版纳微型猪近交系TNF-α基因mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因TNF-α的表达情况,构建TNF-α基因及内参GAPDH基因荧光定量PCR质粒标准品。方法利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪建立动物模型,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-PCR扩增。纯化目的片段与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR,生成标准曲线。结果建立的TNF-α基因和GAPDH内参基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法灵敏度分别可达103和105拷贝,线性范围分别为103～109和105～109拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在的线性关系R2分别为0.993和0.999,扩增效率E分别为111.073%和95.948%。结论成功的构建了版纳微型猪近交系TNF-α基因质粒标准品和标准曲线,并用内参基因GAPDH进行校正,此方法可为探讨TNF-α基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。     

原发性心肌病的分子遗传学特性

心肌病(cardiomyopathy)是由心脏心室的结构改变和心肌壁功能受损导致的心脏病变,具体表现为心脏肌小节蛋白结构和功能的改变、离子通道结构和功能的改变、能量供给和调控受到影响、细胞膜成分的改变等。原发性心肌病是心肌病的主要种类,病变部位主要局限于心肌,包括肥厚型心肌病、扩张型心肌病、限制型心肌病、致心律失常型右心室心肌病和无类别心肌病5大类。心肌病的发生主要与多种基因的变异有关,这些基因主要编码肌节蛋白、桥粒蛋白、膜蛋白、钙结合蛋白和与线粒体氧化磷酸化有关的蛋白等。对原发性心肌病的分子遗传学特性的研究进行概述,为该病的诊断、筛查、预防和治疗提供参考。     

五年制高职护理学生乙型肝炎KAP及需求调查

目的：通过了解高职护理学生对乙型肝炎（简称＂乙肝＂）流行病学知识及在医疗护理过程中对乙肝病毒感染防护措施的知晓程度,了解感染乙肝病毒（HBV）后对学生的心理行为和社会功能的影响,为今后有针对性地开展学校传染病管理和宣传工作提供依据。方法：对盐城卫生职业学院2006级552名高职护理学生采用问卷调查的方式进行乙肝相关知识及职业暴露防护相关措施的调查。结果：高职护理学生对乙肝相关知识的了解比较丰富,主要原因是接受过乙肝流行病学的专业学习;但对在医疗护理过程中预防乙肝病毒感染的措施缺乏了解,并且感染乙肝后对其心理、学习、人际交往等方面均有不同程度的影响。结论：高职护理学生乙肝相关知识掌握的较丰富,但就预防乙肝病毒感染和病毒感染后的行为水平较低,学校应加强学生的职业暴露防护及健康心理行为的教育。     

下一代半导体测序技术在遗传性心肌病分子诊断中的应用

遗传性心肌病(Inherited cardiomyopathy, ICM)是一种常见的遗传性心脏疾病,主要由基因突变所致,是青少年和年轻运动员猝死的最主要原因之一。到目前为止,已经发现约100个基因和其致病有关,这些基因相关的变异位点具有不同的致病机制。随着临床遗传检测在遗传疾病诊断中的应用,对遗传性心肌病的分子遗传学特性及其致病机制进行深入了解,是对该病遗传诊断的关键。下一代半导体测序仪在2010年底由美国Life Technologies公司发布,其以布满微孔的高密度半导体芯片为测序基础,具有快速、经济、灵敏性好、准确率高等特点,已经应用于遗传疾病的突变筛查。文章主要对遗传性心肌病的分子遗传学特性和下一代半导体测序技术在遗传性心肌病遗传检测中的应用以及面临的挑战进行了概括总结,有助于遗传性心肌病的诊断、预防和治疗。     

7型庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因的克隆及原核表达分析

为了探究7型庚型肝炎病毒E2基因编码蛋白作为ELISA试剂盒研发所需检测抗原的可能性,建立更为可靠的GBV-C检测方法,本研究应用在线软件对GBV-C E2基因序列的编码区进行生物信息学分析,预测了E2基因编码蛋白的抗原表位、空间结构及线性B细胞表位等;通过逆转录PCR从7型GBV-C病毒中克隆出E2基因片段,将其克隆到pET-32a载体上,重组载体pET-32a-E2转化大肠杆菌BL21后诱导表达,用12%SDS-PAGE检测,结果重组蛋白主要以包涵体形式存在,其分子量大小约为55kD,利用His标签抗体对重组蛋白进行Western-blotting验证。结果表明GBV-C E2蛋白有多个抗原表位点,克隆的E2基因序列长度为945bp,重组蛋白以包涵体形式表达,其分子量大小与预期一致,此研究为GBV-C检测试剂盒的研制工作奠定了基础。