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目的快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因TNF-α的表达情况,构建TNF-α基因及内参GAPDH基因荧光定量PCR质粒标准品。方法利用版纳微型猪近交系4~6月龄猪建立动物模型,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-PCR扩增。纯化目的片段与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR,生成标准曲线。结果建立的TNF-α基因和GAPDH内参基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法灵敏度分别可达103和105拷贝,线性范围分别为103~109和105~109拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在的线性关系R2分别为0.993和0.999,扩增效率E分别为111.073%和95.948%。结论成功的构建了版纳微型猪近交系TNF-α基因质粒标准品和标准曲线,并用内参基因GAPDH进行校正,此方法可为探讨TNF-α基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。 相似文献
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分离鉴定了PaP3噬菌体57 kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒,通过SDSPAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白,转印PVDF膜后,对57 kD蛋白用Edman降解法进行N端氨基酸测序,进而从PaP3全基因组的256个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果显示噬菌体PaP3有9种结构蛋白分子,其中57 kD蛋白是由ORF34793编码的。57kD蛋白编码基因全长1542bp,G+C百分含量为49.16%,编码514个氨基酸。该蛋白分子量为57.4kD,等电点为5.879。实验表明该蛋白是一种结构性蛋白,很可能是噬菌体衣壳蛋白中的一种壳微粒。 相似文献
75.
香溪河河流连续统特征研究 总被引:32,自引:3,他引:29
以香溪河附石藻类密度、藻类叶绿素a浓度、Shannon-Wiener多样性指数及生态系统初级生产力随河流级别的变化为例探索该河流的连续统特征。结果表明,附石藻类密度、藻类叶绿素a浓度和Shannon-Wiener多样性指数总体上都有随着河流级别增加而增加的趋势,但在1~3级河段之间这种趋势并不明显,甚至出现了逆转。河流初级生产力也有随河流级别增加而增加的趋势,并在第4级河流达到最大,随后有所下降。在全水系范围内河流初级生产力(P)与群落呼吸(R)比值P/R均大于1,说明香溪河是一条以自养生产为主的河流。所研究的特征并不完全与连续统概念的预测相一致,表明河流已经受到了一定程度的人为干扰。 相似文献
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77.
草原生态动力学模式及其实际检验 总被引:4,自引:1,他引:3
基于物理定律、数学分析以及一些生态和气候学的简化, 建立了一个草原生态系统动力学模式. 该模式包括相互作用的3个变量, 即青草量、枯落物量和土壤水分. 主要生物及物理过程均用参数化方法表示, 而参数可由实测得到的宏观量反推出来. 用试算方法, 并用内蒙古草原的一些资料, 对模式参数先作标定; 然后用模式做计算, 结果与实况相吻合, 例如: 草原的存在要求年降水量大于一临界值(约300 mm), 产草量与年降水量有对应关系, 放牧过度会导致荒漠化等. 特别是, 青草和枯落物遮阴可以降低地表温度和减少蒸发, 这对维持草原、减少土壤水分损失是很重要的. 相似文献
78.
79.
蛋白质结构中卷曲螺旋的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
卷曲螺旋 (coiledcoil)是存在于多种天然蛋白质中的结构模式 .近年来 ,通过对天然蛋白质中卷曲螺旋结构以及根据已有知识设计合成的卷曲螺旋结构的研究 ,已基本掌握了这类结构模式的特点 ,并将特异的卷曲螺旋结构应用于生化分析、工业、医药卫生等领域 .本文主要从天然蛋白质中卷曲螺旋的主要存在形式及其生物学功能、卷曲螺旋的主要结构特点、影响卷曲螺旋稳定性和结构特异性的因素、卷曲螺旋结构设计及其应用以及今后卷曲螺旋研究的主要发展方向等几个方面对近年来卷曲螺旋结构的研究进展情况进行了综述 . 相似文献
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