真鲷仔鱼用微粒子饲料中肽酶与大豆卵磷脂添加效果的研究

本研究以酪蛋白分解物为蛋白源配制三种微粒子饲料MD-S、MD-T和MD-U对真鲷开口仔鱼进行饲养试验。以MD-S的配方为基准,MD-T采用粉状大豆卵磷脂和麸质代替液状大豆卵磷脂;MD-U则另外添加0.1%的肽酶。结果表明,微粒子饲料在水中浸泡15min后,MD-T的溶出率(35.5%)低于MD-S(46.8%)和MD-U(45.8%);实验结束时(20日龄),仔鱼的成活率以生物饵料(轮虫)组为最高(86.3%),其次是MD-T组为20.7%,显著高于(P<0.05)MD-S组(13.3%)和MD-U组(13.6%);生物饵料组的仔鱼全长(6.14±0.49mm)显著大于微粒子饲料组(4.23±0.30mm~4.46±0.30mm),各微粒子饲料组之间仔鱼的全长并不存在显著差异(P>0.05)。在孵化后第12d,微粒子饲料组的仔鱼肠上皮细胞发育良好,但至孵化后第18d,仔鱼肠上皮细胞大部分萎缩、并发生脱落。鱼体的蛋白质、DNA与RNA日间增长率微粒子饲料MD-T组高于MD-S和MD-U组,但都低于生物饵料组。由此可见,微粒子饲料中添加肽酶并无助真鲷仔鱼对其消化吸收;可是,使用粉状大豆卵磷脂与麸质代替液状卵磷脂能增强微粒子饲料的黏合性,可减少其营养成分的溶出率,从而提高微粒子饲料的饲育效果。     

B型肉毒毒素重链抗原表位的预测及表位合成肽抗原性的检测

目的:预测B型肉毒毒素蛋白抗原表位,研究表位合成肽的生物学活性。方法:利用生物信息学,结合Anthwine分析软件及网络平台,预测B型肉毒毒素蛋白重链的B细胞抗原表位。人工合成4条(P1,P2,P3,P4)表位多肽,与抗B型肉毒毒素类毒素的马血清反应;采用腹腔注射的方式用合成肽免疫BALB/c小鼠,检测免疫血清与合成肽的结合;对免疫小鼠腹腔注射B型肉毒毒素。结果:合成的多肽能与抗B型肉毒毒素的类毒素的马血清结合;多肽免疫小鼠后能产生针对多肽的抗体,其中P1、P3、P4产生的抗体对受毒素攻击的小鼠具有保护作用。结论:成功预测了抗原表位,合成的表位多肽具有较好的抗原性。     

胰岛素受体基因多态性与2 型糖尿病的相关性

目的：探讨胰岛素受体基因（INSR）的第8外显子NaiⅠ多态性与湖北汉族人群2型糖尿痛的相关性;方法：采用同胞对（家系内对照）和随机病例-对照两种实验设计,并结合聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（PCR—RFLP）技术分析了224个样本的INSR基因第8外显子NsiⅠ多态性,并洲定了身高、体重、腰围、臀围、血压和空腹血糖等生理指标;结果：两种实验设计中对照组与病例组的基因型和基因频率均无显著差异;结论：INSR基因在湖北汉族人群2型糖屎病的发生发展中可能不起主要作用。     

流式细胞术在哺乳动物精液质量检测中的应用

精液检测的首要目标就是快速准确地确定精子的生育力。同时具备多种特性和功能完整的精子才能受精,因而只有同时客观地检测多个指标,才能更好地反映精子的生育力。精子检测的传统方法费时费力,检测精子数量少,指标单一,而且易受操作者的主观影响,不能准确地反映精子功能。流式细胞术(FCM)为精子功能研究提供了一种快速、客观、多指标、大通量的检测手段;利用FCM检测精子的质膜完整性、顶体状态、染色质结构、线粒体功能以及细胞凋亡等,可以得知精子功能的相关情况。随着新的荧光探针、染色方法的不断开发和改进,FCM为精液质量检测提供了一种新的检测平台,应用前景极其广阔。     

棉铃虫血淋巴酚氧化酶活性的微量测定

昆虫血淋巴黑化的形成由激活酚氧化酶原的级联系统所引发 ,酚氧化酶在昆虫体液免疫中起着重要作用。用抗凝剂从棉铃虫血淋巴中分离获得了血浆及完整的血细胞 ,以L DOPA为底物 ,牛胰蛋白酶为激活剂 ,测定了血浆及血细胞裂解液中酚氧化酶及酚氧化酶原的活性。结果表明 ,血浆及血细胞中两者都有一定量的分布。这一昆虫血淋巴酚氧化酶的微量测定方法 ,所需样品量少 ,耗时短 ,简便易行。     

吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌的近期疗效、毒副反应及疗效的影响因素分析

摘要 目的：探讨吉非替尼治疗表皮生长因子受体（EGFR）突变型晚期肺腺癌的近期疗效、毒副反应及疗效的影响因素。方法：选取2018年4月~2019年6月期间我院收治的EGFR突变型晚期肺腺癌患者97例。所有患者均给予吉非替尼治疗,观察其近期疗效及毒副反应情况。采用单因素和多因素 Logistic回归分析疗效的影响因素。结果：97例患者全部如期完成治疗,近期疗效评价：完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、病情稳定（SD）、病情进展（PD）率分别为9.28%（9/97）、24.74%（24/97）、31.96%（31/97）、34.02%（33/97）。根据近期疗效结果将患者分为有效组（CR+PR,n=33）和无效组（SD+PD,n=64）。本研究中患者的毒副反应多为 I、Ⅱ度非血液学毒性,最常见的是皮肤毒性,如皮疹等;其他毒副反应如胃部不适、腹泻等,经对症治疗后均能缓解。单因素分析结果显示,吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌的疗效与性别、肿瘤临床分期、骨转移、肿瘤直径有关（P<0.05）,而与年龄、肾上腺转移、脑转移、吸烟史无关（P>0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,性别为男性、肿瘤分期Ⅳ期是影响吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌疗效的危险因素（OR=1.473、2.042,P<0.05）。结论：吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌具有不错的近期疗效,不良反应较少,性别为男性、肿瘤分期Ⅳ期是影响吉非替尼治疗EGFR突变型晚期肺腺癌疗效的危险因素。     

海龙的起源和演化

海龙是三叠纪起源不明的一类海生爬行动物, 与鳍龙和鱼龙共同构成了当时海洋生态系统的三大主要捕食者类群。海龙的研究对从高级捕食者的角度理解二叠–三叠生物大绝灭之后生态系统的复苏重建具有重要意义。海龙的研究已有100余年的历史, 近些年来由于分支系统学等新方法的应用而得到了新的认识。本文从海龙的起源, 物种多样性, 谱系发育重建, 生物地理分布四个方面概述了学界的研究进展。在目前的研究基础上指出, 在时代更早的地层中进行更深入的野外工作, 对华南海龙属种的系统厘定, 以及海龙骨组织学研究的开展, 是未来海龙研究的主要方向。     

大鼠低氧诱导因子-1α基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:将大鼠低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)基因转染到骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),为后续基因修饰的BMSCs移植治疗脊髓缺血再灌注损伤提供必要的理论依据.方法:采用直接贴壁法分离,传代培养出纯化的大鼠BMSCs;用电穿孔的方法将构建好的大鼠HIF-1α基因表达栽体转染入BMSCs中;通过免疫细胞化学法,鉴定HIF-1α能否成功转染进入BMSCs;RT-PCR检测转染前后HIF-1α在细胞中的表达效果.结果:直接贴壁法能有效分离、纯化大鼠BMSCs;免疫细胞化学法显示转染后BMSCs内充满蓝紫色深染颗粒;RT-PCR结果显示,转染后细胞内HIF-1α基因表达量明显增高.结论:大鼠HIF-1α基因通过电穿孔方法可成功转染到符合试验标准的BMSCs中,并且稳定表达,为进一步研究修饰后HIF-1α基因对BMSCs增殖带来的影响以及治疗相关疾病等方面奠定基础.     

大鼠低氧诱导因子-1α基因克隆和表达载体的构建

目的:对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因进行克隆及载体构建,为进一步研究HIF-1基因转染骨髓基质细胞移植治疗脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据.方法:制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,提取脊髓组织mRNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PR)合成HIF-1α cDNA,并对其进行PCR扩增,对PCR产物进行纯化及连接T载体、转化感受态和双酶切鉴定,并将HIF-1α克隆入pcDNA3.1载体.结果:PCR扩增的片段长度为2472bp与预期结果一致;利用BamHI和XbaI双酶切能够切出大小约2472bP的目的片段,与PCR产物片段大小相等,经测序证实无碱基改变.结论:成功克隆HIF-1α,并被构建到载体pcDNA3.1中,为进一步研究基因转染奠定了基础.     

鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定

以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液.在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞.对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst 33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白.建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法.