大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用 |
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引用本文: | 高越峰,朱祯,肖桂芳,朱玉,吴茜,李向辉.大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用[J].Acta Botanica Sinica,1998(5). |
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作者姓名: | 高越峰 朱祯 肖桂芳 朱玉 吴茜 李向辉 |
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作者单位: | 中国科学院遗传研究所 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,美国“洛氏基金”资助 |
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摘 要: | 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有抗虫特性。从未成熟的大豆(GlycinemaxL.)子叶中提取总RNA,然后反转录成单链cDNA,以此为模板,用PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因,并克隆到pBluescriptKS(+)的SmaⅠ位点上。序列分析表明:克隆片段大小为663bp,包含了基因完整的编码序列。编码多肽由217个氨基酸组成,其中包括N端25个氨基酸组成的信号肽序列,181个氨基酸组成的成熟蛋白序列和C端11个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体,用于烟草(NicotianatabacumL.)、水稻(OryzasativaL.)、棉花(GosypiumhirsutumL.)等作物的转化。利用棉铃虫(HeliothisarmigeraHubner)对经PCRSouthern杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试,结果表明,转基因烟草和对照烟草相比,具有明显的抗虫能力。
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关 键 词: | 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,RT-PCR,DNA序列,抗虫,转基因烟草 |
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