人地中海贫血β654基因作为外源基因用于转基因的制备方法

目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础。方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连接酶反应将其克隆入含βLCR调控序列的基础载体pBGT51质粒中,经PCR扩增、酶切、反向点杂交及DNA测序鉴定重组质粒,用EcoRⅤ酶切获得转基因所用的外源基因。结果将人地中海贫血β654基因作为外源基因克隆入基础载体pBGT51质粒中构建了重组质粒βBGT51,用EcoRV酶切获得含人β654基因及βLCR调控序列的6.5kb的DNA片段,制备了可用于显微注射转基因的外源基因。结论采用该方法构建的含人地中海贫血β654基因的重组质粒,可获得用于显微注射转基因的外源基因。     

诱导胚胎干细胞向角膜上皮细胞分化的实验研究

探索胚胎干细胞在表层角膜缘基质诱导下向角膜上皮细胞分化的可能性.体外培养带GFP标记的ES-D3细胞,并利用视黄酸进行预诱导,然后将预诱导后的细胞接种在表层角膜缘基质上,细胞融合形成单层后,随机分为3组进行研究:第1组传代后直接进行检测;第2组在气-液界面上培养10天,然后植入裸鼠皮下以进行体内诱导;第3组作为对照组,不给予GFP-ES-D3细胞特殊诱导条件,细胞自由分化.诱导分化的细胞植入裸鼠皮下体2周后没有畸胎瘤形成.诱导分化的细胞呈现上皮样外观,体内诱导组和体外诱导组免疫组织化学染色均检测到CK3,P63和PCNA表达阳性,电子显微镜检查可见两组细胞表面都有微绒毛和细胞间紧密连接形成.实验对照组部分细胞脱落和死亡,大部分表现神经样细胞的树突样外观,小部分未死亡的贴壁细胞呈多态性,这些结果表明胚胎干细胞在特定条件下经表层角膜基质诱导能够分化为角膜上皮细胞.胚胎干细胞诱导分化有可能为眼表重建和组织工程化角膜的构建提供上皮种子细胞.     

绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定

为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 GFP ,通过对昆明小鼠的囊胚腔注射 ,获得了 4只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠。其中 1只存活至成年 ,3只出生时死亡。荧光显像及组织PCR检测显示了绿色荧光蛋白在小鼠体内的嵌合情况。以绿色荧光为指标可实现活体水平的动态观察 ,本实验首次观察到以GFP为指标所示的机体嵌合情况与根据毛色嵌合推测的机体嵌合情况存在很大差异 ,以GFP为嵌合指标更加全面而准确 ;但不排除GFP对小鼠发育存在一定毒性的可能 ;另外 ,有结果显示供体ES细胞在宿主体内除了大片补丁状嵌合外 ,还存在细胞散在嵌合的情况 ,后者提示了在组织中利用GFP对ES细胞实施单细胞追踪和实时观察的可行性 ,为胚胎发育和疾病发生的相关研究提供了新的观察方法     

晚志留世五房贝类Pentamerifera属在我国的首次发现

一、前言壳表光滑的具五房贝属(Pentamerifera Khodalevich, 1939)是一种特殊的五房贝类,以发育几乎伸达贝体前缘的长腹中隔板和匙形台为特征.此属系霍达列维奇(Khodalevich, 1939)所创,模式种是 Pentamerus taltiensis Tschernyschew, 1893,     

纪念优秀的中年地层古生物学家杨绳武同志逝世一周年

优秀的中年地层古生物学家、我们的同窗挚友杨绳武同志去世一年了。1984年深秋的一天,传来他因公殉职的噩耗,我们一个个都惊呆了,久久凝望着他的照片,陷入了悲哀的沉思,往事一幕幕在我们脑海里浮现。1958年9月初,我们与杨绳武同学一起考入北京地质学院普查系。自那以后,大家朝夕相处,共度了四个春秋。他,细高个儿,热情坦率,随和爽朗,时时流露出聪颖与机灵。在老师的辛勤培育下,他学习刻苦,讲究方法,注重效果,在班上常以优异的成绩名列前茅。北京近     

三种SPF小鼠喉气管粘膜细菌丛初步分析

目的：了解ＳＰＦ级免疫功能正常小鼠及免疫功能缺陷小鼠喉气管粘膜细菌分布情况,探讨菌丛分布与免疫功能的关系。方法：按占群体１５％的比例随机抽取小鼠,无菌手段采集样品作需氧和厌氧培养分离单纯菌落,作出鉴定。结果：免疫功能正常的小鼠有１种：ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,检出细菌有赛氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、大肠杆菌;免疫功能缺陷的小鼠有ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠和Ｓｃｉｄ小鼠,检出细菌有：变形杆菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、赛氏葡萄球菌、大肠杆菌、胶团拟杆菌、口颊拟杆菌、衣氏放线菌、绿脓杆菌、大消化链球菌和有待进一步鉴定的革兰氏阳性杆菌。结论：提示免疫功能正常与缺陷的ＳＰＦ小鼠上呼吸道存在的菌丛可以与小鼠共生,并无引起明显病理改变     

三种SPE小鼠喉气管粘膜细胞细菌丛初步分析

目的：了解ＳＰＦ级免疫功能正常小鼠及免疫功能缺陷小鼠喉气管粘膜细菌分布情况,探讨菌丝分布与免疫功能的关系。方法：按占群体１５％的比例随机抽取小鼠,无菌手段采集样品作需氧培养分离单纯菌落,作出鉴定。结果：免疫功能正常的小鼠有１种：ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,检出细菌有赛氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、大肠直菌;免疫功能缺陷的小鼠有ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠和Ｓｃｉｄ小鼠,检出细菌有：变形杆菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、赛     

肿瘤颅内外转移机理的实验性探讨

众所周知,胶质瘤很少发生颅外转移,但许多肿瘤却容易转移入颅内,本文以动物实验方法探讨这种现象发生机理。ＢＡＬＢ／Ｃ裸小鼠给予左侧颈内动脉注射人脑胶质瘤及黑色素瘤株细胞（１－２×１０／ｍｌ细胞悬液）后饲养观察。半月处死全部裸小鼠并对其进行大体及组织学检查。黑色素瘤颅内转移瘤成瘤率达１００％。而有部分胶质瘤却只能在颅外成瘤后少数破坏颅骨才能进入颅内,对照组采用胶质瘤作腹腔注射,结果８例中有５例发生肺部转移。本实验说明黑色素瘤只有很强的通过血脑屏障能力而胶质瘤细胞本身具有穿透血脑屏障以外的其它血管壁的浸润转移能力,而原发于颅内的胶质瘤不发生颅外转移很可能与其不能通过血脑屏障有关。     

中国西南地区的仿无洞贝(Atrypoidea)及其地层意义

仿无洞贝(Atrypoidea Mitchell et Dun,1920=Atrypella Kozlowski,1929)属于光滑的无洞贝族,广泛分布于中、上志留统。过去,它多见于大洋洲、北美洲和欧洲,中亚亦有报道。近年,在我国也发现不少产Atrypoidea 的地点。除西南地区外,还有内蒙古达尔罕茂明安联合旗,新疆天山地区库车县、和静县,四川西部二郎山和西北部若尔盖以及甘肃迭部等地。对西南地区产Atrypoidea.地层的时代,有着不同的认识。盛怀斌(1975,页75)研究四川     

云南曲靖志留系关底组腕足类无洞贝AtrypoideafoxiJones居群分析*

化石居群具有丰富的生物学与生态学内涵,相关研究是古生物学和古生态学的重要内容之一。通过研究居群,能够了解其生长规模的变化及结构,并推测其生长环境。在云南曲靖龙王庙采石场志留系关底组下部采集到一层腕足类,以无洞贝Atrypoidea foxi Jones这一种占优势,其中铰合标本共计381枚。通过居群结构分析,其大小-频率曲线呈正态分布且略微负倾,显示成年个体标本占居群的主体;生存分析显示幼年到成年个体曲线略微上凸,成年至老年大个体曲线下凹,暗示多数个体能发育至成体甚至老年大个体,这表明其所属环境适宜其生存。回归分析显示:该种个体生长过程中有些大个体变得较为横宽;大个体的壳厚不稳定;随着个体凸度变大,其槽隆发育程度逐渐增强。考虑到腕足动物个体大小受长宽厚综合影响,用体积作为指标来表达个体大小更为准确。结合已有研究,本文用密度法拟合出腕足动物体型大小公式,可为相关研究提供参考。