T细胞亚群CD4测定方法的研究

为比较外周血T淋巴细胞亚群CD4不同测定方法的差别,以流式细胞术为定量手段,测定了猴外周血中三种不同方法处理后CD4的表达.结果表明：先标后溶法——先用异硫氰荧光素标记的单克隆抗体（FITC-CD4 McAb）标记后,再加入红细胞溶解液溶掉红细胞的处理方法,结果基本等同于传统的淋巴细胞分离法,但样本用量仅为传统方法的1/5,且操作简单.激光共焦显微术的形态学研究也证实：先标后溶法与淋巴细胞分离法相似,其细胞膜表面荧光标记清晰,优于先溶后标法.     

细胞代数和密度影响血管平滑肌细胞表型重塑和收缩反应性的机制

探讨细胞代数和密度对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型重塑能力的影响及机制,观察血清饥饿诱导的不同代数和密度的VSMC骨架的组构特征及收缩反应性,检测细胞骨架中收缩蛋白的含量和比例变化。结果发现,低代数(3代)、高密度的VSMC经血清饥饿诱导后易于形成束状、极性排列的应力纤维,乙酰胆碱(Ach)刺激可产生明显的收缩反应。Western印迹显示,3代高密度VSMC中,平滑肌22α(SM22α)在F-肌动蛋白中的组成比例及其在F-/G-肌动蛋白的含量之比明显高于8代细胞。结果提示,SM22α在F-肌动蛋白中的分布比例可能决定了应力纤维的排布方式,是细胞获得收缩性的主要调节因素,在VSMC表型重塑过程中具有重要意义。     

纤维介素基因hfgl2启动子的SARS冠状病毒核心蛋白反应元件初步分析

 SARS冠状病毒核心蛋白对hfgl2纤维介素基因有激活作用,采用实时荧光定量PCR和Western印迹已验证了hfgl2基因在mRNA和蛋白水平的表达.为进一步明确在SARS冠状病毒核心蛋白刺激下,hfgl2纤维介素基因5′端非编码区对转录激活起重要作用的转录调控序列,构建了一系列hfgl2 基因启动子荧光素酶报告基因质粒,将其与SARS冠状病毒核心蛋白真核表达质粒共转染CHO细胞.结果表明,转染前3个质粒hfgl2p(－1334)LUC、hfgl2p(－997)LUC、hfgl2p(－816)LUC的细胞的相对荧光素酶活性无显著改变;但转染hfgl2p( 468)LUC 质粒的细胞荧光素酶的活性较前明显降低,说明在hfgl2 基因启动子－816位至－468位（相对于转录起始点）之间存在着激活该基因的调控序列.本研究在一定程度上从分子水平揭示了SARS冠状病毒蛋白与宿主纤维介素基因之间的关系.     

人TNFAIP1 基因在常见细胞系中的表达

TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,TNFAIP1 蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类各种疾病的发生等重要过程,但对该基因确切功能和作用机制研究不多.该文利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在COS7以及NIH3T3细胞系中高表达,而在HeLa、HepG2、SW480、PanC1、MCF7等癌细胞系中低表达.由此推测TNFAIP1可能在癌症的发生中起到一定的作用.如果把TNFAIP1 基因克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,转染到HeLa细胞系中,发现过表达TNFAIP1 可促进HeLa细胞的凋亡.     

整合素β3亚单位胞内区在骨桥蛋白诱导血管平滑肌细胞黏附和迁移中的作用

为阐明整合素β3亚单位胞内区及其不同保守序列在骨桥蛋白（OPN）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）黏附和迁移中所起的作用, 构建了整合素β3亚单位胞内区肽段真核表达载体（p-EGFP-C3-β3CD）, 并人工合成了含有β3亚单位胞内区不同保守序列（NXXY）的寡肽（肽-747和肽-759）, 通过导入VSMC, 观察它们对OPN诱导VSMC黏附和迁移的影响.结果显示, 整合素β3胞内区在VSMC中强制性表达可使细胞在OPN上的黏附和迁移明显下降（分别为对照组的34.3%和31.7%）,导入肽-747、肽-759和肽-747+肽-759均可显著抑制VSMC的黏附和迁移, 其中肽-747+肽-759的作用更强(分别为对照组的36.4%和31.1%). 免疫荧光结果显示, 在转染p-EGFP-C3-β3-CD或肽-747+肽-759的VSMC中, 黏着斑蛋白的磷酸化水平降低, 黏着斑形成明显减少.研究结果表明, 整合素β3亚单位胞内区及其NXXY保守序列在黏着斑相关蛋白募集、黏着斑形成及VSMC黏附和迁移方面发挥重要作用.     

基质金属蛋白酶对肿瘤细胞生物学行为调节

近年,对于基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)与肿瘤发生发展的关系有了新的诠释,MMPs的功能已不仅限于通过降解细胞外基质来促进肿瘤的侵袭和转移,它们还可通过水解生长因子、黏附分子、受体等非基质蛋白而触发一系列生物学效应,调节肿瘤的生长、分化、凋亡以及肿瘤的血管生成和免疫逃避。重新认识MMPs的功能,将有助于设计以MMPs为靶标的新型抗肿瘤药物。     

平滑肌细胞骨架结构及其信号调节途径

平滑肌细胞骨架是一个复杂的动态性网络,是细胞生命活动不可缺少的细胞结构。Rho通过活化其下游靶分子促进应力纤维的形成,其中Rho—associated coiled—coil kinase(ROCK)和Dial在该过程中起关键作用;PKC通过在细胞内不同定位的亚型使细胞骨架蛋白磷酸化,发挥其调节细胞骨架重构的作用。两条信号转导途径通过Src途径相互联系,共同参与细胞骨架动力学的调节。     

基质金属蛋白酶与血管壁细胞外基质重建

细胞外基质（ECM）不仅维持血管壁的完整性,而且还为血管细胞传递增殖,迁移,分化和凋亡的调控信号,基质金属蛋白酶（MMP）及其内源性抑制剂（TIMP）通过调节ECM合成与降解之间的动态平衡,使ECM维持正常的结构与功能。在高血压,动脉粥样硬化与血管再狭窄的发生与发展过程中,MMP和TIMP的合成与分泌出现异常,由此所引起的ECM合成与降解失调使ECM迅速发生重建。     

粘着斑激酶活化与血管内皮剥脱后再狭窄的关系初探

粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体酪氨酸激酶,最初是在转染v-Src的鸡胚成纤维细胞中被发现.近年研究证实,AK介导细胞外信号由整合素受体向细胞内转导的过程.FAK的磷酸化激活以及由此产生的下游一系列蛋白质的磷酸化,是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)与细胞相互作用并产生一系列生物学效应的关键环节,参与细胞增殖、迁移与凋亡的调节过程.已经发现,AK与肿瘤的生长、浸润和转移密切相关.然而,在以血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle ell,SMC)增生为主要特征的血管再狭窄发生过程中,AK是否参与、介导了VSMC的迁移与增殖目前尚未见报道.本文就此进行了初步探讨.     

hhlim对心肌肥大的影响及其作用机制探讨

hhlim是从胎儿心脏中新近分离和克隆得到的与心脏发生相关的基因,其表达产物作为转录因子参与多种基因的转录调控和细胞的发育与分化过程.用细胞转染方法将外源性hhlim基因导入原代心肌细胞,发现该基因强制性表达可使心肌细胞体积明显增大.RT-PCR和蛋白质印迹结果表明,hhlim促心肌细胞肥大与诱导α-肌动蛋白(α-actin)过表达及重新启动胚胎期表达基因脑钠肽（BNP）表达有关.用可表达hhlim反义RNA的真核表达载体转染心肌细胞后,致心肌细胞肥大因子ET-1对BNP和α-actin表达的诱导受到显著抑制.这些结果表明,ET-1促进BNP和α-actin表达及引发心肌肥大的效应可能由hhlim所介导,提示hhlim表达与心肌细胞肥大的启动有关.单独或共转染转录因子hhlim、Nkx2.5、GATA-4表达质粒和BNP转录调控区指导的报告基因结果显示,hhlim强制性表达不仅能直接激活BNP基因表达,而且与NKx2.5具有协同作用.结果表明,hhlim可以通过直接或与Nkx2.5协同作用激活BNP基因的表达.