针对Fbxl5基因关键结构域F-box的Crispr/Cas9打靶有效性分析

为了在动物体内研究Fbxl5基因是通过什么机制导致斑马鱼心脏出现突变表型,本文利用近几年兴起的CRISPR/Cas9打靶技术建立斑马鱼Fbxl5基因敲除品系。本文将打靶位点定位于Fbxl5的F-box结构域,也就是Fbxl5的第五号外显子上。首先经过基因打靶网站分析筛选出针对Fbxl5基因F-box结构域最适合的打靶位点,扩增出Fbxl5基因CRISPR/Cas9打靶双链DNA,并转录为RNA,与Hcas9共注射至斑马鱼胚胎。最后,在注射48 h后对Fbxl5基因CRISPR/Cas9打靶的有效性进行检测。首先在注射48 h之后收集胚胎提取基因组DNA,用特异性引物进行PCR扩增;将纯化后的Fbxl5基因PCR产物连接到p MD18-T载体,再经质粒提取,测序分析,通过与WT斑马鱼基因组序列进行比对发现Fbxl5-9号在PAM序列AGG下游缺失了4个碱基。证明该CRISPR/Cas9系统在敲除心脏发育候选基因Fbxl5是有效的,该研究为最终获得Fbxl5基因敲除斑马鱼奠定了良好的基础。     

高效回收苏云金杆菌质粒DNA的方法研究

介绍三种简易、快速和高效回收苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt)质粒DNA的方法。这些方法省时、经济、适用范围广,回收的Bt质粒DNA质量高,可直接用于各种分子克隆操作。     

植酸酶及其基因工程研究进展

植酸酶可添加于食品与饲料中,能消除因不能降解的植酸所引起的抗营养作用,提高机体对蛋白质及多种微量元素的利用率,降低粪便中磷的含量,从而减少环境中磷的积累污染,有利于保护生态环境。弄清植酸酶的性质、基因结构和功能,了解其基因工程的研究进展,不仅具有重要的理论意义,而且在开发研究植酸酶制剂用于饲料、食品和医药等方面具有重要的实践价值。本文谨对植酸酶的性质、基因结构和功能及其基因工程的研究进展做一综述,并探讨了植酸酶的应用前景。     

苏云金杆菌4.071 8菌株杀虫晶体性质的研究

研究了苏云金杆菌4．071 8菌株晶体的分离及其在电镜下的形态结构,并通过SDS－PAGE对其杀虫晶体蛋白进行了分析,证明了4．071 8菌株晶体有立方体型和双金字塔型两种,分别由原毒素CryⅠ及CryⅡ组成,该菌对鳞翅目和双翅目昆虫均有毒杀作用。     

上海青浦8.5kaB.P.以来植被演变与气候波动

钻孔取自上海青浦县赵巷镇,柱长19.8m,5个14C年龄(AMS测定)年代跨度从13460±60aB.P.到2660±60aB.P,但缺失全新世早期沉积。对15m以上(8.5aB.P.)部分系统采集了35孢粉样品,样品分辩率在150a左右(少数样品除外);通过有序分割并综合图谱特征划分出7个孢粉带和2个亚带,据此恢复和重建了本区8.5kaB.P以来植被变化和气候波动历史。具体结果为与现今气候相比,8.5aB.P.～8.2kaB.P.为冷干期,但气候呈上升趋势,地带性植被为含常绿阔叶树种的落叶阔叶林;8.2kaB.P.～8.0kaB.P.为暖湿期、常绿阔叶林,气候处于峰值,温度高于现今2℃左右,降雨量高于现今400mm左右;8.0kaB.P.～7.6kaB.P.为冷干期、落叶阔叶和针阔混交林,气候处于谷值,温度低于现今2℃左右,降雨量少于现今400mm左右;7.6kaB.P.～6.2kaB.P.为暖湿期、常绿阔叶林或常绿、落叶阔叶混交林;6.2kaB.P.～4.0kaB.P.为温干期、含常绿阔叶树种的落叶林或针阔混交林;4.0kaB.P.～3.0kaB.P.为温凉略湿期、含常绿阔叶的落叶阔叶林;3.0kaB.P.～1.5kaB.P.为暖湿期、常绿阔叶林,但2.6kaB.P.以来又有变冷趋势。 文中还对常绿阔叶木本孢粉与总木本孢粉的比值(E/W)的生态意义进行了讨论。     

复合菌株发酵猪血粉的条件研究*

利用筛选出的2株高产蛋白酶的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株AS100、AS102作猪血粉发酵的主发酵菌株,配以1株酵母菌(Saocharomyces cereisiae)菌株Y113和1株细菌(Bacilus sp．)菌株Asp007为辅助菌株,研究了这四株菌的产酶性能,同时确定了它们在发酵血粉过程中的一系列参数。通过猪血粉发酵,获得了一种高蛋白发酵饲料,其香味浓郁,蛋白质含量高达69％,且富含游离氨基酸,VitD3、烟酸等维生素及Fe等无机元素,可作为禽畜高蛋白源或饲料添加剂。     

苏云金杆菌4.0718质粒上杀虫晶体蛋白基因的PCR分析

苏云金杆菌（Bacillus Thuringiensis)4.0718由本实验室选育是对鳞翅目（Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒,电泳纯化后获得了其4种不同分子量的质粒P1,P2,P3,P4。利用序列分析软件对已知的cryⅠ类型基因进行阵列比较,根据其高度保过区域设计了1对通用引物,对cryⅠ类型基因的扩增产物对277bp左右的片段,用此引的对Bacillus thuringiensis 4.0718的4种不同质粒进行了PCR分析,发现质粒P1,P2,P3扩增阳性,都产生了277bp的扩增片段,而质粒P4没有扩增产物,这为进一步的基因定位打下了基础。     

我国电子商务发展策略分析

随着互联网环境的成熟,电子商务已融入我们的衣食住行各个方面,为我们的各个方面都带来了便利,但同时也存在弊端;为进一步了解电子商务的发展,实施有效的策略尽量避免弊端的出现,我们从电子商务发展、资源扩张、资金成本、人员培训、营销手段与风险几个方面分析电子商务发展策略。