小鼠IL-18基因的克隆及真核表达载体的构建

研究ＩＬ－１８是否具有对造血功能调控的作用。采用常规分子生物学技术,从小鼠骨髓细胞中克隆了含信号肽序列的ＩＬ－１８,构建了表达载体。经序列测定表明所克隆的ＩＬ－１８序列与文献报道的一致,构建的真核表达载体正确。     

血红蛋白突变体的稳定性预测

为了研究提高血红蛋白粘聚体的稳定性,利用计算机同源模建、分子间氢键形成及表观静电势理论,探讨血红蛋白及相应突变体的结构与功能与功能关系。分析发现两个α９９位的Ｌｙｓ突变为Ｃｙｓ后,它们之间可以形成二硫键,两个β８２位的Ｌｙｓ突变为Ｃｙｓ可以增强形成分了间氢键的能力,分别起到稳定四聚体的作用。分析表明,突变体血红蛋白将具有更高的稳定性,从而提高血红蛋白稳定性及借助计算机工具设计新型奕变体提供参考。     

诱发玉米抗小斑病突变体的研究——Ⅳ.从玉米单倍体胚性细胞无性系筛选抗玉米小斑病突变体

将经γ射线和EMS诱变处理的玉米八趟白单倍体胚性细胞无性系为试验材料,以玉米小斑病菌Helminthosporium maydis单胞系342号菌株产生的致病毒素为选择剂,采用正选择法进行筛选,已获得抗玉米小斑病的突梦体。这个突变体脱离选择剂5代(5个月)后性状稳定,用小斑病菌的分生孢于直接接种鉴定仍具有很强的抗病力。过氧化物酶同工酶的分析,抗病突变体与不抗病对照间出现明显差异。     

喀斯特常绿落叶阔叶林死亡个体空间分布格局及生境关联

树木死亡在森林动态中发挥着重要作用, 环境因子是影响树木死亡的重要因素。为了阐明喀斯特常绿落叶阔叶林死亡个体空间分布格局及其与环境的相关性, 本研究以木论25 ha森林动态监测样地的两次木本植物调查数据为基础, 分析了死亡个体的物种组成、径级结构、分布格局及其与生境的关联。结果表明, 样地内共有死亡个体17,306株, 隶属57科130属194种; 其中, 死亡率排名前三的科和属分别为八角枫科、蔷薇科、大风子科以及山麻杆属(Alchornea)、火棘属(Pyracantha)、八角枫属(Alangium); 在物种水平上, 山麻杆(Alchornea trewioides)、毛桐(Mallotus barbatus)、野桐(Mallotus japonicus)等死亡率较高。样地内死亡个体的平均胸径为3.83 cm, 最大47.11 cm; 径级分布呈倒“J”型。从分布格局来看, 样地内大部分死亡个体在0-50 m的尺度上呈聚集分布, 部分大径级树木死亡个体趋向于随机分布。生境关联分析发现, 个体死亡率与山顶、陡坡、缓坡、洼地呈正关联的物种数分别为41种、13种、41种和38种, 呈负关联的物种数分别为38种、67种、33种和10种, 与各生境无关联的物种数分别为4种、3种、9种和35种; 多度排名前20的物种其个体死亡率均与4种生境类型呈现出正关联或者负关联; 不同径级个体死亡率都与山顶生境呈正关联, 与缓坡生境呈负关联, 其中5 cm ≤ DBH < 10 cm和10 cm ≤ DBH < 15 cm个体死亡率均与洼地生境呈正关联; DBH ≥ 15 cm个体死亡率与陡坡生境呈正关联, 与洼地生境呈负关联。在喀斯特亚热带常绿落叶阔叶林中, 死亡个体空间分布格局总体表现为聚集分布, 树木死亡受生境作用的影响较大。     

新型精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化的影响*

目的: 研究新型精胺氧化酶(SMO)小分子抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化影响及其分子机制。方法: 体外培养SKVO-3细胞,以未加药作为对照组,30、60 μmol/L SI-4650处理48 h细胞为实验组,每组设3个复孔,检测SI-4650对SKVO-3细胞内SMO的酶活性及多胺含量、酶促反应产物活性氧水平的影响,对细胞增值、周期、线粒体膜电位的作用,以及对细胞凋亡、侵袭和迁移能力的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3以及上皮细胞间质化(EMT)相关蛋白E-Cad、N-Cad、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达。结果: 与对照组相比,实验组SKVO-3细胞中SI-4650浓度增加,明显抑制SKVO-3细胞内SMO酶活性(P＜0.01)、减少SMO酶促反应产物活性氧水平(P＜0.01)、降低细胞内总多胺含量(P＜0.01)。SI-4650高效抑制SKVO-3细胞生长(P＜0.01),实验组细胞生长抑制率分别为32.27%、47.31%;将SKVO-3细胞阻滞在S期(P＜0.01),实验组细胞 Bax表达和Caspase3活化剪切增加,Bcl-2表达减少,线粒体膜电位下降,凋亡细胞比率增加至31.41%、43.51%;同时,实验组E-cad表达显著增加,N-cad、Vimentin表达均明显减少,合成分泌MMP-2、MMP-9减少,干扰了SKVO3细胞EMT进程,降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力(P＜0.01)。结论: SI-4650对人卵巢癌SKVO-3 细胞具有杀伤和抑制肿瘤细胞侵袭、迁移的抗肿瘤活性,其机制可能与干扰多胺代谢、诱导细胞S周期阻滞和线粒体途径细胞凋亡以及干扰细胞EMT进程相关。     

动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建

目的:构建组成型表达萤光素酶基因的载体,建立稳定高表达萤光素酶的MCF-7乳腺癌细胞株,检测其对细胞增殖的影响及在传代后的表达效果.方法:以载体pGIA.20为模板,PCR扩增萤火虫萤光素酶基因,将其克隆到载体pIRESpuro2上,将获得的pIRESpuro2-Luc经酶切和测序验证后,转染293T、MCF-7及ZR...     

PES1基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌ZR75-30细胞的生长抑制

目的:构建PES1基因的慢病毒干扰载体,研究其对乳腺癌细胞ZR75-30生长的影响。方法:设计针对PES1基因的siRNA引物,克隆到pSIH1-H1-Puro载体,包装成慢病毒,测定病毒的滴度,感染人乳腺癌细胞ZR75-30,通过Real-time PCR和Western印迹检测干扰效果,并通过生长曲线研究敲低PES1对ZR75-30细胞生长的影响。结果和结论:构建了具有明显干扰效果的PES1基因的siRNA慢病毒载体,能够有效抑制ZR75-30细胞内源的PES1 mRNA和蛋白水平,敲低PES1能够抑制ZR75-30细胞的生长。     

CCNG2在胃癌中的表达及其临床意义

为检测CCNG2在胃癌中的表达改变,并探讨其变化与胃癌临床参数和预后之间的关系,构建了225例胃癌组织芯片。用免疫组化检测了CCNG2的表达,分析其表达与临床病理参数及胃癌患者预后的关系。免疫组化结果显示,CCNG2在癌旁粘膜中均有表达,而胃癌中的表达率为51.1%(115/225)。CCNG2的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、疾病分期以及组织学分化呈负相关。生存分析表明,CCNG2可以是判断胃癌患者预后的独立指标。由此得出结论,CCNG2在胃癌的发生发展过程中起着重要作用,可作为判断胃癌患者预后的指标。     

鸡粪堆肥的微生物变化规律研究

目的：研究鸡粪堆肥中细菌、放线菌和真菌数量的变化规律,为有机堆肥提供技术参数。方法：采取稀释倒平板法和涂布法对堆肥样品进行计数。结果：在发酵过程中,菌数量变化在肥料表面上基本是呈先下降后上升最后达到稳定状态。其中细菌在30cm和60cm深处趋于平稳,真菌在30cm和60cm深处先上升再下降再上升,在第12d后有个急速下降的过程。放线菌在30cm和60cm深处数量比较少。而在后熟发酵过程中,3种菌数的变化规律比较平稳。结论：细菌和真菌的生长和繁殖都会抑制放线茵的生长,其中细菌作用大,真菌次之。     

甲基苯丙胺中毒mG1uR5 的表达

目的:研究代谢性谷氨酸受体5(mG1uR5)在甲基苯丙胺中毒的损伤机制中的作用。方法:设立实验组,对照组。实验组分别给予20 mg/kg,10 mg/kg腹腔注射MA;对照组分别给予同剂量的生理盐水。末次注射后24 h内腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠后用4%多聚甲醛灌注、取脑后行代谢性谷氨酸受体5的免疫组织化学染色,观察并计数mG1uR5在不同脑区的表达。结果:实验组mG1uR5在大脑纹状体、海马的表达较对照组显著增强,差异有显著性(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论:mG1uR5参与了甲基苯丙胺中毒的损伤机制。