青霉素酰化酶操纵子为负调控模型

质粒pBR322用HindⅢ—BarnH Ⅰ双酶切作为载体,从质粒pPAd上克隆含有pac操纵基因的HindⅢ一。BglⅡl．65kb的DNA片段,得到质粒pPA41。质粒pBR322和pPA41转化染色体上含有完整pac操纵子的大肠杆菌D816,进行操纵基因滴定。大肠杆菌D816、D816(pPA4l)．D816(pBR322)在22℃摇瓶发酵96h,NIPAB法测定青霉素酰化酶活性。结果发现,在不加诱导剂时,D816(pPA41)产生的青霉素酰化酶是D816细胞的2．5倍,在加诱导剂时,D816(pPA41)产生的青霉素酰化酶是D816细胞的1．3倍。对照组D816(pBR322)细胞产生的青霉素酰化酶和：D816细胞产生的几乎一致,说明质粒pPA41的竞争滴定作用确是其上克隆的操纵基因引起的。高拷贝的操纵基因(pPA41)和pac操纵子竞争结合调节蛋白,使得pac操纵子表达增加,说明调节蛋白在pac操纵子表达过程中起阻遏作用,调节蛋白为阻遏蛋白,pac操纵子为负调控模型。R．NA—DNA点杂交检测pac基因表达,发现D816(pPA41)细胞转录产生的pac—mRNA量明显高于D816细胞,mRNA量和青霉素酰化酶活性呈现一致的趋势,证实了pac操纵子的负调控发生在转录水平。     

透明颤菌血红蛋白在发酵工业中的应用概述

透明颤菌血红蛋白在发酵工业中的应用概述郭宏秋,杨胜利（中国科学院上海生物工程研究中心,上海２００２３３）在生物技术日益产业化的今天,特别是随着基因工程技术的飞速发展,为生产新的生物产品带来了可能,有些产品已进人商业化生产,像干扰素、白细胞介素、生长激...     

质子泵抑制剂与肿瘤耐药研究

恶性肿瘤对抗癌药物的耐药性是肿瘤患者治疗失败的主要原因。肿瘤细胞外微环境的高度酸化是肿瘤细胞对化疗药物产生耐药的机制之一。改变肿瘤细胞内外的pH梯度是逆转耐药的一种有效方法。作为抗酸剂治疗胃病的质子泵抑制剂能够通过抑制质子泵的功能,改变pH梯度而阻断肿瘤微环境的酸化,达到提高肿瘤对化疗药物敏感性的目的。     

融合干扰素-BLA（IFN-BLA）的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定

干扰素-BLA(IFN-BLA)由干扰素-beta-1b(IFN-beta-1b)和干扰素-alpha-2b（IFN-alpha-2b）通过连接肽-GGGS-融合而成。优化了其在大肠感菌BL21 CodonPlus (DE3)-RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35％以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN-BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45 mg/L, 纯度在90％以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。     

融合蛋白基因工程应用及研究

通过重组DNA技术将不同的基因或基因片段融合在一起,经表达后可以得到由不同的功能蛋白拼合在一起而形成的新型多结构域的人工蛋白,这是一种极具潜在应用价值与理论意义的方法。目前这种方法已被广泛应用于许多领域的研究中,并已显示出较高的价值,本文尝试对融合蛋白研究的几个领域的发展情况进行综述。     

枯草蛋白酶E的突变体

Ser236位于横贯枯草蛋白酶E的α螺旋末端,远离催化活性中心,Ser236的突变不会对酶的活性产生大的影响。用定点突变的方法对枯草蛋白酶E的基因进行改造引入Ser236Cys,可能会形成分子间二硫键,有利于提高酶的稳定性。Ser236Cys变体酶(BP1)活性是野生型蛋白酶E的15倍,热稳定性提高3倍;进一步在其他位点引入突变的变体酶BU1(A1a15Asp/Gly20His/Ser236Cys)和BW1(Ser24His/Lys27Asp/Ser236Cys)活性都比野生型蛋白酶E低,但BW1的稳定性稍高于野生型蛋白酶E。     

重组GM-CSF/IL-3融合蛋白表达菌发酵研究

基因工程菌的发酵技术是基因工程药物大规模生产所必备的关键技术,本文对于重组ＧＭ－ＣＤＦ／ＩＬ－３融合蛋白表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＦｕ）的生长及产物表达规律进行了探索,在此基础上进行高密度发酵研究,真体最终发酵密度达ＯＤ６００值６０以上,目的产物占菌体总蛋白２５％以上。     

一种新的卡那霉素残留检测方法

氨基糖苷 3′- O磷酰基转移酶Ⅱa (APH( 3′) -Ⅱa)具有磷酸化卡那霉素的功能 ,通过突变使APH( 3′) Ⅱa的催化活性丧失 ,同时保留与底物卡那霉素结合的功能 ,由此获得的突变型APH( 3′) - Ⅱa具有类似于抗体的特异性结合与识别卡那霉素分子的作用。采用戊二醛交联二步法制备了卡那霉素 辣根过氧化物酶结合物 (Kan HRP) ,把纯化后的APH( 3′) - Ⅱa蛋白包被到 96孔聚苯乙烯板上 ,通过竞争性ELISA的方法建立了一种新的卡那霉素残留检测方法。通过该方法可以检测到卡那霉素的最低残留量为 1 μg ml。     

主编寄语

<正>《生物工程学报》自1985年创刊以来,已走过了27个春秋,成为我国生物工程与生物技术领域学者发表科研成果、学习科学知识和开展学术交流的重要平台。在编委、作者和读者朋友的大力支持下,《生物工程学报》不断调整办刊思路和经营方式,期刊质量稳步提高,学术影响逐渐扩大,为推动我国生物工程与生物技术的发展做出了重要贡献。尤其是在过去三年中,《生物工程学报》瞄准国际生物技术发展前沿,先后组     

青霉素酰化酶基因的克隆与表达I．青霉素酰化酶基因的克隆

用EcoR I—Pst I双酶解的pBR322作为克隆载体,从大肠杆菌D816染色体克隆了青霉素酰化酶基因,这个基陶位于9．1Kb EcoRI片段上。所得克隆株整体细胞酶学特性与大肠杆菌D816一致,酶反应最适温度为55℃,最适pH为7．8—8．0。以青霉素G作为底物时Km为10．3mM,转化产物为6一氨基青霉烷酸。克隆株大肠杆菌c600(pPAl)合成青霉索酰化酶仍需苯乙酸诱导并被葡萄糖阻遏,细胞青霉素酰化酶的活性比大肠杆菌c P1(高2—4倍。