莱芜猪心脏cDNA文库的构建与鉴定

以莱芜猪心脏为供试材料,采用改进的异硫氰酸胍法提取心脏总RNA。通过SMART技术反转录合成全长cD-NA,经LD-PCR扩增后与pMD18-T载体连接并转化细菌DH5α,测定滴度和重组率,构建成莱芜猪心脏全长cDNA文库。经初步检测,原始文库的滴度为1.8×105CFU/mL,重组率约为94.4%。从原始文库随机挑取13个单菌落过夜培养,提取质粒,经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切,凝胶电泳显示插入片段大小在0.3-2.0kb之间。     

Establishment and biological characteristics of Luxi cattle fibroblast bank

A fibroblast line from ear marginal tissue of Luxi cattle (LXCEM2/2) was successfully established by direct culturing of explants. Biological analysis showed that the population doubling time (PDT) for reviving cells was approximately 24 h. Measurement of lactic dehydrogenase (LDH) and malic dehydrogenase (MDH) isoenzymes showed no cross-contamination among the cells. Karyotyping showed that the frequency of cells with chromosome number 2n = 60 was 90.7–92.2%. Tests for bacteria, fungi, viruses and mycoplasma were negative. The efficiencies of expression of pEGFP-N3, pEYFP-N1 and pDsRed1-N1 were between 6.3% and 31.6% at 24 h, 48 h and 72 h after transfer; at 24 h, fluorescence was well distributed in the cytoplasm and nucleus except for some cryptomeric vesicles. Every index of the Luxi cattle cell line meets the quality control standards of the American Type Culture Collection (ATCC). Not only has the germline of this important cattle breed been preserved at the cell level, but also valuable material had been provided for genome, postgenome and somacloning research. Moreover, the establishment of this technical platform may provide both technical and theoretical support for storing the genetic resources of other animals and poultry at the cell level.     

Heterogenous expression of poly-gamma-glutamic acid synthetase complex gene of Bacillus licheniformis WBL-3

Bacillus licheniformis WBL-3, one of poly-gamma-glutamic acid (gamma-PGA) producers, depends on the existence of glutamate in the medium. In this paper, gamma-PGA synthetase complex gene (pgsBCA) was cloned from Bacillus licheniformis WBL-3. pgsBCA gene of B. licheniformis WBL-3 was highly homologous with pgsBCA gene of B. licheniformis 14580. The similarity was 97%, but the similarity of pgsBCA gene between B. licheniformis WBL-3 and Bacillus subtilis IF03336 was only 74%. However, when pgsBCA was expressed in Escherichia coli, the E. coli clone produced gamma-PGA extracellularly. The yield of gamma-PGA was 8.624 g/l. This result infers that B. licheniformis and B. subtilis has the similar gamma-PGA biosynthesis mechanism, namely, glutamic acid is catalyzed by an ATP-dependent amide ligase to synthesize gamma-PGA.     

药用野生稻叶中淀粉合成酶基因家族的序列分化和特异表达

淀粉不仅是植物自身和后代生长繁殖的重要营养与能量储备,而且是人类膳食中碳水化合物的主要来源。植物中淀粉合成主要发生在两个阶段,一是在形成临时淀粉的光合作用阶段,另一个则是在成为贮藏淀粉的营养积累阶段。相对于最后的淀粉贮藏阶段,临时淀粉的形成阶段在植物整个碳水化合物代谢过程中扮演着更为重要的角色,然而却一直少有关注。为深入研究初始淀粉合成过程中相关酶在植物中的进化模式,选取了药用野生稻(Oryza officinalis)为研究对象,通过对其全叶转录组的重测序,定性、定量地调查了淀粉合成酶基因家族在稻属野生物种光合器官中的基因类型和表达变化。共有8个淀粉合成酶基因的完整编码序列在药用野生稻的叶中首次被识别。系统发育分析表明,这8个基因分别隶属SSI、SSII、SSIII、SSIV、SSV和GBSSII基因家族。序列比较和相对表达定量分析显示,药用野生稻与栽培稻的淀粉合成酶基因家族的进化模式具有高度的一致性,两个物种的同源基因在m RNA水平的序列相似度达到95%–98%。基于非同义置换和同义置换比率的统计检验表明,8个基因在两个物种间均经历了严格的纯化选择。另外,3个在栽培稻胚乳中特异表达的基因在药用野生稻的叶转录组中未筛查出来,而4个在栽培稻叶中优势表达的基因在药用野生稻叶中同样呈现相对较高水平的表达。     

限制性条件下药物对细菌抑制作用微量量热法研究

用微量量热计测定了福氏志贺氏菌(Shipella flexneri)中7株菌(6、2b、3b、sb、la、x、y)在合成药物抑制作用下生长的热谱图,按限制性条件下微生物生长的模型进行了数学处理,得出了比生长速率(μ),由此确定了各细菌比生长速率(μ)与药物浓度?之间的定量关系,求出了比生长速率(μ)为零时的用药浓度,并对该合成药对各细菌的抑菌效果进行了分析．     

盐度和CO2倍增环境下碱蓬幼苗呼吸酶活性的变化

研究了生长在正常大气CO₂和CO₂倍增环境中的盐生植物碱蓬(Suaedasalsa)幼苗呼吸酶活性对KCl和NaCl的反应。结果表明,在CO₂倍增(700μl·L^-1)和正常大气CO₂(350μl·L^-1)下,300mmol·L^-1KCl和NaCl均能抑制琥珀酸脱氢酶(SDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)活性,而异柠檬酸脱氢酶(IDH)活性为NaCl抑制、KCl促进; NaCl和KCl明显抑制细胞色素氧化酶(CO)和光呼吸中乙醇酸氧化酶(GO)、羟基丙酮酸还原酶(HPR)活性; 并指出在KCl胁迫下,CO₂使三羧酸循环(TCAC)的运行变慢,NaCl胁迫下使其加快,TCAC运行限速步骤与MDH无关,CO为盐对呼吸代谢影响的重要位点。另外,K⁺、Na⁺对蛋白表达的影响有差异,CO₂可使盐胁迫下的碱蓬幼苗蛋白表达降低。     

基于16S rRNA基因高通量测序研究狞猫肠道微生物多样性

[目的]研究狞猫肠道微生物多样性特征。[方法]对7只健康成年野生狞猫（2只雄性,5只雌性;2只来自济南野生动物园,5只来自威海野生动物园）粪便微生物16S rRNA基因V3-V4区进行高通量测序,对狞猫肠道微生物多样性进行研究。[结果] 7只狞猫共获得肠道微生物16S rRNA基因V3-V4区有效序列1458741条,平均208392条,序列平均长度433 bp。通过以97%的序列相似性进行分类,获得操作分类单元（OTU）平均 233个。经序列比对和分类鉴定,这些OTU都属于细菌域,包括13个门,26个纲,43个目,75个科,119个属。其中,丰度最高的细菌门是厚壁菌门（Firmicutes,平均占61.7%）、放线菌门（Actinobacteria,12.42%）、拟杆菌门（Bacteroidetes,7.79%）、梭杆菌门（Fusobacteroidetes,7.79%）和变形菌门（Proteobacteria,7.53%）。丰度最高的科依次是消化链球菌科（Peptostreptococcaceae,平均占16.15%）,梭菌科I（Clostridiaceae_I,14.78%）,毛螺菌科（Lachnospiraceae,13.13%）,红蝽杆菌科（Coriobacteriaceae,12.31%）等。丰度最高的属是柯林斯氏菌属（Collinsella,11.44%）,艰难梭菌属（Peptoclostridium,10.91%）,狭窄梭菌属1（Clostridium_sensu_stricto_1,10.3%）,拟杆菌属（Bacteroides,7.41%）,消化链球菌属（Peptostreptococcus,5.21%）等。7只狞猫的肠道微生物中有平均15.35%的OTU没有归类到属。样本间聚类分析结果表明,来自同一动物园的样本聚为一支。[结论]本文通过高通量测序技术研究了狞猫肠道微生物的组成和多样性特征,为狞猫的救护饲养和消化生理学研究提供基础数据。     

不同天气条件下青头潜鸭越冬期行为的响应模式

2018年11—12月在河南民权国家湿地公园,采用定点观察法、扫描取样法对越冬青头潜鸭在不同天气条件下的行为响应模式进行研究。结果表明: 在晴天,静息、飞行、运动是青头潜鸭越冬期的优势行为(65.5%),觅食、修整是次要行为(31.9%);行为节律表现为上午觅食、中午静息、下午觅食修整;飞行通常发生在觅食高峰前,运动行为多与其他行为相伴,其时间分配与觅食呈正响应,与静息呈负响应。相较于晴天,阴雨天青头潜鸭增加了对静息和觅食的时间分配,静息、觅食和运动为阴雨天的主要行为(76.5%),修整、飞行为次要行为(20.3%);觅食和静息的高峰时段后移,傍晚时达到高峰,飞行和修整时间显著减少。与晴天相比,雾霭天青头潜鸭静息、觅食、运动和修整的时间分配增加,飞行行为减少;觅食高峰后移至中午和下午,静息高峰后移至下午;静息、运动和觅食为雾霭天的优势行为(70.6%),修整和飞行为次要行为(27.5%)。研究表明,不同天气条件下,民权湿地公园青头潜鸭的越冬期行为在时间分配、行为节律、优势行为方面存在一定的响应;阴雨天和雾霭天青头潜鸭会分配更多的静息和觅食时间,并通过增加能量摄入和减少耗能行为应对恶劣天气。     

不规则植物材料单位鲜重光合速率的测定

本文介绍了一种单位鲜重叶片光合速率的测定和换算方法,并分析了其优点和用途。该方法特别适合测定不规则叶片及非叶器官的光合速率。     

中国蓼属头状蓼组植物叶表皮微形态及其分类学意义

采用光学显微镜对中国蓼属头状蓼组17种7变种植物的叶片下表皮微形态进行了观察研究,结果表明,其叶片下表皮微形态特征分为4种类型:(1)气孔器类型为无规则型,表皮细胞不规则形,垂周壁波状或深波状;(2)非典型不等型,偶有无规则型,表皮细胞多边形或不规则形,垂周壁弓形、波状或深波状;(3)平列型,表皮细胞不规则形,垂周壁深波状;(4)平列型兼有非典型不等型,表皮细胞不规则形,垂周壁波状。根据其叶片下表皮气孔器类型,结合该组植物形态、习性等特征,将中国蓼属头状蓼组植物划分为4个系,即掌裂叶系、多年生系、蓼子草系以及一年生直立系。