非人灵长类动物基因编辑技术的应用及挑战

建立有效的动物模型是研究人类疾病演进、开发新型治疗手段的重要方法。非人灵长类动物在进化发育、生理生化及病理方面和人类最接近,是研究人类疾病的理想动物模型。随着基因编辑技术的发展,研究者已经成功建立了多种模仿人类疾病的非人灵长类动物模型。但是CRISPR/Cas9的脱靶效应、嵌合突变以及基因敲入效率较低等突出问题也逐渐引起重视。本文综述了基因编辑技术在建立非人灵长类动物模型中的应用现状,提出了目前亟需解决的难点和应对策略,以期为高效、准确构建非人灵长类动物模型提供借鉴与参考。     

PTIP相关蛋白1在小鼠睾丸发育过程中的表达及定位

目的探索PTIP相关蛋白1(PTIP associated protein 1,PA1)在小鼠睾丸发育过程中的表达定位。方法采用RTPCR、实时定量PCR和免疫组织化学方法,对PA1在小鼠睾丸不同发育阶段的表达及定位进行检测。结果 RT-PCR和实时定量PCR结果显示,PA1 m RNA在1w、2w、4w、8w、12w、18w和24w的小鼠睾丸中均有表达,且其表达量在2w时达到最高峰,在小鼠性成熟(8w)以后,PA1的表达量趋于平稳。ABC法免疫组织化学染色显示PA1在1w、2w、4w和8w小鼠睾丸各级生精细胞、支持细胞和间质细胞的胞核中均有表达,免疫荧光双标进一步确定PA1表达于支持细胞和间质细胞。结论 PA1可能在维持生精细胞的正常分化及调节睾丸内分泌的平衡中起重要作用。     

金属硫蛋白清除自由基及其对自由基引起的核酸损伤保护作用的研究

通过化学反应体系产生ＯＨ＾－和Ｏ＾－２自由基,采用荧光和化学发光检测体系,比较研究了不同亚型及不同结合金属的金属硫蛋白（ＭＴ）清除自由基能力的大小。结果表明,对于同一亚型,Ｚｎ结合ＭＴ清除自由基的能力大于Ｃｄ结合ＭＴ;同一结合金属的ＭＴ,ＭＴ１清除自由基的能力大于ＭＴ２。通过比较ＺｎＭＴ１与谷胱甘肽（ＧＳＨ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）清除自由基的能力大小发现,ＺｎＭＴ１清除ＯＨ的能力是ＧＳＨ的１０     

携带定居因子抗原的非毒素原性大肠杆菌 CF138 株特性的鉴定

对自腹泻病人粪便标本中分离的携带定居因子抗原的菌株（命名为ＣＦ１３８）的特性,侧重从两个方面进行了鉴定。通过电子显微镜观察,发现其菌体表面具有ＣＳ１及ＣＳ３纤毛结构,聚乙烯珠粘附试验结果证实具有粘附作用,甘露糖抗性血凝试验呈抗性凝集,与ＣＦＡ／Ⅱ抗血清作用显示强凝集阳性,属０６：Ｈ１６血清型,采用家兔肠攀试验,乳鼠ＳＴ活性测定及用ＬＴ、ＳＴ放射性ＤＮＡ探针检测等现行测定ＬＴ及ＳＴ肠毒素的方法,证实该株不产生肠毒素,结果表明该株属具有定居因子抗原的非毒素原性大肠杆菌自然诱变株。灌注该株菌体的免疫豚鼠产生了抵抗肠毒原性大肠杆菌攻击的保护力,表明该株系一潜在的抗ＥＴＥＣ感染的侯选菌苗株。     

桂花抗冻种质的筛选及抗冻机理初探

采用田间调查及人工模拟冰冻鉴定的方法,比较测定了4个桂花品种的抗冻性,其抗冻性强弱顺序为金桂（Osmanthusfragransvar．thunbergii）＞银桂（O．fragransvar.latifolius）＞丹桂（O．fragransvar．aurantiacus）＞四季桂（O．fragransvar.semperflorens）。筛选出5株抗冻性最强的单株,它们的致死温度都在－26℃左右。桂花叶片膜脂脂肪酸组成随季节呈周期性变化,随着气温下降亚麻酸（18∶3）含量增加而亚油酸（18∶2）含量降低。不同品种均表现出一致的变化趋势,抗性强的品种这种变化则更为显著。在自然脱锻炼过程中,叶面喷施脱落酸（200ppm）能使亚麻酸含量保持稳定,延缓桂花的脱锻炼。     

福司可林的生理效应及其在医学上的治疗作用

福司可林(Forskolin)是从一种多年生的草本植物。唇形科毛喉鞘蕊花(Coleus fors kohlii)块茎中提取分离出来的双萜类化合物,它是医学和生物学中研究环核苷酸系统理论的良好工具。药理学研究表明:福司可林具有扩张血管、增强心脏收缩力,降低血压、降低眼内压、抑制肿瘤增殖及防止肿瘤转移、平喘、抗血栓、抗炎镇痛等作用。由于福司可林     

黑节草未成熟种子的形态发育及其在离体培养时的表现

黑节草(Dendrobium candidum Wall ex Lind.)2—6个月种龄的胚均处于球形胚阶段,不同种龄的胚在体积大小、胚细胞数目、胚细胞内的淀粉粒含量和超微结构上有差异。在离体培养条件下黑节草种子萌发率可达95％,种子萌发后形成原球茎,原球茎可以直接发育形成幼苗,又可以由原球茎产生大量愈伤组织,由愈伤组织再分化发育成幼苗。种子萌发过程中,胚顶端分生组织细胞的淀粉逐渐消耗,淀粉的变化与分生组织和子叶的形成有明显的相关性。     

石磺来源海洋链霉菌Streptomyces ardesiacus SCSIO LO23中germicidin类化合物的分离鉴定及其生物合成分析

海洋共附生放线菌具有生产结构特殊和活性显著化合物的潜力。【目的】以海洋软体动物石磺Onchidium sp.来源共附生海洋链霉菌Streptomyces ardesiacus SCSIO LO23为研究对象,分离并鉴定其次级代谢产物结构,分析化合物的生物合成基因簇及其生物合成途径。【方法】采用多种培养基对该菌株进行发酵优化并放大发酵,利用多种柱色谱方法分离得到germicidin类化合物,并利用波谱学手段和X-Ray单晶衍射技术完成化合物的结构鉴定;利用Illumina HiSeq对目标菌株进行全基因组测序,结合antiSMASH和BLAST在线分析软件实现菌株中germicidin类化合物生物合成基因功能注释和生物合成途径分析,并通过异源表达进一步确定其生物合成基因。【结果】从AM3培养基发酵产物中分离鉴定了6个吡喃酮类化合物germicidinA(1)、germicidinB(2)、germicidin D (3)、germicidin H (4)、isogermicidin A (5)和isogermicidin B (6),其中化合物2和6对斑马鱼神经行为有显著兴奋作用。通过对...     

电针对脓毒症大鼠肺炎症反应和高迁移率族蛋白B1的影响

摘要 目的：研究电针足三里对脓毒症大鼠肺脏炎症反应和病理损伤的调节,为脓毒症的临床治疗提供新的理论依据。方法：成年雄性SD大鼠40只,按照随机数字表法分为假手术组（sham组）、脓毒症（盲肠结扎穿刺术( Cecal ligation and puncture, CLP)组）、脓毒症+假电针组（非经非穴组）和脓毒症+电针足三里组（足三里组）,每组10只。除第一组外,其余大鼠均采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型;造模前,脓毒症+假电针组选择非经非穴处电针刺激,脓毒症+电针足三里组给予足三里穴位电针处理,电针参数为疏密波,2 Hz,1 mA,持续30 min,连续5天。术后24 h,先取支气管肺泡灌洗液, 再取右肺测湿干重比,取左肺下叶观察病理学改变,取左肺上叶检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor, TNF-α)、白介素-1(interleukin -1, IL-1β)、白介素-6(interleukin-6, IL-6)和HMGB1。结果：与sham组比较,CLP组大鼠肺组织出现明显病理损伤（均P＜0.05）,炎症因子明显升高（均P＜0.01）,高迁移率族蛋白1（High mobility group 1 protein, HMGB1）明显升高(P＜0.05);经过电针足三里处理,脓毒症大鼠肺组织病理损伤明显减轻（P＜0.05）,炎症因子明显降低（均P＜0.01）,HMGB1明显减少(P＜0.05)。CLP组与非经非穴组大鼠生存率、肺组织病理损伤、炎症因子和HMGB1无明显差异,差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论：电针足三里可以减轻脓毒症大鼠肺的炎症反应和组织损伤,降低其肺脏HMGB1水平。     

利用SSR构建薄壳山核桃主要品种的分子身份证北大核心CSCD

薄壳山核桃是著名的干果和木本油料树种,当前存在“同名异物、同物异名”现象影响产业发展。本研究在薄壳山核桃基因组中筛选到80个简单重复序列(SSR),利用8个品种的基因组DNA,对80对SSR引物进行筛选,初筛到23对目标条带清晰、检测结果稳定的引物,发现它们分布于13条染色体上。进一步在Pawnee、Mahan、Stuart等36个常用品种中开展基因分型,共检测到70个等位位点;其中18对引物具有遗传多态性,检测到的等位基因数介于2~8,多态性信息含量(PIC)介于0.03~0.72。聚类分析发现,各个样本按照遗传背景聚类,不同品种之间遗传距离介于0.026~0.636,同一品种的不同来源个体之间遗传距离介于0~0.0127。按PIC值从大到小的顺序,依次增加引物的数量,直至能够区分每个品种,发现最少可使用Ciz91、Ciz85、Ciz81、Ciz140和Ciz107等5个标记实现所有品种的有效区分,进而将这组引物确定为核心引物组。最后,使用核心引物组分别构建每个品种特异的分子指纹图谱、分子身份证条形码和二维码。本研究结果为薄壳山核桃品种鉴别、种苗纯度检测、品种追溯等提供了理论基础。