猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证

目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子（PIP,包含5＇调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb）构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化：将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3＇端的内含子剪接受体位点（splicing acceptor site,SA）突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA（M）-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异：载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA（M）-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3＇端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。     

大鼠胃纵行和环行平滑肌对细胞外核苷引起的差异收缩反应

目的：观察几种细胞外核苷如ATP、urIP和四磷酸脲腺苷（Up4A）在胃纵行平滑肌（Ⅲ）和胃环行平滑肌（CM）中引起不同的反应,P2X和P2Y受体拮抗剂以及环氧合酶抑制剂五磷酸二肌苷（11＇5I）、苏拉明（suramin）和吲哚美辛对№A在删和CM中引起的收缩的影响。方法：取大鼠全胃,分离LM和CM,使用organbath系统测量平滑肌收缩。结果：Up4A可以在I_aM和CM中引起与ATP和U1P类似的收缩;IP5I对LM和CM中由Up4A引起的收缩并无影响;但suramin和吲哚美辛则能在CaM中显著抑制由Up4A引起的收缩,而LM中无此现象。结论：两种胃平滑肌对核苷类药物及其抑制剂的反应有差异。     

山西历山和庞泉沟自然保护区木生真菌（英文）

对山西省历山和庞泉沟自然保护区的木生真菌进行了野外采集和室内鉴定研究,在532号标本中,鉴定多孔菌105种,革菌及齿菌18种。其中齿状真菌棉毛纤刺皮菌Fibrodontia gossypina、钙生棕绒毛菌Tomentella calcicola和孔状真菌白褐叉丝孔菌Dichomitus albidofuscus为我国木生真菌新记录种。根据采集的标本,对3种真菌进行了详细的描述及显微结构绘图,并列出上述123种木生真菌的名称,同时列出了每种的寄主或基质。     

全数字化X线摄影联合MR 动态增强检查诊断早期乳腺癌的 临床价值研究

摘要目的：分析早期乳腺癌的全数字X 线摄影与MRI影像学表现,评价全数字X 线摄影联合MRI 检查在早期乳腺癌诊断中的 临床价值。方法：回顾性分析2009 年10 月至2012 年5月在我院经穿刺或手术病理证实为早期乳腺癌的42例患者的临床资料, 术前均行数字X线及动态增强MR 检查,比较两种方法单独使用和联合使用的诊断乳腺癌的准确率。结果：全数字化X 线摄片 诊断早期乳腺癌的准确率为69.0%(29/42),动态增强MR 检查为95.2%(40/42),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);两者联合使 用诊断早期乳腺癌的准确率为97.6%(41/42)。结论：动态增强MR 检查对早期乳腺癌的诊断价值明显优于全数字X线摄影,但后 者对微小钙化显示较好,两者联合可提高诊断正确率,尤其对多腺体型和致密型乳腺的早期乳腺癌的检出具有重要的价值。     

卵巢上皮癌中ING4 基因启动子的甲基化状态及其临床意义

目的：探讨卵巢上皮癌中ING4 基因启动子的甲基化状态及其临床意义。方法：收集2005 年7 月至2012 年6 月哈尔滨医科 大学附属第一医院行全面分期手术并经病理检查确诊的150 例卵巢上皮癌组织标本,并以同期因子宫肌瘤或子宫腺肌症行子宫 全切除术或次全切除术并经病理检查确诊为正常卵巢组织的150 例标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测卵 巢上皮癌组织与正常卵巢组织中ING4 基因启动子的甲基化状态,蛋白印迹法检测ING4 蛋白的表达,并分析ING4 基因启动子 的甲基化状态与卵巢上皮癌临床病例特征的关系。结果：卵巢上皮癌组织中ING4 基因启动子的甲基化阳性率为42.7%（64/150）, 明显高于正常卵巢组织（4%,6/150）,差异有统计学意义（P<0.05）。ING4 基因启动子甲基化阳性的卵巢上皮癌组织中ING4蛋白 表达阴性或弱阳性;ING4 基因启动子甲基化阴性的卵巢上皮癌和正常卵巢组织中ING4 蛋白表达阳性;在64 例ING4 基因启动 子甲基化的卵巢上皮癌组织中,ING4 蛋白表达强度与ING4 基因启动子的甲基化程度呈负相关（r=-0.435,P<0.05）。卵巢上皮癌 组织中,ING4 基因甲基化的阳性率随着手术病理分期和组织学分级的增加而增加（P<0.05）;卵巢透明细胞癌（55.6%,10/18）和卵 巢子宫内膜样癌（59.3%,16/27）中ING4 基因甲基化的阳性率显著高于浆液性囊腺癌（33.9%,20/59）和粘液性囊腺癌（39.1%, 18/46）（P<0.05）;ING4基因启动子的甲基化状态与患者的年龄、有无腹水及淋巴结转移均无显著相关性（P>0.05）。结论：ING4 基 因启动子的甲基化可能促进了其在卵巢上皮癌组织中的表达失活,进而促进了卵巢上皮癌的生长和分化。     

实验性心肌肥厚大鼠左室c-fos表达及卡托普利的作用

心肌肥厚时,心肌细胞作出适应性反应发生结构改建,这种重构与压力超负荷早期心肌细胞 原癌基因表达过盛密切相关。本文应用大鼠腹主动脉缩窄模型结合血管紧张素转化酶抑制剂 卡托普利(Cap),研究心肌肥厚早期c-fos表达及六周后血压、心功能及酶学指标的改变, 以探讨Cap抑制心肌肥厚的可能机制。 1　材料与方法 　　(1)动物模型复制　采用体重(250±20) g的健康、雄性SD大鼠(由本校动物室提供),按腹主 动脉缩窄法制备压力超负荷性心肌肥厚模型,使腹主动脉残留管腔直径为0.7 mm。 　　(2)动物分组　动物分成两部分：第一部分：大鼠19 只,其中4只,在腹主动脉缩窄前及缩 窄后1 h、3 h、12 h分别处死,留取心脏。另15只随机均分成手术组、伪手术组、Cap治疗 组(n=5)。复制心肌肥厚模型后3 h处死动物,留取心脏,提取总RNA,检测左室c-fos mRNA表达。第二部分,大鼠30 只,随机均分成手术组(LVH,n=10,腹主动脉缩窄后未 用Cap治疗),伪手术组(sham,n=10,行伪手术)及Cap治疗组［LVH+Cap,n=10,腹 主动脉缩窄后用Cap50 mg/(kg*d)治疗］。建立模型6周后,右颈总动脉插管,记录动脉血 压后,进一步插管入左室,测取并计算左室内压力最大上升、下降速率及等容舒张期左室压 力下降的时间常数(T值)。处死动物,留取心脏标本备用。 　　(3)左心室c-fos mRNA表达　取左室心肌组织50 mg,一步法抽提RNA。用地高辛随机引物法 标记的c-fos探针(华美生物试剂公司,cDNA片段,1.3kb)进行斑点杂交,IBAS图象分析仪 测定杂交信号的相对光密度(IOD)。 　　(4)心肌重量及质膜Na+-K+ATPase活性测定　称量左室重量(LVW)及体重(BW),计算LVW /BW。制备10%心肌匀浆,差速分离质膜及线粒体。通过检测反应液中ATP水解释放的无机磷 含量来确定酶活性。     

细菌性阴道的病因与治疗的研究进展

细菌性阴道病 ( Bacterial Vaginosis,BV)是妇科的常见病、多发病。它是由于阴道内微生态平衡失调 ,厌氧菌和阴道加德菌过盛生长 ,兼性厌氧性乳杆菌受抑制所引起的一种无阴道粘膜炎症性表现的综合征。患细菌性阴道病时 ,阴道内乳杆菌的数量比用药前低 1 0 0 0倍以上或完全消失。应用抗生素治疗 ,虽然可使 BV的症状得到暂时缓解 ,但也进一步地杀死本已少得可怜的乳杆菌 ,加重阴道微生态失调的程度 ,从而使 BV反复复发。由于 BV的主要病理生理改变是阴道菌群失调 ,因此恢复患者阴道微生态平衡 ,保持阴道的正常微生态环境的生态制剂 ,成为…     

在水产养殖中作为生物防治因素的益生菌制剂（节译）

水产养殖 (鱼、甲壳动物、软体动物、藻类植物 )是发展最为迅速的行业之一 ,其产量在 1984～ 1995年间 ,每年以近10 %的速度增长 ,与之相比 ,畜牧业和捕捞业的产量每年仅以 3%和 1.6 %的速度增长 (Rana,K.J.1997)。疾病的爆发抑制了水产养殖产量的增长和水产贸易的发展 ,甚至影响了一些国家水产行业的发展。如在虾类养殖业中 ,疾病已成为产量增加的限制因素。到目前为止 ,应用常规办法 ,如使用消毒剂和抗菌剂对预防和治疗水产疾病的效果并不理想 ,并且在水产养殖业中也存在着类似在人类用药和农业中抗菌剂过量使用问题 ,这已经引起人们的…     

对德氏乳杆菌DM8909菌株的发酵工艺研究

德氏乳杆菌 DM890 9菌株是大连医科大学微生态学研究所分离驯化的一株兼性厌氧菌 ,主要用于防治非特异性阴道炎等妇科疾病。本实验通过对德氏乳杆菌 DM890 9菌株进行摇瓶、小型全自动发酵罐和 5 0 0 L发酵罐发酵工艺学研究 ,考察其发酵工艺中试条件。现将研究结果报告如下 :1　材料与方法1.1　菌种　本研究所使用的菌种德氏乳杆菌 DM890 9(L actobacillus debrueckii subsp.lactis)由大连医科大学微生态学研究所提供。1.2　培养基　摇瓶种子培养基、小罐发酵培养基及大罐发酵培养基均采用 L BS培养基。1.3　培养方法1.3.1　摇瓶培养　…     

红树林宜林海洋环境指标研究

通过文献资料综合和实地调查,分析研究了温度、盐度、沉积物、潮汐浸淹和波浪能量5种海洋环境因素对红树林总体和各树种分布和生长的影响。明确指出了温度对红树林纬向分布、盐度对红树林沿河口湾和潮水河的上溯、潮汐浸淹频率对红树林沿潮滩的横向分布、和海岸波浪能量对红树林由港湾向开阔海岸的沿岸分布的主导控制作用和各自在我国东南沿海红树林区表现的临界参数。最冷月平均气温9.3℃和水温10.6℃,为最耐寒树种秋茄人工种植分布的北界;大片红树林可分布于河口湾和潮水河的全年大部分时间以咸水为主的岸段(如夏季盐度常＜2.0‰,冬季盐度可达15‰～20‰),零星红树植物可接近枯季大潮咸水上界;红树林只能占据平均海平面(或稍上)与回归潮平均高高潮位之间,大致为潮汐浸淹频率47.5%和2.9%;利用16个方位的平均风速V(m/s),风向频率F(%),有效风区长度L(km),计算海岸波能指数W=∑(Vi2FiLi),W＜7.0×103为适宜红树林生长的低波能海岸;W＞10.5×103为不适宜红树林生长的高波能海岸;W=（7.0～10.5）×103为红树林生长零星或很差,或仅能生长人工林或幼林的中波能海岸。这些临界参数可以作为上述海洋环境因素定量的总体的宜林指标。