一株分离自土壤的蜡蚧菌的鉴定及对烟草粉斑螟的致病性

【目的】蜡蚧菌Lecanicillium是自然界一类重要的昆虫病原真菌,为了获取更多的蜡蚧菌作为控虫真菌资源,对从森林中的根际土壤分离得到的一株蜡蚧菌进行鉴定以及与其他几种病原真菌进行烟草粉斑螟Ephestia elutella的致病性对比。【方法】采用形态特征比较和转录间隔区(ITS)序列构建分子系统树对从贵州贵定松林下土壤中分离的菌株进行综合鉴定,采用浸虫法对烟草粉斑螟3龄幼虫进行致病性筛选。【结果】根据形态特征比较和系统发育分析,该真菌为丝枝蜡蚧菌Lecanicillium aphanocladii。在测试菌株中,环链棒束孢Isaria cateinannulata、球孢白僵菌Beauveria bassiana和丝枝蜡蚧菌对烟草粉斑螟3龄幼虫7 d的校正死亡率分别为79.22%,64.92%和77.92%,表现出较好的致死效果。【结论】丝枝蜡蚧菌对烟草粉斑螟幼虫的致死效果较好,可用作仓储内烟草粉斑螟的生物防治资源。     

SeMNPV持续性感染的甜菜夜蛾细胞株的建立

在昆虫种群中常常发生杆状病毒持续性感染,持续性感染可转变为增殖性感染而引发病毒流行病。本研究拟建立一个病毒-细胞模型,用于探讨杆状病毒持续性感染分子机制。将甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)在其宿主细胞Se301中无稀释连续传代以弱化病毒毒力,用传至第8代的SeMNPV感染Se301细胞后,虽然大部分细胞因病毒感染而裂解,但仍有少量细胞存活并可传代培养,该传代细胞株命名为P8-Se301。P8-Se301细胞在对数生长期的群体生长倍增时间为58~65 h,慢于Se301细胞的生长速度。光镜和电镜观察表明,少部分P8-Se301细胞具有病毒发生基质、病毒粒子、多角体等病毒感染特征。终点稀释法和感染中心测定表明,4.14%±0.99%的P8-Se301细胞可持续释放感染性的子代病毒,但该子代病毒在Se301细胞中的复制速度较野生型SeMNPV慢。结果表明,P8-Se301细胞呈现典型的持续性感染特征。     

采用高分子介导精子作载体制备转基因泥鳅

为探讨树形高分子介导精子载体技术产生转基因动物,将泥鳅精子与具有标记基因LacZ的pCH110重组质粒和树形高分子在保存液内孵育,经DNA原位杂交检测发现树形高分子介导下精子携事外源DNA的效率得到较大的提高,将捕获了外源DNA的精子,再与泥鳅卵进行体外人工受精。由此发育的鱼苗经PCR和LacZ组织化学检测,获得了高比例的转基因泥鳅,外源基因LacZ在泥鳅幼苗头部得到了明显表达。     

采用基因组测序技术进行胚胎种植前遗传学筛查的方法学研究及应用

目的采用第三代测序技术(NGS),对辅助生殖种植前的胚胎进行染色体非整倍性筛查,以提高移植胚胎的质量和试管婴儿的成功率。方法首先采用接受试管婴儿技术治疗不孕症的夫妇多余的正常囊胚进行方法学研究。采用多重置换扩增法扩增细胞基因组DNA。在此基础上对一对不孕症夫妇的囊胚进行检测,并指导囊胚选择。结果正常囊胚DNA抽提后,琼脂糖凝胶电泳显示扩增的DNA产物质量符合要求。文库构建后进行测序,数据结果显示为正常样本。在成功建立方法的基础上,选择的囊胚发育良好,成功孕育健康胎儿并导致健康婴儿出生。结论 NGS是一个可靠的胚胎染色体非整倍性筛查技术。该方法具有通量高、可自动化等优点,可以提高异常染色体的诊断水平。     

斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系Sl-zsu-1,可引起典型的细胞凋亡;但可以在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中复制并形成多角体.比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况,认为p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡;共感染实验结果表明,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制,推测SpltMNPV基因组中与p35同源的p49基因挽救了细胞的自杀行为.     

珊瑚Acropora pulchra (brook)的化学成分研究

首次对来自中国北海涠洲岛的珊瑚Acropora pulchra(brook)的化学成分进行研究,从乙醇浸提液的乙酸乙酯部分分离鉴定出7个化合物,并确立结构为十五酸十七酯(I)、正十六碳醇(Ⅱ)、鲨肝醇(Ⅲ)、1-正十六酸甘油酯(Ⅳ)、N—l—羟基甲基-2-羟基-(E,E)-3,7-十七碳二烯基十六酸酰胺(V)、胸腺嘧啶(Ⅵ)、尿嘧啶(Ⅶ)。     

ANO1对口腔鳞癌SCC-25细胞株的影响

采用免疫组化检测160例口腔鳞癌组织及相应正常组织的ANO1表达,并进行多项体外买验,以明确ANO1对SCC-25细胞迁移的影响。结果显示,正常组织中的ANO1阳性表达明显低于口腔鳞癌组织;有淋巴结转移的口腔鳞癌组织的ANO1阳性表达显著高于无转移的口腔鳞癌组织;多项体外实验表明,ANO1过表达有利于SCC-25细胞的迁移;尼氟灭酸能减缓细胞的迁移速度。综上所述,ANO1促进了口腔鳞癌患者体内的肿瘤转移,并增加了SCC-25细胞的体外移动、侵袭、伸展、剥脱能力,有望成为治疗口腔鳞癌的新的靶点。     

热休克蛋白70（HSP70）对HBV复制及抗原分泌的影响

目的了解慢性乙型肝炎患者（CHB）血清中热休克蛋白70（HSP70）与HBV—DNA的关系,并探讨HSP70能否影响乙型肝炎病毒（HBV）的复制与抗原分泌。方法选择安徽医科大学第二附属医院住院和门诊CHB患者60例为研究对象,并以30例健康体检人群为对照者,采用酶联免疫技术（ELISA）分析CHB患者和对照者血清HSP70表达水平,运用荧光定量PCR技术分析CHB患者血清HBV—DNA复制水平;以RNA干扰（RNAi）技术抑制HepG2．2．15细胞中HSP70基因的表达,同时分析细胞培养上清中HBVDNA以及相关抗原的表达情况。结果CHB患者血清中HSP70的表达水平明显高于其在健康对照者血清中的表达水平（P〈0．05）,且与HBV—DNA拷贝数呈正相关性（r=0．540,P〈0．05）;其中HBeAg阳性的CHB患者血清中HSPT0的表达水平也显著高于HBeAg阴性CHB患者血清中的表达水平（P〈0．05）。以RNAi技术特异性降低HSP70在HepG2．2．15细胞中的表达,HepG2．2．15细胞培养上清中HBV—DNA和相关抗原的分泌量明显降低（P〈0．05）。结论HSP70蛋白很可能在HBV的生命周期中发挥重要作用,从而影响HBV的复制和乙型肝炎的进展。     

羟乙基淀粉沉淀(HES)法分离脐血造血干细胞的临床优势分析

目的:探讨羟乙基淀粉沉淀(HES)法分离脐血单个核细胞(MNCs)的效果。方法:采集脐血31份,应用羟乙基淀粉(HES)沉淀飞和密度离心(Ficoll)法分离脐血MNCs,、纯化CD3+细胞、CD14+细胞、CD34+细胞,以台盼蓝拒染法检测细胞活力。结果:HES法MNCs回收率、CFU-GM计数高于Ficoll法(85.29±3.79 VS 47.06±4.61,t=35.67,P0.05;67.31±11.57/l×105MNCs VS28.54±6.39/l×105MNCs,t=16.33,P0.05);HES法分离的MNCs中CD3+、CD14+、CD34+细胞数均高于Ficoll法(t=5.76,t=2.51,t=6.67,P0.05)。结论:HES法分离MNCs可获得较好的回收率,是人脐血干细胞理想的分离方法。     

牙齿发育相关基因Osr2的生物信息学分析

目的：为生物学实验研究Osr2与牙齿发育的关系提供思路和参考。方法：本文运用生物信息学的同源比对、进化分析等方法,对Osr2及其编码蛋白的生物信息学特征进行分析。结果：结果显示Osr2蛋白质无信号肽,是非跨膜的疏水性蛋白,具有C2H2型、CHY型锌指结构域,是一类进化保守,高度同源的转录因子。结论：这一结果可为Osr2深入的结构与功能分析及利用提供进一步的信息与参考。