异种移植中转基因动物技术应用的现状

超急性排斥反应一直是异种移植中的主要障碍,转基因技术为跨越这一障碍发挥了重要作用,转基因技术克服超急性排斥反应的主要技术策略有：利用抗补体基因插入技术创建转基因猪,供体抗原遗传修饰和受体基因治疗。     

发情周期不同时期猪卵泡颗粒细胞凋亡的观察

为探讨猪发情周期不同时期卵泡发育和闭锁的规律及机理,本实验通过TUNEL原位标记,H,E．染色以及放射免疫测定等手段研究了猪发情周期不同阶段卵巢表面各类卵泡数量的变化。各类卵泡中颗粒细胞的凋亡比例,闭锁卵泡的形态变化以及发情周期各阶段血清孕酮及雌二醇水平的变化等问题。卵泡的总数在发情间期最多,为26．8个／卵巢,发情期最少,为7．4个／卵巢。小放泡的数量在发情间期最多。为15个／卵巢,在发性期数量最少,为5．7个／卵巢。中等卵泡数量在发情间蜞多,为8．5个／卵巢,在发情后期卵巢中无中等卵泡。大卵泡的数量在发情前期最多,为7．4个／卵巢,在发情后期最少,为0个。小卵泡的颗粒细胞凋亡比例（各时期平均21．03％）显著高于大卵泡,在发情后期显著降低。中等卵泡的颗粒细胞凋亡比例（平均16．6％）在发情前期显著低于其它各期。大卵泡的颗粒细胞凋亡比例（平均11．2％）在发情周期各阶段无显著差异,均显著低于中等卵泡和小卵泡。     

转基因猪外源生长激素基因的定位研究——非同位素标记染色体原位杂交技术

近几年来发展起来的染色体原位杂交技术是进行基因定位研究的重要手段。它为进一步进行基因定点整合研究提供依据。本文采用非同位素标记染色体原位杂交技术对经显微注射得到的转基因猪进行了内源和外源猪生长激素(PGH)基因在染色体上定位的研究。 用BhlI对pSMTPGH注射基因(本室制备)进行单酶切,选取3.5kb片段以Dig进行标记。为了提高灵敏度,我们采用了胶体金标记抗体技术并结合使用银增加试剂。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行了统计学分析,发现内源PGH基因位于12p~(11),与国外Thomsen,P.D.等报道的一致。插入的外源PGH基因呈随机分布,但对某一转基因猪来说,外源基因的插入是集中在某一染色体上。这一结果的发现为进行转基因猪外源基因定点整合提供了依据,也为研究外源基因整合位点和转基因猪表观性状的关系准备了条件。     

Nodal信号的研究进展

早期胚胎发育过程中,组织者能够诱导胚胎组织形成完整的体轴。研究表明细胞之间的信息交流是脊椎动物胚胎诱导作用的基础。Nodal作为早期胚胎诱导信号的关键成分,参与了中胚层和内胚层的形成、前-后体轴的位置确定和左-右体轴特化等一系列关键事件,表明Nodal信号在脊椎动物早期发育过程中具有重要作用。     

小鼠单个植入前胚胎cDNA文库的构建及应用

哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法,阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种较好的方法。用小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2细胞、4细胞和8细胞胚胎分别构建了cDNA文库。滴度分别为:62×105、83×105、104×106、151×106和162×106。随机挑选了29个克隆并进行了序列分析,结果表明,和已知表达序列标签(ESTs)同源的序列为6552%(1929),未知序列为1379%(429),并发现了2个重复序列。用特异性引物,分别对小鼠持家基因(βactin)和发育特异基因(OCT4)进行PCR扩增,结果表明,所建立的cDNA文库可以反映小鼠胚胎在不同发育阶段整个基因群体的转录活性,为阶段特异性基因的筛选和小鼠早期阶段基因表达模式的研究提供了一种有价值的资源库 。