浙江枝吻纽虫吻的形态学研究

采用组织学、电镜技术等手段对浙江枝吻纽虫吻的生物学特性进行了研究,阐述浙江枝吻纽虫吻的结构与其他分枝纽虫吻的组织结构异同.研究结果表明,浙江枝吻纽虫吻为一条长的肌肉组织的管道结构,一端连着头部组织,一端延伸在一个封闭的空腔中.吻腔环肌层与体壁环肌层没有交叉点,但是吻腔壁背面的环肌与体壁背面的环肌通过一束肌肉而交织在一起.在吻壁处富含大量的分泌细胞和神经细胞.当吻离体后,在普通海水中伸缩能维持 2~4 h.     

梨园芳香植物间作区中国梨木虱与其天敌类群的相互作用

为探讨间作芳香植物对梨园中国梨木虱与其天敌类群相互作用的影响,在梨园中设置不同种类的芳香植物间作处理,以清耕区为对照,研究不同芳香植物间作区中国梨木虱及其天敌类群组成、种群消长动态、时间生态位的变化,并进行灰色关联度分析。结果表明,不同处理区中国梨木虱及其天敌类群数量和发生频率、组成及时序特征、时间生态位宽度与重叠存在明显差别。在梨树年生长周期中,薄荷间作区的中国梨木虱的时间生态位宽度明显增大,多数天敌的时间生态位宽度显著增加,中国梨木虱与天敌种群发生量分布较均匀,但发生的高峰不明显,时间生态位重叠指数均较大,表现出时序上的同步性和跟随性。孔雀草间作区、罗勒间作区、自然生草区的中国梨木虱的生态位宽度较薄荷间作区小,有明显的高峰期,天敌的生态位宽度较对照大,无明显的高峰期。一些天敌种群如跳小蜂、丽草蛉、茧蜂、姬蜂与中国梨木虱在时序上同步性较大,跟随现象明显;而龟纹瓢虫、异色瓢虫和七星瓢虫等天敌种群与中国梨木虱在时序上同步性较差,跟随现象较弱。灰色关联度分析结果表明,薄荷间作区跳小蜂、孔雀草间作区中华大草蛉、罗勒间作区龟纹瓢虫和中华大草蛉、自然生草区丽草蛉、茧蜂、赤眼蜂对中国梨木虱的影响程度较其它种群大。结果显示,梨园间作芳香植物可能通过改变中国梨木虱及其天敌类群的组成、时序特征和生态位特征等控制中国梨木虱的发生。     

临沂市肉鸡致病性大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性研究

目的查清临沂市肉鸡大肠埃希菌的优势血清型及耐药情况,为研制疫苗和科学防治本病提供依据。方法对病料进行细菌分离培养,应用形态学检查、生化试验、致病性试验和血清学试验对大肠埃希菌及其血清型进行鉴定,通过药敏试验研究其耐药性。结果从365份病料中,分离出大肠埃希菌311株,分离率为85.2%。优势血清型为O78、O1、O11、O18、O15和O2;对链霉素、氨苄西林、利福平、庆大霉素、恩诺沙星、环丙沙星和左氧氟沙星等药物表现出很高的耐药性,耐药率分别为98.0%、87.3%、86.0%、77.3%、73.4%、70.0%和64.6%,而对大观霉素、头孢噻呋、多黏菌素、氟苯尼考和痢菌净高敏。结论临沂市肉鸡大肠埃希菌的优势血清型有O78、O1、O11、O18、O15和O2,分离菌株对大部分抗菌药物产生耐药性。因此,治疗鸡大肠埃希菌病应通过药敏试验,合理地选择药物。     

海带内生芽胞杆菌DNN7和HSN2胞外蛋白抗肿瘤活性初步研究

为检测海带内生芽胞杆菌DNN7和HSN2胞外蛋白的抗肿瘤活性,用0.22μm滤膜过滤将海带内生芽胞杆菌DNN7和HSN2的菌体和发酵液分开,用硫酸铵沉淀发酵液的蛋白组分并用SDS-PAGE检测,用海虾毒性法和MTT法检测胞外蛋白的抗肿瘤活性。结果表明,海带内生芽胞杆菌DNN7的粗蛋白主要由分子量约为66×103、52×103和34×103的3条带组成,HSN2的粗蛋白主要由分子量约为44×103和52×103的2条带组成。DNN7胞外蛋白对体外慢性粒细胞白血病癌细胞K562、肝肿瘤细胞HepG2和乳腺癌细胞MDA-MB-231均具有较好的抑制活性,其抑制率分别高达96.46%、42.99%和85.70%;HSN2胞外蛋白对体外慢性粒细胞白血病癌细胞K562、肝肿瘤细胞HepG2和乳腺癌细胞MDA-MB-231也具有较好的抑制活性,其抑制率分别为92.65%、66.80%、88.48%。     

干姜化学成分和药理作用研究进展

干姜(Zingiberis Rhizoma)为姜科姜属植物姜(Zingiber officinale Rosc.)的干燥根茎,是药食两用的常用中药,具有抗炎杀菌、抗氧化、抗血小板聚集和抗肿瘤等多种药理活性,可用于消炎、镇痛及止呕等。其化学成分复杂,主要包括挥发油、姜辣素、二苯基庚烷等结构类型。本文就干姜的化学成分和药理作用研究现状作一综述。     

木麻黄SSR-PCR反应体系的建立与优化

为得到木麻黄SSR-PCR反应的最佳体系,以4个种(短枝木麻黄、山地木麻黄、粗枝木麻黄、细枝木麻黄)的24个无性系为材料,采用L₁₆(4⁵)正交设计对影响木麻黄SSR-PCR反应的4个因素(Taq酶、dNTP、Mg²⁺和引物)在4个水平上进行了优化,并利用直观分析和方差分析两种方法对PCR结果进行评价。结果表明:引物、Mg²⁺和dNTP均对木麻黄SSR-PCR反应结果有极显著的影响(P<0.01),影响程度由大到小为:引物>Mg²⁺>dNTP,而Taq酶对扩增结果无显著影响;确定了两种木麻黄SSR-PCR反应体系(体系6和体系15),体系6为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L^-1引物、1.5 mmol·L^-1 Mg²⁺、0.1 mmol·L^-1 dNTP、0.5 U Taq酶;体系15为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L^-1引物、1.75 mmol·L^-1 Mg²⁺、0.2 mmol·L^-1 dNTP、1.25 U Taq酶,反应体系共10μL,不足部分用ddH2O补足。从节约成本和降低非特异性产物的角度考虑可将体系6作为最佳体系,体系15为备用体系;本试验所选荧光引物M26、M36的退火温度在52~62℃均可扩增出清晰明亮的条带。为简化操作步骤和减少非特异性产物,可选择60℃作为引物M26、M36的最佳退火温度。     

雷公藤研究进展

雷公藤具有抗炎、抗免疫、抗肿瘤等多种药理活性,现在临床上广泛用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮和慢性肾炎等自身免疫性疾病.其化学成分复杂,主要包括生物碱、二萜、三萜、神经酰胺等结构类型.本文就近年来雷公藤属植物雷公藤的化学成分和药理作用研究进展作一综述.     

一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定*

目的: 建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法: 人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果: 该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论: 本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。     

重组猪肺表面活性蛋白A在体外可抑制PRRSV感染宿主细胞

【目的】研究重组猪肺表面活性蛋白A(SP-A)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的抑制作用。【方法】采用PCR方法从含有猪SP-A基因的质粒中扩增SP-A基因,并将其插入到含有人CD5信号肽序列的真核表达载体pcDNA3.1A-CD5中,构建成SP-A基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5-SPA/MH。将重组表达载体通过磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western blot方法鉴定表达产物,采用Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析法从培养基中分离和纯化重组SP-A蛋白,通过ELISA方法检测SP-A蛋白与PRRSV的结合活性。将SP-A蛋白与PRRSV孵育,然后感染MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞,感染72 h后测定病毒滴度,分析重组SP-A蛋白对PRRSV感染的抑制作用。【结果】结果表明构建的真核表达载体能够介导SP-A基因在HEK293T细胞中进行分泌表达;表达的重组猪SP-A蛋白能够与PRRSV进行剂量依赖性结合;用重组猪SP-A蛋白与PRRSV进行孵育,然后感染MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞,结果显示SP-A处理的PRRSV感染细胞后的病变程度明显低于对照组。感染72 h后,SP-A处理组的PRRSV在MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞的滴度明显低于SP-A非处理组。【结论】重组猪SP-A在体外对PRRSV的感染有明显的抑制作用,揭示SP-A具有抗PRRSV的活性。