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Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究 总被引:15,自引:1,他引:14
利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增人二磷酸核苷激酶A亚基(NDPK-A)基因,即nm23-H1/NDPK-K基因的编码序列,经序列分析后,定向克隆于表达质粒载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中高效表达出重组人NDPK-A.表达产物为可溶性的非融合蛋白,占菌体总蛋白42%.斑点ELISA法鉴定表明表达产物与NDPK-A标准抗血清呈阳性反应.以DEAE纤维素弱阴离子交换层析、CibacronBlue染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化rNDPK-A,得纯度为96.7%的目标蛋白.以反相高效液相色谱法进行酶活性分析,表明纯化的rNDPK-A能催化ATP+UDP=ADP+UTP的反应,比活性为800U/mg蛋白. 相似文献
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