牛泡沫病毒（BSV）对牛免疫缺陷病毒（BIV）的激活作用

用瞬时表达分析等方法,证明牛泡沫病毒（ Ｂ Ｓ Ｖ）３０２６ 中国毒株能在体外激活牛免疫缺陷病毒（ Ｂ Ｉ Ｖ） 基因表达, Ｂ Ｓ Ｖ３０２６ 编码的反式激活因子 Ｂｏｒｆ１ 行使这种激活作用。缺失突变分析表明, Ｂｏｒｆ１ 在 Ｂ Ｉ Ｖ Ｌ Ｔ Ｒ 上靶序列位于－ ４１０／ － １１５（ ＋ １ 为转录起始位点） 区域,但其中的 Ｎ Ｆκ Ｂ 位点（ － ３６７／ － ３１９） 与这种激活作用无关,包括转录起点下游（ Ｒ Ｕ５ 区） 在内的－ １１５／ ＋ ２０４ 区域也与这种激活作用无关。该结果对研究 Ｂ Ｉ Ｖ 致病机理及防治 Ａ Ｉ Ｄ Ｓ 有重要意义。     

一种新的人类疱疹病毒:Kaposi''s肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)

1994年Y.Chang等人从AIDS患者的Kaposi's肉瘤(KS)组织中分离到了两种独有的序列[1],并由KS建立了基因组文库,对其中外源序列进行克隆和序列分析[2],初步确认一种新的人类疱疹病毒--KS相关疱疹病毒.     

短小芽孢杆菌的遗传转化——Ⅰ.感受态菌株的筛选

通过诱变剂处理,从原来不出现感受态的短小芽孢杆菌(Dacillus pumilus)289中筛选获得一株具有感受态的菌株——B.pumilus N 246。感受态培养和转化操作与枯草杆菌(B.subtilis)基本相同。     

牛免疫缺陷病毒基质蛋白和衣壳蛋白的可溶性表达

基质蛋白和衣壳蛋白是BIV的主要结构蛋白,在病毒感染及整个复制周期中起重要作用。本文采用 pTXB系统在大肠杆菌中表达出融合状态的牛免疫缺陷病毒 BIV基质蛋白 MA及衣壳蛋白 CA,经几丁质亲合、自剪切纯化后,获得不含融合片段的纯化产物。每克湿菌体MA产量可达毫克级,CA表达量达十毫克级。用原核表达获得的高纯度CA蛋白免疫大白兔获得的抗血清,经Western Blot 分析显示能够与病毒颗粒的 CA蛋白发生特异反应,证实表达产物具有良好的免疫原性和反应原性,可用于制备相应抗体,为研究 BIV相应基因表达变化,进行体外蛋白质相互作用试验提供工具。     

RelB对HIV-1 Vpr转录激活及诱导细胞G2/M期停滞功能影响的初步研究

Vpr是人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)的辅助蛋白之一,在病毒复制及AIDS进程中起重要作用。为了研究Vpr完成其生物学功能的分子机制,本研究利用酵母双杂交技术,从人的cDNA文库中筛选,并经免疫共沉淀技术证实NF-κB通路中的重要蛋白RelB与Vpr存在相互作用;发现RelB蛋白能促进Vpr介导的对NF-κB报告基因的激活,也能促进Vpr对HIV-1LTR的反式激活作用。利用流式细胞技术发现RelB促进Vpr诱导细胞周期G2/M期停滞。上述结果表明,RelB辅助Vpr完成其转录激活以及调控细胞周期的功能。     

短小芽孢杆菌作为芽孢杆菌属基因工程受体菌的研究

以质粒pUB110 DNA转化B. pumilus 289原生质体,转化频率为10~(-3)—10~(-9)与B.tubtilis 168系统相当;但B.pumilus 289原生质体的再生频率(0.3—12.0％)略低于B.subtilis 168(1.53—24.16％);在无选择压力条件下质粒pUB110在B.pumilus 289中经过45个世代周期,自发丢失率小于3％,同于B.subtilis 168系统。外源基因在B.pumilus 289中经25个世代周期丢失率低于5％,而在B.subtilis 168系统中则高达24％;外源基因的表达水平亦高于B.subtilis 168系统。因此,B.pumilus 289是一个值得进一步开发的基因工程受体系统。     

外源质粒在枯草芽孢杆菌BF7658中的稳定性及其基因表达

通过B.subtilis噬菌体PBSI转导,已将携带热稳定α-淀粉酶基因的质粒pAmy411引进了B.subtilis BF7658.转导频率为10_(-9)转导子/PFU。尽管pAmy 411的诲贝数在B.subtilis BF7658中较在B.subtilis AS 1.1176中高1倍,但其传代稳定性却较后者低。质粒携带的热稳定α-淀粉酶基因的表达水平在B.subtilis BF 7658中较在B.subtilisAS1.1176中高6倍。     

短小芽孢杆菌的遗传转导

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)噬菌体PP5在碱性蛋白酶生产菌珠B.pumilus 289中能进行普遍性转导。PP5对于B.pumilus 289的营养标记的转导频率为10~(-6)转导子/PFU。对于B.pumilus 1037和B.pumilus 289之间的链霉素抗性标记的转导频率为10~(-4)至10~(-7)转导子/PFU。从而建立了一个新的B.pumilus遗传转导系统。     

重组p300组蛋白乙酰转移酶结构域的表达及应用

组蛋白乙酰化修饰是基因起始转录的关键步骤. p300等组蛋白乙酰转移酶（HATs）催化组蛋白和非组蛋白的乙酰化. HATs具有多种细胞功能,而且乙酰化对底物蛋白的功能改变也具有重要功能. 组蛋白乙酰转移酶p300可乙酰化多种细胞内蛋白,某些病毒蛋白与p300有相互作用并促进病毒复制. 因此, p300是细胞内具有广泛功能的转录激活因子. 组蛋白乙酰转移酶结构域（HAT区）是p300乙酰化酶活性的最小中心功能域,在p300乙酰化底物中具有重要功能. 本文重组表达了对应p300 HAT区的GST-p300 HAT蛋白,对其乙酰化酶的活性进行检测. 结果证实,p300 HAT蛋白在体外可高效乙酰化组蛋白H3. 随后,对体外乙酰化反应的条件进行优化. 总之,本文构建了一种简单高效、非放射性体外乙酰化体系,适用于对潜在底物蛋白的乙酰化水平和机制进行分析,以及乙酰化蛋白的相关功能的研究.     

替换HIV-1衣壳蛋白基因SHIV的构建及其活性测定

将猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus,SIVmm239)中gag基因的衣壳蛋白部分置换成人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus type1,HIV-1 HXBc2)的相应部分,构建出替换了衣壳蛋白基因的人/猿嵌合免疫缺陷病毒(SHIV)原病毒DNA.用此SHIV原病毒DNA转染293T细胞,细胞中能够检测到嵌合病毒基因的转录与翻译;在细胞培养液上清中亦可检测到装配出的病毒颗粒.病毒颗粒形态正常,含有基因组RNA,具有反转录酶活性,嵌合的外源衣壳蛋白能够正确剪切,形成棒状的核心.将此嵌合SHIV病毒感染MT4细胞,病毒能够吸附并进入细胞,能完成反转录过程,但不能增殖.