补料培养与溶氧控制联合应用对红豆杉细胞培养的影响

为进一步提高红豆杉 (Taxuschinensis (Pilg.)Rehd .)细胞培养过程中紫杉醇的产量 ,采用细胞悬浮培养方法研究了补料培养与溶氧控制联合应用对紫杉醇产量的影响。 5L反应器中补料培养研究表明 ,培养过程中第 16天添加含 2 0g/L蔗糖的补料培养液有利于细胞的生长及紫杉醇的合成。 2 0L反应器中补料培养的研究结果表明 :2 0 %饱和度培养时紫杉醇含量最高 (0 .98mg/gDW) ,但 4 0 %～ 6 0 %溶氧饱和度能提高紫杉醇的产量。进一步研究表明 ,细胞在 6 0 %溶氧饱和度培养 2 0d后转入 2 0 %溶氧饱和度继续培养 12d ,能显著提高紫杉醇产量。补料培养与溶氧控制联合应用时 ,2 0L反应器中红豆杉细胞培养紫杉醇产量可达 18.7mg/L。     

抗癌药物紫杉醇的微生物生产有望

紫杉 (Ｔａｘｕｓ)或称红豆杉 ,在民间 ,曾用其枝叶做成汤治胃病。它的木材坚实 ,埋入地下 10年不朽 ,表明其木质优良及其所含某些成分具有抗腐蚀能力。从其树皮中提取的紫杉醇 (Ｔａｘｏｌ) ,制成药剂 ,每克售价达2 0 0 0美元。由于它是一种新型有效抗癌药物 ,2 0 0 0年全球紫杉醇针剂销售额达 2 0多亿美元。正因为有如此可观的经济效益和社会效益 ,研究人员除了从紫杉树皮中提取紫杉醇之外 ,用红豆杉植物组织培养生产紫杉醇 (1～ 3ｍｇ Ｌ)也取得一定进展。尽管如此 ,组培生产紫杉醇的产率仍有一个提高的问题。研究者发现中国的红豆杉 (Ｔ…     

树状多节孢发酵生产紫杉醇工艺条件的初步研究

研究了树状多节孢HQD33内生真菌融合子TPF－1瓶发酵工艺条件,进行了2．8L和10L通用式机械搅拌罐的发酵试验。结果表明,HQD33适宜发酵工艺条件是：发酵时间16－18d,培养基中蔗糖、苯丙氨酸、醋酸钠、酪氨酸,2,4-氯苯氧乙酸和亚油酸的加量分别为180g/L、1mg/L,1.5g/L,15mg/L,5mg/L和15mg/L,摇瓶装置为150ml/500ml,在此条件下摇瓶发酵液中紫杉醇平均含量为448．52μg/L;2.8L和10L罐发酵液中紫杉醇含量达406．95和395．12μg/L（平均值）。     

云南红豆杉(Taxus Yunnanensis)皮下真菌类群初步研究

分离纯化与云南红豆杉（Taxus Yunnanensis)内共生的皮下真菌,获得了52株内生真菌,对52株菌进行了分类研究。结果是：无孢类各属是优势菌群（共29株）,其次是木霉属（5株）和茎点霉属（4株）,首次报道了红豆杉属植物皮下真菌的类群和区系特点。     

改进的HPLC法测定红豆杉植物和细胞培养物中紫杉醇的含量

紫杉醇 (Ｔａｘｏｌ)是一种新型的抗癌药物。由于紫杉醇在红豆杉属 (ＴａｘｕｓＬ .)植物中的含量很低 ,而且运用植物细胞培养技术生产紫杉醇仍处实验阶段 ,因此 ,对于紫杉醇含量甚微的样品 ,寻找一种精确、灵敏、快速的检测方法就显得尤为重要。本实验采用改进的ＨＰＬＣ法对南方红豆杉〔Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ.ｍａｉｒｅｉ (Ｌｅｍｅ啨ｅｔＬ啨ｖｌ.)ＣｈｅｎｇｅｔＬ .Ｋ .Ｆｕ〕枝和叶 ,以及中国红豆杉〔Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ (Ｐｉｌｇｅｒ)Ｒｅｈｄ .〕细胞培养物中的紫杉醇含量进行了测定。1　实验方法1 1　实…     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇产量稳定性的探讨

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋水仙碱同步处理处于中期的细胞紫杉醇产量高于非同步化细胞 ,而磷酸盐双饥饿同步处理处于间期的细胞紫杉醇产量则相反。这表明紫杉醇产量与培养物的均一性有关 ,且与细胞同步的周期时相有关 ,采用同步化方法来选择合适的细胞周期时相有利于紫杉醇产量的稳定 ,通过比较不同同步化方法处理对细胞生物量和 POD活性的影响进一步探讨紫杉醇产量产生差异的原因     

水杨酸对真菌诱导子诱导红豆杉悬浮细胞膜脂过氧化和紫杉醇生物合成的影响

研究了 5 0 mg· L- 1真菌诱导子 (F5) ,5 0 mg· L- 1水杨酸 (SA) ,5 0 mg· L- 1F5+5 0 mg· L- 1SA3种处理 ,对红豆杉悬浮细胞膜脂过氧化和紫杉醇合成的影响。结果表明 :F5和 SA单独处理红豆杉细胞均引起细胞膜脂过氧化。SA+F5联合处理可以减轻 F5单独处理细胞所引起的膜脂过氧化程度 ,SA+F5联合处理与真菌诱导子处理相比 ,较大地提高了过氧化物酶的活性 ,得到较多的生物量。3种处理方法均可提高红豆杉细胞紫杉醇产量 ,特别以 F5+SA处理得到产量最高 ,达到 1 1 .5 mg· L- 1,分别为 F5,SA和对照组的 1 .5倍、2 .0倍和7.5倍。结果显示 :在真菌诱导子诱导与水杨酸的联合作用下提高紫杉醇产量 ,可能与水杨酸减轻真菌诱导子所引起的细胞膜脂过氧化程度有关     

红豆杉细胞稳定生产紫杉醇中的同步化协同诱导作用

同步化协同诱导可以稳定提高曼地亚红豆杉细胞培养物中紫杉醇含量。细胞培养周期第8d的低温同步化处理可促使细胞达到最高同步化率（20.4%）,而茉莉酸甲酯（MJ）的协同诱导可提高紫杉醇产量,使紫杉醇产量最高值达到54.7mg·L^-1。在细胞生长周期第8d,未经低温同步化的红豆杉细胞中的关键酶基因DXR、HMGR、GGPPS和DBAT的表达量在MJ诱导24h后均迅速下降,但在低温同步化的细胞中紫杉醇表达量下降缓慢,60h后仍维持较高的水平。低温同步化和MJ协同诱导的红豆杉细胞中,紫杉醇合成关键酶基因高效稳定的表达可能是引起紫杉醇产量稳定提高的原因之一。     

注射紫杉醇的小鼠骨髓细胞体外分化巨噬细胞增强

目的研究小鼠腹腔注射紫杉醇对体外骨髓细胞诱导分化巨噬细胞的影响。方法小鼠连续5d腹腔注射紫杉醇,无菌制备骨髓细胞,用含巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的RPMI1640培养液培养骨髓细胞,通过流式细胞仪对其诱导分化的巨噬细胞表面分子、吞噬功能进行分析。结果紫杉醇明显降低小鼠骨髓细胞数量,但骨髓细胞体外诱导分化成巨噬细胞的数量明显增加;F4/80^＋巨噬细胞中CD80、CD14表面分子表达升高,而I-A^d表达降低;紫杉醇处理组诱导分化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力提高。结论结果提示紫杉醇可能具有调节巨噬细胞表面分子的表达和吞噬功能。     

生物技术在几种植物生物活性物质生产中的应用

近年来肉苁蓉、红豆杉、铁皮石斛、怀槐等植物生物活性物质的研究已成热点。综述生物技术在这几种植物生物活性物质生产中的应用,展示了植物生物活性物质在医药、保健食品和化妆品等方面的广阔应用前景。