恶性疟合成多肽抗原基因在大肠杆菌中表达产物的分离纯化

我们用化学方法合成的两个恶性疟原虫杂合抗原基因,即A基因和B基因〔1.2〕,分别与表达载体pwR450·1重组并转化到大肠杆菌使其表达〔3.4〕。经筛选获得了pwR／A·7和pwR／B·164两个表达较高的克隆菌(经扫描测定表达融合蛋白量分别为菌体总蛋白的8．8％和11．O％)。叉将A基因和B基因串连后与pwR450·l重组并转化到大肠杆菌JMl03株,经筛选鉴定获得了上述两个基因串连的pwR／AB·20克隆菌(表达融合蛋白量为35．8％)。为了进一步研究这3个克隆菌表达蛋白的免疫功能等活性,用8．0mol／L脲处理包涵体,离心沉淀上清液进行DEAE-ephacel柱层析,用Tris梯度缓冲液洗脱,但分离效果不好,而应用PAGE方法进行分离纯化,则可得到电泳纯、稳定又具有免疫原性的产物。     

疟疾患者丙型肝炎病毒感染原因的血清学研究

本文报道了９７例疟疾患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的原因。发现疟疾患者抗－ＨＣＶ阳性率为７１．１３％,其中有单采血浆还输血细胞（下称单采浆）献血史者为８９．７１％,有受血史者为６４．２９％,既无单采浆史又无受血史者无一例抗－ＨＣＶ阳性。有单采浆史的疟疾患者与同村非疟疾的单采浆献血者相比,抗－ＨＣＶ阳性率无显著不同,且二者均显著高于同村既无单采浆史又无受血史的非疟疾人群。在无单采浆史和受血史人群中,疟疾病例和非病例抗－ＨＣＶ阳性率很低。说明有单采浆史的疟疾病例ＨＣＶ感染与单采浆有关,有受血史的疟疾病例ＨＣＶ感染与受血有关。对当地单采浆血站进行调查,发现在采血、分离血浆和血细胞还输过程中存在血液交叉污染,这是导致有单采浆史的疟疾病例ＨＣＶ感染的主要原因。     

疟疾多抗原表位基因表达载体的构建及其在烟草中的表达

本文首次报道疟疾多表位抗原基因在转基因烟草中表达成功。疟 疾是当今最需要研究有效疫苗的主要染病之一。过去的研究表明,ＡＷＴＥ基因编码的疟 疾多种怕表位是有铲的抗疟表位,ＣＴＢ基因编码的乱毒素Ｂ亚基是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。本研究把ＡＷＴＥ－ＣＴＢ融合基因构建到植物表达载体ｐＢＶＧ－ｎｙｌ上,采用共转化的方法,通过基因枪导入转化烟草,经ＰＣＲ扩增ＡＷＴＥ－ＣＴＢ基因片段     

恶性疟原虫DNA疫苗免疫效果的评估

以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）为载体,由其基因构建了含有不同时期不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ～ＡＷＴＥ、ＣＴＢ～ＮＡＮＰ,前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外,还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位,后者含有子孢子期的Ｂ、Ｔｈ细胞表位。将纯化的质粒免疫Ｂａｌｂ．ｃ纯系小鼠,３次免疫后诱导机体产生了体液免疫和细胞免疫,免疫的小鼠进行疟原虫子孢子攻击实验     

Partial genomic organization of ribosomal protein S7 gene from malaria vector Anopheles stephensi

In this study, we describe the partial genomic organization of ribosomal protein S7 gene isolated from the mosquito Anopheles stephensi. Initially a 558 bp partial cDNA sequence was amplified as precursor mRNA sequence containing 223 bp long intron. 5＇ and 3＇ end sequences were recovered using end specific rapid amplification of cDNA ends （RACE） polymerase chain reaction. The full-length cDNA sequence was 914 nucleotide long with an open reading frame capable of encoding 192 amino acid long protein with calculated molecular mass of 22174 Da and a pI point of 9.94. Protein homology search revealed 〉75% identity to other insect＇s S7 ribosomal proteins. Analysis of sequence alignment revealed several highly conserved domains, one of which is related to nuclear localization signal （NLS） region of human rpS7. Interestingly, intron nucleotide sequence comparison with A. gambiae showed a lesser degree of conservation as compared to coding and untranslated regions. Like this, early studies on the genomic organization and cDNA/ Expressed sequence tag analysis （EST） could help in genome annotation ofA. stephensi, and would be likely to be sequenced in the future.     

胶体金免疫层析技术在疟疾诊断中的应用

疟疾仍然是21世纪人类健康的严重威胁之一,快速准确的诊断是疟疾防治的关键。目前利用胶体金免疫层析技术研制的诊断盒主要有4种,在疟疾快速检测方面发挥了重要作用,本文着重综述了这4种诊断盒在疟疾检测中的应用情况以及各自的特点。     

斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白基因PGRP-LC1的克隆及功能分析

天生免疫系统是昆虫抵御外界病原入侵的主要方式。目前研究发现, Imd信号通路与按蚊感染柏氏疟原虫Plasmodium berghei的强度密切相关, 而PGRP-LC1是Imd信号通路最上游的受体之一。为了研究斯氏按蚊Anopheles stephensi肽聚糖识别蛋白PGRP-LC1, 采用RT-PCR并结合RACE技术克隆斯氏按蚊PGRP-LC1基因, 通过序列比较分析, 得到两条cDNA序列, 其开放阅读框分别为1 365 bp和1 290 bp, 3′非编码区为320 bp, 5′非编码区为240 bp。将两条cDNA分别命名为AsPGRP-LC1a（GenBank注册号 GU214232）和AsPGRP-LC1b（GenBank注册号GU214233）。AsPGRP-LC1a编码454个氨基酸, 分子量约为49.07 kDa;AsPGRP-LC1b编码429个氨基酸, 分子量约为46.3 kDa。AsPGRP-LC1b比AsPGRP-LC1a少一个长度为75 bp的外显子, 该外显子在冈比亚按蚊Anopheles gambiae PGRP-LC1基因的某些可变剪切形式中也有发现。分别将两个斯氏按蚊PGRP-LC1基因在冈比亚按蚊细胞系L3-5和斯氏按蚊细胞系MSQ43中过量表达, 通过双荧光素酶检测系统检测抗菌肽的表达情况, 结果显示克隆得到的PGRP-LC1基因在两种细胞系中均能够启动Imd信号通路, 为进一步研究斯氏按蚊的Imd信号通路提供了依据。