）、觅食（39.7%）和理羽（13.3%）是北戴河朱鹮非繁殖期的主要行为。在行为节律上,有3个觅食高峰、2个休息高峰和2个理羽高峰。成鸟和幼鸟行为分配相似,但成鸟的警戒和社群等其他行为比例显著较高。与野生种群相比,北戴河野化种群的觅食时间显著较少,主要原因是野生个体需要花费较多时间搜寻食物,且飞行等活动的能耗较高。朱鹮在冬季的休息和理羽行为比例高于夏秋季,觅食行为则相反,这样可以在低温和大风天气降低能耗,是对北戴河气候环境的有效适应。为了提高朱鹮对多种气候环境的适应能力,为今后北戴河朱鹮的再引入奠定基础,我们建议在冬季要确保朱鹮有充足的适宜觅食地,同时在野化网笼中进行必要的环境丰容,如在网笼内增加常绿树种和阔叶树种,部分侧网上安装防风板,或在网笼中设置防风避寒的伞棚等设施,以供朱鹮进行选择。     

梨树弃枝粉碎还田对梨园土壤理化性质和梨生长的影响

以梨树品种‘金蜜梨’为对象,于2017-2018年进行梨树枝条粉碎覆盖还田试验,设置不还田(0 kg·plant~(-1),对照)、低量还田(4 kg·plant~(-1))、常规量还田(8 kg·plant~(-1))和高量还田(12 kg·plant~(-1))4个施用量处理,考察不同施用量处理对梨园土壤矿质元素含量、土壤微生物数量、土壤酶活性、梨树新生枝条生长状况、梨树叶片生长状况和梨果实品质等的影响,探讨梨树冬季修剪废枝还田的效果和资源化利用途径。结果显示:(1)梨树枝条常规量还田处理使梨园土壤中有机质、全锰、全铁、全铜、全锌、全硼、全钙、全镁、全硫、全氮、硝态氮、速效钾和有效磷含量均显著提高,梨园土壤pH值显著上升;而高量还田处理使土壤中全锰、全锌以及硝态氮含量显著降低,低量还田处理也使土壤中全硫、全磷和有效磷含量显著降低。(2)常规量还田处理显著增加了梨园土壤真菌和放线菌数量,同时显著提高了土壤过氧化氢酶活性;高量还田处理使土壤过氧化物酶活性显著下降,但显著增加了土壤中细菌数量。(3)梨树新生树枝直径在低量还田处理下显著增加,但其叶片百叶厚、百叶重、叶绿素含量和类胡萝卜素含量在各处理组间均无显著变化。(4)常规量还田处理使梨果实单果重、果实纵横经、Vc含量以及果实硬度显著增加,但果实的可滴定酸含量显著下降,促使果实品质明显提高。研究表明,冬季适量梨树枝条粉碎覆盖还田能显著提高梨园土壤矿质元素含量和有机质含量,有效改善土壤酸化状况,增加土壤真菌和放线菌数量及其相关土壤酶活性,促进梨树新生枝条生长,提高果实品质;该试验条件下短期内以改善土壤综合性质为目的最佳枝条还田量为8 kg·plant~(-1)。     

朱鹮野化种群对冬季低温的行为响应

低温对鸟类的生长发育、新陈代谢和生活状态有显著的影响,鸟类往往通过改变行为模式来适应温度的变化。朱鹮(Nipponia nippon)是东亚特有的濒危鸟类,2018年从秦岭南麓的陕西洋县引入到河北北戴河,建立了全球纬度最高的野化种群。本文以北戴河和洋县两个野化种群为研究对象,采用瞬时扫描法观察分析了季节和温度等因素对朱鹮休息行为的影响。结果表明,双腿站立露喙是朱鹮在游荡期最常见的休息行为(70.9%),但在越冬期显著降低(55.6%),而单腿站立和隐喙行为比例相应升高。温度对双腿站立隐喙、单腿站立露喙和单腿站立隐喙3种行为的比例有显著影响。可见,朱鹮在冬季通过增加保护裸露部位的行为比例来适应低温。在冬季,随着温度的下降,朱鹮趴卧在树干上的夜宿行为比例逐渐增加,而这一行为在白天没有记录到。温度对成鸟和幼鸟冬季的休息行为有显著影响。由此表明,趴卧行为很可能是朱鹮对极端耐受低温的一种应对,在保护监测过程中需警惕。朱鹮在北戴河越冬过程中没有使用网笼中的遮挡伞棚和庇护场所,表明其能够自主适应-20℃的低温。为了确保野化朱鹮顺利越冬,建议在野化网笼中增加一些松科等常绿树种,为朱鹮提供更加优良的夜宿环境,并用稻草搭建风挡,减少夜间大风的负面影响。     

苏北地区白羽肉鸡父母代种鸡及其商品鸡中沙门氏菌的分离、鉴定与生物特性

【背景】沙门氏菌是一种重要的人兽共患食源性致病菌,控制沙门氏菌在动物中的感染和在食品生产链中的污染对于畜牧生产、公共卫生和食品安全具有重要意义。【目的】调查苏北地区某白羽肉鸡父母代种鸡及其商品鸡的沙门氏菌感染和流行情况,为其沙门氏菌防治提供参考依据。【方法】于2018?2019年从江苏泰州、宿迁、盐城、徐州、连云港等地区分别采集某白羽肉鸡父母代种鸡场产蛋鸡及其商品鸡场1?2日龄弱雏和10日龄雏鸡的泄殖腔拭子样品共360份,进行沙门氏菌的分离与鉴定,用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测,通过多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对分离菌株的亲缘关系进行研究。【结果】从120份父母代产蛋鸡分离到3株沙门氏菌,从120份商品代1?2日龄弱雏分离到25株沙门氏菌,从120份商品代10日龄雏鸡分离到82株沙门氏菌。分离的沙门氏菌对多粘菌素B、亚胺培南、多西环素、甲氧苄啶、替加环素、氟苯尼考、头孢噻肟、恩诺沙星表现为全部敏感,对呋喃妥因、青霉素、利福平、利奈唑胺、万古霉素均表现为全部耐药;对阿莫西林耐药的菌株有30株(占27.27%),敏感的有80株(占72.73%)。耐药基因的PCR检测结果显示：β内酰胺类耐药基因blaTEM存在于所有沙门氏菌分离株中,但其他常见耐药基因在本研究的分离株中未发现。通过对分离菌7对管家基因进行PCR扩增、测序和MLST分型,发现所有沙门氏菌分离株的ST型均为ST11,属于肠炎沙门氏菌。MLST分型结果结合药敏试验结果表明,分离的沙门氏菌属于同一进化系统,具有相同或相似的来源。【结论】被调查商品鸡群的肠炎沙门氏菌感染很可能是其同一来源的父母代种鸡场垂直传播所致,这为该地区白羽肉鸡的沙门氏菌防治提供了参考。     

肾盂灌注冲洗并发全身炎症反应综合征猪模型的建立

目的:建立一种肾镜下肾盂灌注冲洗并发全身炎症反应综合征(SIRS)的猪模型。方法:家猪10头,随机分为假手术组和模型组,每组按时间点分为基础状态(Basic)、术后0h、术后6h、术后12h和术后24h 5个亚组。猪肾穿刺造瘘,利用自体盲肠内容物加入肾盂冲洗液中,模拟经皮肾镜取石术(PCNL)持续肾盂灌注冲洗1h。每个时间点观测肛温(T)、呼吸(RR)、心率(HR);采血行血细胞计数分析(WBC、RBC、PLT)、肾功能(Cr、BUN、β2-MG)测定、血清IL-6、IL-10、TNF-α含量测定;用光镜和电镜观察肾脏组织病理变化。结果:模型组在术后6 h-24 h各项指标与假手术组相比变化明显,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。模型组肾脏组织光镜和电镜下观察病理切片均较假手术组有明显的形态学改变。结论:本模型较好地模拟了临床病人PCNL并发SIRS的病理生理过程,为进一步研究其发病机制和预防治疗具有重要意义。     

广东鼎湖山国家级自然保护区爬行动物多样性与保护

2006～2011年采用野外调查和访问调查相结合的方法,对广东鼎湖山国家级自然保护区爬行动物进行了专项调查研究。迄今,该保护区已记录爬行动物2目12科54种,其中6种为本次调查发现的新纪录,分别是截趾虎Gehyra mutilata、丽棘蜥Acanthosaura lepidogaster、棕黑腹链蛇Amphiesma sauteri、黑领剑蛇Sibynophis collaris、细白环蛇Lycodon subcinctus和乌龟Mauremys reevesii。本次调查野外发现爬行动物共38种,其中包括珍稀濒危物种平胸龟Platysternon megacephalum,16种文献有记载的爬行动物在本次调查中未发现。访问调查发现6只四眼斑水龟Sacalia quadriocellata,很可能来自鼎湖山。基于调查结果,对该保护区爬行动物多样性及受胁因素进行了探讨,并提出了4点保护管理建议。     

猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆与表达

目的克隆猪白细胞介素18(pIL-18)成熟蛋白基因,并在植物乳杆菌(Lb.plantarum)NC8中进行表达。方法通过RT-PCR方法从猪脾脏细胞中扩增出pIL-18成熟蛋白基因,克隆到T载体pMD18-T后测序;将阳性基因片段克隆至大肠埃希菌-乳酸菌穿梭表达载体pSIP-409构建重组表达载体pSIP-409-IL-18,进行酶切和PCR鉴定;应用电穿孔技术将其转化至Lb.plantarum NC8中,经SppIP诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western-blot分析。结果经测序,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为579 bp,编码193个核苷酸;酶切和PCR鉴定证明成功构建了重组表达载体pSIP-409-IL-18;SDS-PAGE及Western-blot分析表明重组菌表达了18 kD的融合蛋白,该重组蛋白可以与鼠抗猪IL-18多克隆抗体反应。结论成功克隆了pIL-18成熟蛋白基因,并获得有生物活性的pIL-18重组乳酸菌,为研制开发IL-18重组乳酸菌制剂奠定基础。     

Angeli盐对二氢硫辛酰胺脱氢酶的可逆性灭活作用(英文)

二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLDH)是线粒体3个α-酮酸脱氢酶复合物(丙酮酸脱氢酶复合物、α-酮戊二酸脱氢酶复合物、支链氨基酸脱氢酶复合物)的关键成分,属于吡啶依赖性二硫化物氧化还原酶类,对活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS)和活性氧自由基(reactive oxygenspecies,ROS)造成的氧化修饰非常敏感。本研究探索由Angeli盐所产生的RNS对DLDH的修饰作用及机制。将大鼠脑线粒体分离,与不同浓度的Angeli盐作用,应用分光光度计、蓝色胶、基于二维电泳的蛋白质组学等手段,测定DLDH酶活性。结果显示,Angeli盐呈浓度依赖性方式灭活DLDH,过氧亚硝酸盐在同样条件下对DLDH酶活性无抑制作用,说明Angeli盐对DLDH的作用可能是非随机的。由于Angeli盐在生理pH条件下可分解为硝基阴离子(nitroxyl anion,HNO)和一氧化氮(nitric oxide,NO),故进一步分析了Angeli盐对DLDH的灭活作用是否由HNO引起,结果证实确实如此。最后,二维电泳Western blot结果显示,Angeli盐对DLDH的灭活伴随着DLDH蛋白质的S-亚硝基硫醇形成,提示S-亚硝基硫醇化可能是导致DLDH酶失活的原因。综上,本研究为研究Angeli盐灭活DLDH的机制提供了新证据。