3种检测艰难梭菌方法的临床应用评估

本研究旨在对3种检测粪便样本中艰难梭菌的方法进行临床应用评估,为艰难梭菌的实验室检测提供参考。采用艰难梭菌毒素A/B(Clostridium difficile toxins A and B,CDAB)酶联免疫荧光检测法、环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂(cycloserin-cefoxitin-fructose agar,CCFA)常规培养法和显色培养法(chromID~(TM))同步检测粪便样本中的艰难梭菌,并对培养所得菌株进行tcdB基因扩增以验证其产毒性。以艰难梭菌培养联合tcdB基因扩增为参考方法,分别计算上述3种方法的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等参数,分析其与参考方法的一致性。研究共收集临床粪便样本164份,参考方法检测结果为58份阳性,106份阴性。经统计分析,艰难梭菌毒素A/B法的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为51.7%、95.3%、85.7%和78.3%,CCFA常规培养法分别为72.4%、98.1%、95.5%和86.7%,而艰难梭菌显色培养法分别为94.8%、92.5%、87.3%和97.0%。3种方法中,艰难梭菌显色培养法与参考方法的一致性最高(Kappa=0.856)。采用该方法检测粪便样本中的艰难梭菌操作简便,成本经济,结果判断直观、准确,具有较好的临床应用价值。     

利用组织微阵列研究ACVRL1在鼻咽癌中的表达及临床意义

ACVRL1基因又名活化素受体样激酶l(activin receptor-like kinase-1, ALK1),与2型遗传性出血性毛细血管扩张性疾病(HHT2)密切相关.通过制作含896个组织点阵的鼻咽癌组织微阵列.结合原位杂交法检测ACVRL1在鼻咽癌组织中的mRNA表达,建立ACVRL1基因在鼻咽癌组织中的原位表达谱,分析ACVRL1mRNA的表达与鼻咽癌临床病理特征关系,并分析其与鼻咽癌颈部淋巴结转移的关系.结果发现ACVRL1mRNA在鼻咽癌组织中的表达与相应非癌组织相比,有显著性差异(P<0.05);ACVRL1mRNA的表达与临床分期无显著相关性(P>0.05);与颈部淋巴结有无转移存在显著性差异(P<0.05);但与EBV VCA-IgA血清滴度没有显著相关性(P>0.05).灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等指标综合评估ACVRL1基因作为鼻咽癌颈部淋巴结转移分子标志物的有效性.这些结果表明ACVRL1基因在鼻咽癌组织中表达下调,与颈部淋巴结转移密切相关,可作为鼻咽癌颈部淋巴结是否转移的候选分子标志物.     

SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测犬瘟热方法的建立和应用

根据GenBank发表的犬瘟热病毒(CDV)的F基因序列,经过分析在F片段的保守区域内设计引物,建立了SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测CDV的方法,并通过对厦门市宠物医院收集的临床发病和疑似发病的犬病料(包括眼分泌物、鼻拭子、唾液、血液、尿液等)的检测,结果表明,本研究建立的快速检测CDV的SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,值得推广应用.     

肉类中大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的建立

以编码大肠杆菌 O157 抗原的 rfbE 基因、编码 H7 抗原的 fliC 基因以及编码毒力因子的eaeA 基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了检测大肠杆菌 O157:H7 的多重 PCR 体系,扩增产物分别为291 bp、625 bp,368 bp,采用30株细菌验证了该多重 PCR 具有特异性.PCR 检测的灵敏度在 DNA 水平上达到91.35 Pg;在存在干扰菌鼠伤寒沙门氏(Salmonella typhimurium)的情况下,当起始污染量为1.4 CFU/mL时,37℃培养6 h即可检出.在30份肉类样品中,有3份检出了大肠杆菌 O157:H7.本研究建立的多重 PCR 方法可特异、灵敏地实现对大肠杆菌 O157:H7 的检测.     

我国烟粉虱自然种群中存在广泛的Wolbachia感染现象

Wolbachia是广泛分布于节肢动物生殖组织中的细胞质遗传的一类共生菌,可以引起宿主生殖行为的改变.烟粉虱是重要的农业害虫,已有的研究表明烟粉虱中存在Wolbachia的感染,但所检测到的感染率不高,并且迄今在烟粉虱中所检出的Wolbachia均属于B组群.该研究从我国河北、新疆、北京、山东、浙江、广西、海南、广州和福建采集到18个烟粉虱地理种群,首先基于ITS1 rDNA克隆测序鉴定了烟粉虱的生物型,然后采用自行设计的Wolbachia 16S rDNA及wsp基因的专用引物对所采集到的烟粉虱种群进行了分子检测.结果表明几乎所有的烟粉虱自然种群中都存在Wolbachia感染,同时还发现B/Q生物型烟粉虱中主要感染A组群Wolbachia,而非B/Q生物型烟粉虱中存在大量的超感染现象.该研究显示烟粉虱自然种群中Wolbachia的感染率比预想的要高得多,而分子检测方法的灵敏度可能是影响Wolbachia感染率研究的关键因素之一.     

万氏牛黄清心缓释胶囊在比格犬体内药动学研究

目的:研究比格犬单剂量交叉口服万氏牛黄清心缓释胶囊和市售普通丸给药的药动学.方法:采用高效液相色谱法测定10只比格犬单剂量口服万氏牛黄清心pH-依赖型梯度释药胶囊和市售丸后血浆中盐酸小檗碱的血药浓度.血浆样品采用碱化后乙醚萃取浓缩方法制备.以青藤碱为内标物质,流动相采用乙腈-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-磷酸(30:70:0.01),检测波长为262nm,流速为1.0mL·min-1.结果:血浆中内源性物质对盐酸小檗碱及青藤碱的测定无干扰;最低检出限为1.25ng·mL-1;盐酸小檗碱在1.25～250ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,r=0.9990;绝对回收率为82.94%～88.36%,方法回收率为89.28%～92.29%;日内精密度RSD≤4.87%、日间精密度RSD≤7.03%.缓释胶囊和普通丸药动学参数AUC0∞分别为668.02和809.95 h·ng·ml-1,MRT分别为5.27和4.34h,缓释胶囊相对于普通丸的生物利用度为84.6%.结论:建立的测定方法处理简单,无干扰,灵敏度高,适合测定中药缓释制剂的药物动力学研究.万氏牛黄清心缓释胶囊具有明显的缓释作用,药物在体内呈梯度释放.     

高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺的分子量及其分布

目的:探讨高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺(PEI)及其衍生物的分子量及其分布.方法:采用Ultrahydrogel 250(300mmx7.8mm)色谱柱;以已知相对分子量的PEI为标样;醋酸-醋酸盐缓冲液(0.2mol/l醋酸-0.1mol/l醋酸钠)为流动相;柱温40℃;流速lml/min;示差折光检测器.结果:测得自制PEI衍生物的重均分子量(Mw)为5093,数均分子量(Mn)为2090、Z均分子量(Mz)为11031,分布宽度(Mw/Mn)为2.44.结论:高效凝胶色谱法操作简单、灵敏度高,适合于快速、简便地测定PEI及其衍生聚合物的分子量及其分布.     

禽类特异性引物在珠江三角洲地区的适用性研究

以珠江三角洲地区为目标研究区域, 采集不同地区猪、牛、人、狗、鸽、羊及家禽等72 份粪便样品, 进行DNA 提取, 并选取8 种针对鸡肠道内优势菌群而开发出的特异性引物进行地区适用性验证。结果表明: 粪便DNA 提取试剂盒提取的DNA 纯度符合后续PCR 扩增实验要求。Faecalibaterium 通用引物FAU-F/FAU-R(1^#)检出率为87%(63/72), 对禽类、反刍动物及哺乳动物等都具有较好地检出效果。鸡的特异性Faecalibaterium 引物Fach-F1/Fach-R1、Fach-F2/Fach-R2(2^#、3^#)、特异性短杆菌引物LA35F/LA35R(4^#)、特异性拟杆菌引物chBact-F1/chBact-R16、CP2-9F/CP2-9R(5^#、7^#)灵敏度较差; 鸡的拟杆菌特异性引物qC160F-HU/qBac265R-H(6^#)、鸡的梭状芽胞杆菌特异性引物CP3-49F/CP3-49R(8^#)特异性较差, 在珠江三角洲地区都不具备较好的适用性。然而, 当源解析的目标由鸡扩大至禽类, 6^#及8^#引物的特异性分别提高至81%和72%, 满足珠三角地区禽类粪便污染源解析的适用条件。     

ROC曲线形状在生态位模型评价中的重要性——以美国白蛾为例

【目的】生态位模型在生物地理学、入侵生物学和保护生物学中具有广泛的应用,被越来越多地用于预测物种潜在分布和现实分布的研究中。本文以美国白蛾为例介绍pROC方案在生态位模型评价中的应用及其注意事项,以期对物种潜在分布预测进行合理的评价,促进生态位模型在我国的合理运用和发展。【方法】介绍ROC曲线和AUC值基本原理,总结其在生态位模型评价中的应用,从物种存在分布点和不存在分布点的可信度出发,分析AUC值用于模型评价的优点和不足,最后介绍局部受试者工作特征曲线的线下面积方案(pROC方案)来弥补传统AUC值的不足。【结果】AUC值虽独立于阈值,但因其综合灵敏度和特异度,而屏蔽这2个指标各自的特征,不能分别评估预测结果的灵敏度和特异度,同时对遗漏率和记账错率不能进行权衡,会误导使用者对模型的评价。与AUC值相比,ROC曲线的形状更具有价值,蕴含丰富的模型评价信息。【结论】模型评价需要将灵敏度和特异度区别对待,ROC曲线形状比AUC值在生态位模型评价中更为重要,pROC方案相对于传统AUC值具有优势,但容易对过度模拟做出不当判断。模型评价与作者研究目的密切相关:当以预测物种潜在分布为目的时(如入侵物种潜在分布、气候变化对物种分布的影响和谱系生物地理学),模型评价应当给予灵敏度(或者遗漏率)更多的权重;当以预测物种现实分布为目的时(如保护区界定和濒危物种引入),模型评价应当给予灵敏度和特异度同等的权重。     

压电生物传感器与光生物传感器

压电(Piezoelectronic,PZ)生物传感器和光生物传感器(Optical Biosensors)是两类新型的生物传感器,本文简要阐述它们的原理、特点和研究进展。关键词:压电生物传感器,生物光极,SPR。