长链非编码RNA介导Wnt/β-catenin信号通路调控骨代谢的研究进展

骨代谢的平衡取决于骨形成及骨吸收之间的动态平衡,Wnt/β-catenin信号通路能够广泛参与骨吸收及骨形成的调控,在维持骨代谢平衡中发挥着重要作用。近年来有研究表明,长链非编码RNA (Long non-coding RNA,lncRNA)也广泛参与骨代谢各阶段的调节,还能通过Wnt/β-catenin信号通路参与骨代谢平衡的调控。目前关于lncRNA介导Wnt/β-catenin信号通路调控骨代谢的综述报道较为鲜见。鉴于此,文中主要以Wnt/β-catenin信号通路为切入点,概述lncRNA在骨代谢中的调控作用,发现lncRNA能够通过靶向作用于miRNA间接调控Wnt/β-catenin信号通路,也能通过Wnt/β-catenin信号通路上的关键因子直接激活或抑制Wnt/β-catenin信号通路,进而发挥其对骨代谢的调控作用,这些发现为lncRNA调控骨代谢作用机制的研究提供了新的思路和方向。     

史前人类对动物骨骼油脂的开发和利用

动物骨骼油脂的开发和利用是史前人类生存活动的重要组成部分。西方学者的研究表明,这一过程可能包含了敲骨取髓和骨脂提取两种不同的人类行为。相较于敲骨取髓,骨脂提取更为复杂,不仅要将骨骼砸碎成较小尺寸,还要加水煮沸骨骼碎片,过程中不断添冷水使水保持温和沸腾的状态,才能获得浮于水面的骨脂。目前,国内学者在此领域的研究多关注于前一行为而对后者鲜有论述。本文通过对相关科学文献的全面梳理,系统介绍了史前人类骨脂提取行为的鉴定分析手段和方法,进而探讨了这一行为在古人类资源利用程度、流动性、用火方式和烹饪技术等方面的指示意义与价值。     

天津蓟县桃花园墓地明清时期缠足女性足骨的形态观察

本文对天津蓟县桃花园墓地明清时期101例缠足女性足骨形变情况进行了观察和分析。结果显示,不同个体的同名骨骼形变类型和程度不同,有的个体两侧足骨呈不对称状。跗骨在整体尺寸上缩小,且部分跗骨会产生形变。跖骨和近节趾骨因受缠足外力的影响在形态上会产生剧烈的变化,主要变现为跖骨和近节趾骨纤细、弓弯,关节面改变,其近、远端以及跖骨体和趾骨体的上下径和横径均产生形变。总体而言,跖骨和近节趾骨的形变程度较跗骨而言更大。本文总结了判断某个体是否缠足的依据,特别指出需要同时观察距骨和跟骨的形态改变。鉴于其他疾病（如高弓足、麻风病、风湿性关节炎）也可导致足骨的畸形样貌,在进行个体缠足判定时,需要进行综合成因分析。缠足由文化行为所导致,其足骨形变特征有别于因病理原因导致的足部畸形。功能压力分析能够有效地解释缠足个体足骨形变的成因及过程。     

人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白在昆虫细胞中的表达和活性分析

目的:利用BaculoDirect杆状病毒表达系统融合表达人OPG功能片段p22-194和分枝杆菌HSP70 p111-125基因,并鉴定重组蛋白及其生物学活性。方法:将编码人OPG功能片段和分枝杆菌HSP70功能片段基因克隆至杆状病毒转座载体,将重组转座载体与BaculoDirectTM Linear DNA进行LR重组连接反应,构建出重组杆状病毒DNA,转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。在Sf9细胞中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,用Ni柱纯化。采用破骨细胞生成抑制试验和抑炎试验鉴定表达产物的生物学活性。结果:重组病毒在感染昆虫细胞后48h开始出现一相对分子质量为28 kDa大小的特异条带,感染后72～96 h蛋白量达到高峰。破骨细胞生成抑制实验及抑炎试验结果显示,重组蛋白能明显抑制破骨细胞的生长和分化,同时亦具有抑制炎症反应的作用。结论:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达OPG-HSP70融合蛋白,该融合蛋白具有抑制破骨细胞生成和抑制炎症反应生物学活性。     

不同来源成骨细胞构建组织工程骨之分子生物学评价

目的:探讨骨膜来源成骨细胞(POB)和盖骨来源成骨细胞(COB)在构建组织工程骨中的黏附、增殖和分化能力.方法:研究分别选用人胚POB和COB为种子细胞,接种于生物衍生骨上,经过10天的体外培养,提取总RNA,经过逆转录成cDNA,采用实时定量PCR对目的基因成骨细胞特异转录因子(Cbfa1)、成骨细胞特异基因(osterix)、Ⅰ型胶原(ColI)、骨钙素(osteocalcin,OC)以及整合素Integfina5β1读取扩增循环数(cycle threshold,Ct).结果:在组织工程骨中,POB和COB对ColI、OC、Cbfal以及osterix的表达没有统计学意义的差别,Integrinα5β1的表达可见POB明显高于COB.结论:POB与COB在与生物衍生材料接触后,仍可保持终末的分化性状,三维孔隙结构促进成骨细胞迅速而活跃的完成增殖期.POB对生物衍生骨的粘附能力优于COB.     

多孔钽钉植入治疗早期股骨头缺血性骨坏死

目的:总结多孔钽钉植入治疗成人早期股骨头缺血性骨坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)的手术方法及临床疗效.方法:2008年3月-2009年2月,采用多孔钽钉植入治疗10例(共11髋)ANFH患者.男7例,女3例;年龄18-36岁,平均28岁.致病原因:创伤性2例,激素性2例,酒精性1例,特发性6例.单侧9例,双侧1例.左侧5髋,右侧6髋.根据1995年Steinberg分型:Ⅰ期3例3髋,Ⅱ期7例8髋.Harris评分为(52.3±1.2)分.病程11-26个月,平均15个月.术前术后影像学对比.结果:手术时间平均25min,平均出血量50ml.术后患者切1:2均Ⅰ期愈合,无感染等并发症发生.10例均获随访,随访时间7-14个月,平均11个月.患者术前疼痛及功能受限症状均明显缓解.术后Harris评分为(82.9±1.4)分,与术前比较差异有统计学意义(P<0.05);影像学显示术后坏死程度没有进展或改善.结论:多孔钽钉植入是治疗早期ANFH理想的微创手术疗法,特别是骨坏死处于Ⅰ期和Ⅱ期的年轻病人,既解除疼痛又可最大限度减少并发症,至少延缓甚至避免了关节置换,但远期疗效尚待大样本特别是多中心水平的长期随访观察.     

人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究

采用RT-PCR法得到人OPG的编码区cDNA,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA,经Pac I 酶切线性化,在脂质体介导下转染HEK293细胞,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为5×10⁶～1.5×10⁷ pfu/mL。体外感染小鼠成肌细胞C2C12,Western blot及ELISA检测证实有OPG蛋白的表达,并可在细胞培养上清中持续表达6周。感染OPG重组腺病毒的C2C12细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中,诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减少（P<0.01）。      

人骨形成蛋白-7成熟肽基因在巴斯德毕氏酵母中的分泌表达

目的:利用甲醇酵母表达系统,构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)成熟肽的基因工程菌,并实现其分泌表达。方法:采用PCR方法,依据GenBank数据库中hBMP-7成熟肽序列(AccessionNo.NM_001719)设计并合成一对引物,从已构建的含hBMP-7的克隆载体中扩增获得人骨形成蛋白-7成熟肽基因片段,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,电转化巴斯德毕氏酵母SMD1168,于30℃进行甲醇诱导分泌表达,经筛选获得rhBMP-7成熟肽表达株,并进行了表达产物的活性测定。结果:表达产物存在于培养上清中,约占分泌蛋白总量的8%。经Western印迹分析可以检测到重组表达产物,ELISA检测其具有特异性结合活性。结论:构建了重组人骨形成蛋白-7成熟肽的基因工程菌并在甲醇酵母中实现了分泌表达,为进一步的活性及功能研究奠定了基础。     

计算机X 线片骨放射密度法在蛋鸡骨质 疏松症研究中的应用

应用灰度对比法的原理建立了计算机X线片蛋鸡骨放射密度法。结果表明,铝阶厚度与灰度之间呈显著的线性关系（P〈0．01,r=0．997）,铝阶厚度变化可准确反映蛋鸡骨骼骨量变化,不同曝光条件对骨量值无明显的影响（P〉0．05）。该方法简便,精确,重复性好,经济,为研究蛋鸡骨质疏松症提供重要的检测手段。