利用PCR对PVX外壳蛋白基因进行同义密码子修饰

利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)与限制性内切酶相结合的方法 ,设计 4条含有限制性酶切位点和相应突变的引物。以马铃薯X病毒 (PotatoVirusX ,PVX)外壳蛋白cp基因为模板 ,扩增出相应的片段 ,相应酶切后通过三片段连接构建到克隆载体pBlueKS( / - )上。随机挑选重组子测序表明 ,利用三片段拼接成功地在PVX外壳蛋白基因的不同部位产生了突变。实验结果说明利用三片段接可以大大提高筛选得到突变子的效率 ,从而节省人力、物力和时间。     

陆地棉栽培品种转复合启动子控制下的cry1Ac3基因获得高效抗虫植株(英文)

以根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法分别将植物表达载体pBinMoBc和pBinoBc导入陆地棉(GossypiumhirsutumL .)栽培品种“新陆早 1号”、“晋棉 7号”、“晋棉 12号”和“冀合 32 1”。pBinMoBc携带有高效启动子复合OM启动子控制下的cry1Ac3基因 ,pBinoBc携带有 35S启动子控制下的cry1Ac3基因。经过共培养、卡那霉素筛选抗性愈伤组织及体细胞胚的诱导 ,得到了再生植株。对T2 代的PCR、Southernblotting、ELISA检测及Westernblotting证明cry1Ac3基因已整合入受体棉花基因组并得到表达。抗虫性检测表明转基因后代对棉铃虫 (Heliothisarmigera )具有良好的抗性 ,转pBinMoBcT2 代与转pBinoBcT2 代相比 ,对棉铃虫具有更快的致死速度。本研究建立了一套高效的陆地棉栽培品种转化体系 ;进一步的检测结果表明 ,复合OM启动子可以提高外源基因的表达量从而增强转基因棉的抗虫性。     

人白细胞抗原G3在稳定转染细胞细胞膜上的表达

人白细胞抗原G(HLA G)是一种在母婴耐受中起主要作用的非经典的HLA Ⅰ类分子 .其中HLA G3结构简单 ,仅具有α1结构域、穿膜区及胞浆区 ,其是否在细胞表面表达尚存在争议 .为了建立HLA G3稳定转染细胞株并确定其在细胞内的定位 ,采用RT PCR法从 9周人胎盘组织中获得了HLA G3的cDNA ,并构建到真核表达载体pcDNA3中 ,将所获得的真核表达质粒pcDNA G3转染至HLA Ⅰ (- )细胞株K5 6 2 ,经G4 18筛选后获得稳定转染的细胞株K5 6 2 G3.利用RT PCR、Western印迹检测方法证明在K5 6 2 G3细胞株中 ,HLA G3在mRNA水平和蛋白水平上均有表达 .进一步利用免疫荧光标记技术 ,证明HLA G3能够在转染细胞细胞膜上表达 .结果表明 ,稳定转染细胞株中HLA G3蛋白能够定位表达在细胞膜     

玉米核基质结合区在烟草中对外源转基因表达水平的影响

为研究核基质结合区(matrix attachment region, MAR)在转基因植物中的功能,将来自玉米基因组的MAR序列构建在植物表达载体T-DNA中, 并将报告基因β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase, GUS)基因(uidA)插入两段MARs序列之间.将此载体与不包含MARs序列的植物表达载体分别转化烟草(Nicotiana tabacum L.).GUS活性检测表明,MARs可以显著提高外源基因uidA在转基因烟草中的表达水平,平均表达水平提高2倍,最高单株活性可达10倍.并且转基因植株GUS活性高低与稳定mRNA的量成正比,表明MARs在转录水平提高基因表达.     

植物碱性亮氨酸拉链（bZIP）蛋白的研究进展（一）——结构、分类、分布和同源性分析

植物碱性亮氨酸拉链（bZIP)蛋白在高等植物中广泛存在,对基因表达与调控起重要作用。本简要介绍了植物bZIP蛋白的结构之后,概述了植物bZIP蛋白的分类和分布。最后,以模式植物、主要农作物及蔬菜等为例,对它们的同源性进行了详细的描述和分析。     

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用

大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ,然后反转录成单链ｃＤＮＡ,以此为模板,用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因,并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）的ＳｍａⅠ位点上。序列分析表明：克隆片段大小为６６３ｂｐ,包含了基因完整的编码序列。编码多肽由２１７个氨基酸组成,其中包括Ｎ端２５个氨基酸组成的信号肽序列,１８１个氨基酸组成的成熟蛋白序列和Ｃ端１１个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体,用于烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）、棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）等作物的转化。利用棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ）对经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试,结果表明,转基因烟草和对照烟草相比,具有明显的抗虫能力。     

水稻抗性基因定位及相关分子标记研究进展

水稻是一种重要的粮食作物。而选育高抗性良种是有效防治病虫的危害,增加水稻单位面积产量的一项关键措施。了解水稻本身抗性的遗传信息是进行抗性育种的基础。现代生物技术的发展为抗性育种提供了新途径。本文较系统地概述了水稻对稻瘟病、白叶枯病、稻飞虱、稻叶暗抗性基因定位及相关分子标记研究的最新发展,为利用分子标记进行了水稻抗性育种及抗性基因克隆提供参考文献。     

水稻原生质体的高密度培养与植株再生

植物名称:水稻(Oryza sativa)品种粳稻870025。材料类别:幼穗的愈伤组织(由江苏省农业科学研究院提供)。培养条件:(1)幼穗愈伤组织于附加2,4-D2mg/L(单位下同),KT 0.2,水解酪蛋白250,椰乳50ml/L,蔗糖3％的AA液体培养基(pH5.8,抽滤)中进行悬浮培养,散射光照射,温度23～25℃,