厄洛替尼单药与替莫唑胺联合放疗对肺腺癌伴脑转移的临床疗效分析

目的:探讨厄洛替尼单药与替莫唑胺联合放疗治疗肺腺癌脑转移的有效性和安全性。方法:选择2009年1月~2011年12月我院收治的54例肺癌脑转移患者为研究对象,随机分为厄洛替尼组和替莫唑胺联合放疗组。厄洛替尼组(34例)给予口服厄洛替尼150 mg/d服药直到病情进展或不能耐受副作用,替莫唑胺联合放疗组(20例)给予全脑放疗(40Gy/20次,4周)并同期给予替莫唑胺75 mg·m-2·d-1,d1-5 po,放疗后序贯替莫唑胺150mg·m-2·d-1,d1-5 po,q28d,共6周期。治疗结束后,分析和比较两组的无进展生存期(PFS)、中位生存期(OS)、总有效率(RR)和疾病控制率(DCR)以及不良反应的发生情况。结果:厄洛替尼组的RR和DCR分别为76.5%和88.2%;替莫唑胺联合放疗组分别为80%和95%,两组比较差异均无统计学意义(P0.05)。两组的PFS分别为10.1和7.1个月,差异无统计学意义(P0.05),厄洛替尼组的OS为20.1个月,较替莫唑胺联合放疗组(10.8个月)明显延长,差异有统计学意义(P0.05)。两组常见的不良反应为皮疹、骨髓抑制、消化道反应、肝功能损伤等,其中厄洛替尼组和替莫唑胺联合放疗组皮疹的发生率两分别为76.5%和5%,两组比较有统计学差异(P0.05),两组其它不良反应的发生率比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:厄洛替尼治疗肺腺癌脑转移的近期疗效与替莫唑胺联合放疗相当,但其可显著延长患者的中位生存期,不良反应轻微。     

酵母双杂交筛选人乳腺cDNA文库中与Gankyrin相互作用的蛋白

目的：应用酵母双杂交技术,筛选与Gankyrin有相互作用的蛋白质。方法：应用酵母双杂交系统,以Gankyrin基因全长为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与Gankyrin相互作用的蛋白质,并运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆。结果：以Gankyrin为诱饵筛选出了5个阳性克隆,对其中一个蛋白质RhoGDI2与Gankyrin进行了免疫共沉淀与GSTpull-down实验验证,证实了它们的相互作用。结论：Gankyrin能与RhoGDI2发生相互作用,在此基础上,可以开展Gankyrin调控肿瘤发生机制的研究。     

假蜜环菌黄曲霉毒素氧化酶的基因克隆、表达、纯化及酶学性质分析

【目的】黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO)来源于假蜜环菌(Armillariella tabescens)的细胞内提取物,具有转化黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的特性。为更进一步了解该酶的性质,我们克隆了AFO的基因,并进行了重组AFO蛋白的表达、纯化和酶学性质分析。【方法】本研究利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得的AFO短肽序列设计简并引物进行逆转录,再通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了AFO基因的全长cDNA序列。构建重组表达载体pPIC9-afo,在毕赤酵母中进行重组AFO(rAFO)的融合分泌表达,用Ni离子螯合层析进行rAFO的纯化,获得有活性的rAFO后,对其进行肽质量指纹(peptide mass fingerprinting,PMF)鉴定和酶学性质分析。【结果】黄曲霉毒素氧化酶(AFO)基因的开放阅读框为2088 bp,编码695个氨基酸;肽质量指纹鉴定结果显示重组AFO的肽片段序列覆盖率为63.2%。活性测定表明纯化后的重组AFO(rAFO)比活力为234 U/mg;对rAFO进行酶学性质分析表明,对于底物黄曲霉毒素B1,rAFO的Km值为3.93±0.20×10-6 mol/L;反应最适温度为30℃,最适pH为6.0;30℃放置90 min后酶活力下降50%;rAFO在pH5.5-7.0之间酶活力较稳定,相对活力维持在51%-65%之间。【结论】本文第一次成功克隆并重组表达了一种具有黄曲霉毒素B1转化功能的酶——黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO),纯化后的重组AFO(rAFO)具有较好的黄曲霉毒素B1转化活性,为进一步研究和应用奠定了基础。     

载体介导的小干扰RNA诱导p53基因的沉默

目的:筛选有效抑制p53基因表达的靶位点,以研究其在哺乳动物细胞中的功能.方法:用Ambion公司的RNA干扰(RNAi)设计软件设计了3段针对野生型p53基因的长度为19 nt的反向重复序列,在人工退火条件下形成双链,将其构建到pSilencer3.1-H1 neo载体上,与pcDNA3.1-HA-p53(野生型)载体共转染Cos7及293T细胞,用Western blot检测HA-p53蛋白质的表达;将pCMV-GFP-p53与p53-RNAi或空载体共转入Cos7细胞,于激光扫描共聚焦显微镜下比较GFP-p53的表达;将p53-RNAi和空载体分别转入BEL-7405-p53-RE-luc 细胞,在不同剂量化疗药物阿霉素的作用下,通过活体成像仪观察内源p53的表达;利用G418(neo)筛选获得稳定整合p53-RNAi的H460细胞(p53野生型)株,用流式细胞仪分析正常及p53基因沉默细胞的周期变化.结果:筛选到一个有效的p53基因沉默位点,并在H460细胞中得到p53基因沉默的稳定细胞株.结论:获得了有效的p53基因RNAi位点,为进一步研究p53基因在细胞中的功能提供了有力的工具.     

基于特异性PCR和荧光检测技术快速鉴定艾纳香

为建立快速准确的艾纳香分子鉴定方法。采取筛选艾纳香及其混伪品基因组DNA的提取方法,针对艾纳香特异性位点设计引物,优化PCR扩增条件,荧光检测扩增产物。结果表明碱裂解法更适于艾纳香基因组DNA的提取;叶绿体基因（tDNA）特异引物能特异性扩增艾纳香DNA,其扩增产物荧光检测呈绿色,混伪品无反应发生。试验结果显示该法简化了分子鉴定过程,省时节力,且结果准确可靠,可作为艾纳香植物和药材的鉴定方法。     

植物篱篱前淤积带与篱下土坎土壤水库和抗剪性能对比研究

为探究紫色土坡地植物篱篱前淤积带与篱下土坎处土壤贮水能力和抗剪性能的差异及变化规律，选取四川遂宁水土保持试验站10°新银合欢植物篱小区（L10）、10°香根草植物篱小区（V10）和15°香根草植物篱小区（V15），分上、中、下坡采集篱前淤积带和篱下土坎（无下坡）0-30 cm耕层土壤，测定土壤基本物理性质和土壤抗剪强度，计算土壤水库总库容、滞洪库容、内摩擦角φ和粘聚力c。结果表明：（1）同一篱带，篱前淤积带土壤保水贮水能力优于篱下土坎，其中篱前淤积带土壤自然含水率较之篱下土坎显著高6.52%-12.13%。（2）同一篱带，篱下土坎土壤透气性以及土壤抗剪性能均优于篱前淤积带，其中篱下土坎土壤非毛管孔隙度较之篱前淤积带显著高5.61%-57.70%。（3）同一小区，篱前淤积带保水贮水能力均表现为下坡 > 中坡 > 上坡，而篱下土坎均为上坡>中坡。其中V15小区上述趋势最明显，其下坡篱前淤积带（上坡篱下土坎）的土壤总库容和滞洪库容分别为上坡篱前淤积带（均为中坡篱下土坎）的1.04倍和1.03倍（1.02倍）。（4）同一小区，篱前淤积带土壤内摩擦角、粘聚力c和抗剪强度均表现为上坡 > 中坡 > 下坡，篱下土坎均为上坡>中坡。其中V10小区上述趋势最明显，其上坡篱前淤积带（上坡篱下土坎）上述指标依次为下坡篱前淤积带（均为中坡篱下土坎）的1.06、1.09倍和1.05倍（1.04倍）。（5）一个雨季前后篱前淤积带和篱下土坎土壤透气性、保水贮水能力及抗剪性能均无显著变化。     

气候、植被及土壤因素交互作用对宁夏土壤有机碳的影响机制

基于宁夏全区121个土壤剖面样点，研究不同深度(0—30、30—80、80—120cm)土壤有机碳的空间分布特征，通过相关性、方差分解和构建结构方程模型，分析气候、植被和土壤因素对宁夏不同深度土壤有机碳的影响及其作用途径。结果表明：(1)宁夏不同深度土壤有机碳含量均呈现中间低南北高的空间分布趋势，0—120cm剖面土壤有机碳含量随着土壤深度的增加而降低，土壤有机碳含量均值为5.49g/kg,变异系数达90.71%,含量偏低且空间异质性强。(2)各土层土壤有机碳与年均气温、干燥度、碳酸钙、pH均呈现极显著的负相关性(P<0.01),与年均降水量、相对湿度、植被净初级生产力、全氮、全磷、全钾、钙离子、阳离子交换量、粘粒含量均呈现极显著的正相关性(P<0.01)。(3)各因素对不同土层土壤有机碳的作用方式和影响程度有差异。土壤全氮、全磷、碳酸钙、阳离子交换量均能直接影响土壤有机碳，年均气温和植被净初级生产力对土壤有机碳的直接影响效应不显著，主要通过土壤属性间接影响土壤有机碳含量。随着土层深度的增加，气候和植被因素作用明显减弱，土壤因素作用增强并成为主要影响因素。该结果有助于宁夏土...     

红外光谱结合化学计量学快速检测熊胆粉真伪及掺伪问题CSCD

利用红外光谱技术对熊胆粉正品、伪品及掺伪品进行快速鉴别并预测掺伪比例,建立熊胆粉的快速质量评价方法。采集94批熊胆粉正品、70批伪品(猪胆粉、牛胆粉、羊胆粉、兔胆粉、鸡胆粉、鸭胆粉、鹅胆粉)及180批掺伪品(掺伪猪胆粉、掺伪牛胆粉)的红外光谱图,利用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)及偏最小二乘回归(PLSR)分别建立熊胆粉正品、伪品和掺伪品的定性校正模型及不同类别掺伪品掺伪比例的定量校正模型。熊胆粉正品、伪品及掺伪品的定性校正模型对样本的判别准确率分别为99.64%(校正集)和95.65%(验证集);通过进一步判别分析,可鉴别熊胆粉伪品及掺伪品种类,准确率均大于95%;在2个不同类别掺伪品定量校正模型中,验证集相关系数(R_(V)^(2))和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.9874、2.6300%(熊胆粉掺伪猪胆粉)和0.9826、3.1887%(熊胆粉掺伪牛胆粉);3个定性模型及2个定量模型均表现出优秀的预测能力。本研究建立的红外光谱结合化学计量学方法可实现对熊胆粉正品、伪品和掺伪品的快速鉴别及掺伪比例确定,为熊胆粉的质量控制及评价提供参考。