毛白杨PtoeIF5A4的原核表达、纯化及鉴定

为获取大量高纯度的毛白杨PtoeIF5A4蛋白以便研究其特性和生物学功能,以pGEM-T Easy-PtoeIF5A4质粒为模板,PCR扩增毛白杨PtoeIF5A4基因的cDNA编码区,测序正确后,经酶切将其插入到原核表达载体pET28a上,然后将表达载体转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经不同浓度IPTG诱导培养后发现,0.1 mmol/L IPTG,28℃诱导4 h时目的蛋白最多,且该重组蛋白主要以可溶性的形式存在。采用亲和纯化从可溶性蛋白中纯化到大小为18 kD的蛋白条带。Western blotting分析发现亲和纯化所得蛋白可以与His单克隆抗体发生免疫交叉反应,表明纯化所得蛋白是PtoeIF5A4重组蛋白。     

一种新的大鼠隐睾模型的建立

目的改善大鼠隐睾模型的制作方法,提高隐睾模型的质量,并对新模型的稳定性进行研究。方法28只大鼠随机分为对照组（ctrl）和模型组（modl）采用模拟失重大鼠模型,对大鼠进行3周尾部悬吊进行造模,随后模型组大鼠解悬吊恢复8周观察该模型的稳定性。结果经过3周的尾部悬吊,模型组所有大鼠睾丸均滑入腹腔,同时和对照组相比,睾丸和附睾的重量出现极显著的降低（P〈0.01）。HE染色发现对照组大鼠睾丸的生精小管结构排列紊乱,精原细胞消失,附睾尾中成熟精子消失。经过8周的恢复,大鼠的睾丸及附睾仍未恢复到正常水平（P〈0.01）,HE染色显示其生精小管结构和精原细胞数量并未出现明显的改善。结论尾吊法所建立的大鼠隐睾模型效果稳定,可以有效模拟大鼠隐睾时的睾丸温度变化情况,同时对大鼠的伤害较小,操作比较简单。     

人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化

以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD的比例,加入氯喹的浓度,转染后的孵育时间,最佳的低温培养温度以及加入组蛋白抑制剂的浓度进行了优化。结果显示,FuGene HD的转染效率最高,达到56.7%。当转染的DNA=2μg/4×106细胞时,DNA∶FuGene HD的最佳比例为1∶4(W/V);加入氯喹能够增强FuGene HD的转染效率,最佳浓度为100μmol/L,转染后的最佳孵育时间为6h;低温诱导能够提高293T细胞表达抗体的能力,最佳的温度为33℃;加入组蛋白抑制剂丁酸钠或丙戊酸能够明显提高抗体的表达量,丙戊酸的效果优于丁酸钠。通过对转染试剂,转染方法,培养温度,组蛋白抑制剂的加入等条件进行优化使人源性抗bFGF抗体的表达量从1.5mg/L提高到了15.1mg/L。     

复杂型Stanford B型主动脉夹层腔内修复术中左锁骨下动脉重建方式分析

目的:总结复杂型Stanford B型主动脉夹层中左锁骨下动脉重建的经验和方法。方法:2010年4月至2016年5月,共有43例复杂型Stanford B型主动脉夹层采用腔内修复术治疗,并均重建左锁骨下动脉,其中右腋动脉-左腋动脉人工血管旁路18例,开窗技术14例,烟囱技术11例。结果:均成功手术,无术中死亡,术后造影显示支架敷贴良好,定位准确,左锁骨下动脉血流通畅。术后无头晕症状,双上肢血压差均在15 mmHg之内。1例术后5天并发逆行性A型夹层猝死。肾功能衰竭2例,行透析治疗后治愈。随访38例,失访4例,随访时间2~33月(17.0士5.2月),1例患者术后45天猝死;术后3月、1年复查主动脉CTA均示支架无移位。1例I型内漏,术后8月复查CTA示内漏消失;1例术后9月人工血管内血栓形成,中段狭窄约40%;2例并发支架远端动脉瘤形成。结论:腋动脉人工血管旁路术、开窗技术、烟囱技术进行左锁骨下动脉重建,联合主动脉腔内修复术治疗复杂型Standford B型主动脉夹层,可以取得满意的临床效果。     

主动脉球内囊反搏在心脏手术后心功能不全患者中的应用价值

目的:探讨主动脉球内囊反搏置入在心脏手术后心功能不全患者中的临床应用价值。方法:收集我院收治的心脏术后患者60例,随机分为对照组和实验组,每组各30例,患者均给予相应常规对症治疗,包括吸氧、强心、利尿、扩血管治疗,实验组患者在对照组基础上给予主动脉球囊反搏置入。治疗结束后,对两组患者治疗前后的连续心输出量(CCO)、心脏指数(CI)、人氨基末端B型脑钠肽前体(NT-pro BNP)、中心静脉压(CVP)水平以及临床疗效进行检测并比较。结果:治疗后,两组患者的CCO以及CI水平与治疗前相比均升高(P0.05),NT-pro BNP以及CVP水平均下降(P0.05);与对照组相比,实验组患者治疗后CCO以及CI水平较高,NT-pro BNP以及CVP水平较低(P0.05);实验组患者的治疗总有效率与对照组患者相比较高(P0.05)。结论:主动脉球内囊反搏植入能够显著升高心脏手术后心功能不全患者患者的心输出量,降低心脏后负荷,提高心脏功能,具有较好的临床疗效。     

血胃泌素含量在腹部磁疗前后的变化

为了探讨腹部脉动磁场治疗对胃泌素分泌的影响 ,应用放射免疫法测定了一组健康人磁疗前后血清胃泌素的含量 ,结果显示腹部脉动磁场治疗 1次后血平均胃泌素浓度较磁疗前略微升高 ,但其差异并无统计意义 (P >0 .0 5 )。初步表明脉动磁场 ( 2× 2mT)上腹部治疗 1次 ( 1 5min)并不能显著影响血胃泌素的浓度。     

基于功能一致性和网络拓扑属性预测冠心病致病基因

基于功能一致性利用蛋白质互作网络挖掘潜在的疾病致病基因,对于了解疾病致病机理和改进临床治疗至关重要．基于基因功能一致性和其在蛋白质互作网络中的拓扑属性将基因与疾病之间建立关联,对疾病风险位点内的基因进行了致病风险预测,并通过GO及KEGG功能富集分析方法进一步筛选,预测出新的致病基因．预测出了51个新的冠心病致病基因,分析发现大部分基因参与了冠心病的致病过程．为疾病基因的挖掘提出一个新的思路,从而有助于复杂疾病致病机理的研究．     

菠菜铁氧还蛋白的简易分离方法

用DEAE纤维素（DE－52）从菠菜叶片的抽提液中吸附蛋白,再以NaCl分级洗脱得到含铁氧还蛋白（Fd)的分部,此Fd制剂具有特征性的Fd氧化还原吸收光谱和催化体叶绿体光还原NADP的活性。     

斑点热群新疆立克次体对宿主细胞感染过程的形态学研究

对新疆立克次体(精河株,下同)感染体外培养的人胚肾传代细胞(简写MERN)和体内鸡胚卵黄囊膜细胞的标本进行了电镜观察。发现立克次体以宿主细胞膜内翻形式进入宿主细胞,在胞浆和胞核内寄生,以二分裂方式增殖;并能察见多个立克次体的链状结构;胞浆内的菌体以核膜内翻方式进入核内,以密集成丛或散在方式生长;在感染后第5—8天的MERN中,立克次体以出芽方式释放,在第8天后通过宿主细胞解体方式释放。文中讨论了新疆立克次体感染宿主细胞过程中的有关机制。我们还发现在宿主细胞内立克次体的附近有直径为20—23nm的微管结构,其功能待深入研究。