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81.
人乳铁蛋白基因在烟草中的表达及抗细菌与病毒的能力 总被引:5,自引:0,他引:5
从人血液中性白细胞中分离细胞总RNA,用oligo(dT) 为引物进行cDNA 第1 条链合成,再用乳铁蛋白cDNA 的特异性引物进行聚合酶链反应(PCR) ,分两段合成并拼成完整的乳铁蛋白cDNA。核苷酸序列测定证明,该cDNA 所编码的氨基酸与前人论证的人乳铁蛋白的氨基酸序列完全一致。将该cDNA 构建成植物表达载体p35ShLFc,经根癌农杆菌LBA4404 感染烟草叶盘,获得具有卡那霉素抗性的烟草植株,PCR检测和Southern杂交表明,人乳铁蛋白基因已整合到烟草基因组中。Northern 杂交与Western 免疫印迹分析,检测到人乳铁蛋白基因在转化烟草中表达。体外实验证明,人乳铁蛋白基因在烟草中的表达产物对植物致病菌烟草火叶病菌、水稻白叶枯病菌有一定抑制作用 相似文献
82.
基因枪法转化籼稻胚性愈伤组织获得可育的转基因植株 总被引:22,自引:0,他引:22
以籼稻胚性愈伤组织作为基因枪法转化的靶材料,建立了可重复的、高效的籼稻转化系统。从籼稻成熟胚诱导生长3 ̄4周的愈伤组织,经过2 ̄6周继代培养后,可以形成足够量的颗粒状胚性愈伤组织。用含有bar基因和B.t.δ-内毒素基因的质粒pFWZ16轰击转化胚性愈伤组织,在含2 ̄4mg/L Basta的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养,并通过干燥处理增加再生频率和出苗数。从接种到获得转化小植株只需要4 相似文献
83.
84.
85.
用使质粒pKU3所携带的玉米Ac因子的5'末端和中间编码转座酶的基因片段分别发生缺失的方法构建成质粒pKU3(△B)和pKU3(△H)。质粒所携带缺失的Ac因子单独存在时都无自主转座能力,但当Ac(△H)和Ac(△B)共存于一个细胞时,由于Ac(△B)产生转座酶的互补作用促使Ac(△H)恢复转座能力,而当Ac(△B)和Ac(△H)因子被分离后即获得Ac(△H)因子的稳定插入突变株,它可克服因突变不稳定而给用转座因子标签法分离基因所造成的困难。将双因子系统导入烟草原生质体并获得再生植株,从而选得卡那霉素抗性植株,显示Ac(△H)因子已经从原质粒上的NPTⅡ前导顺序中切离。Sortharnblot和PCR分析表明:Ac(△H)和Ac(△B)因子已经整合在转化烟草的基因组并能遗传至F1和F2代植株中;有些植株后代中已检测不到Ac(△B)因子的存在,说明它们的Ac(△B)因子已与Ac(△H)因子相分离;各转化植株中Ac(△H)因子在基因组中的插入拷贝数从一个到几个不等;初步显示Ac(△H)因子多数插入或转座在基因组的结构基因中。 相似文献
86.
一个能与水稻未成熟种子核蛋白特异结合的31bp的DNA片段 总被引:1,自引:0,他引:1
水稻蜡质基因5'上游序列中有5个能与水稻胚乳核蛋白结合的片段,其中HinfId和RsaIe片段有部分重叠,而重叠部分含AACGT顺序。按重叠区上下游顺序合成了其中含有3次重复的AACGT顺序的31bp寡核苷酸,并以此为探针进行凝胶滞后实验,表明它不仅能与未成熟水稻种子的胚乳核蛋白特异结合,而且也与HinfId和RsaIe片段有强烈的竞争作用。因此31bp顺序中含有与水稻胚乳核蛋白专一结合位点,从而有可能应用此31bp的寡核苷酸作探针来分离编码蜡质基因的调控蛋白基因。 相似文献
87.
88.
89.
Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究 总被引:15,自引:1,他引:14
利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增人二磷酸核苷激酶A亚基(NDPK-A)基因,即nm23-H1/NDPK-K基因的编码序列,经序列分析后,定向克隆于表达质粒载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中高效表达出重组人NDPK-A.表达产物为可溶性的非融合蛋白,占菌体总蛋白42%.斑点ELISA法鉴定表明表达产物与NDPK-A标准抗血清呈阳性反应.以DEAE纤维素弱阴离子交换层析、CibacronBlue染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化rNDPK-A,得纯度为96.7%的目标蛋白.以反相高效液相色谱法进行酶活性分析,表明纯化的rNDPK-A能催化ATP+UDP=ADP+UTP的反应,比活性为800U/mg蛋白. 相似文献
90.
根癌农杆菌介导的水稻高效转化系统的建立 总被引:4,自引:0,他引:4
比较了影响根癌农杆菌转化水稻的各种因素后,建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。按该体系,水稻品种中花11号预培养4d的幼胚经农杆菌EHA105/pCAMBIA1301感染后,具有GUS基因瞬间表达的幼胚比例在50%以上,最高可达90%;按产生潮霉素抗性愈伤和转基因植株的比例计算,转化率分别达到87.6%和64.6%。转基因植株总DNA的Southern杂交分析表明T-DNA上的外源基因已整合进了水稻基因组,且在大多数转基因植株中表现为单拷贝插入;遗传分析证明T1代的表型分离符合孟德尔法则。此转化系统的建立为高效地将有用的外源DNA导入水稻植株奠定了基础。 相似文献