葡萄风信子MaMYB114基因的克隆及功能研究

报道了陕西省种子植物区系新记录的1属、4种及1变种。新记录属为菊科(Asteraceae)的兔耳一枝箭属[Piloselloides(Lessing) C. Jeffrey ex Cufodontis],新记录种及变种分别为蔷薇科(Rosaceae)的单瓣月季花[Rosa chinensis Jacq.var.spontanea(Rehd.et Wils.) Yüet Ku],藤黄科(Clusiaceae)的遍地金(Hypericum wightianum Wall. ex Wight et Arn.),八角枫科(Alangiaceae)的小花八角枫(Alangium faberi Oliv.),菊科(Asteraceae)的兔耳一枝箭[Piloselloides hirsuta(Forsskal) C. Jeffrey ex Cufodontis],莎草科(Cyperaceae)的溪生薹草(Carex fluviatilis Boott)。标本均存放于陕西省西安植物园植物标本馆(XBGH)。     

丙型肝炎病毒E2基因DNA 免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白417～750位氨基酸的DNA片段克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(-)中的CMVIE启动子下游,构建成HCV E2重组真核表达质粒pcE2.ELISA法检测pcE2 DNA免疫兔血清中的E2抗体变化和维持规律,结果显示免疫20d已有抗体产生,30d后开始进入高峰,40d时达到最高值,至第90d抗体水平保持平稳,抗体滴度达到11600左右.流式细胞计数仪(FACS)检测pcE2 DNA免疫鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCDNA3.1(-)的阴性鼠相比,CD4+淋巴细胞水平略有上升,CD8+细胞水平有较大升高,增幅达35.46%.免疫组化检测结果显示注射pcE2的小鼠组织中有明显的阳性着色,而注射pcDNA3.1(-)的对照组小鼠免疫组化结果为阴性.以上结果表明pcE2在实验动物内表达出的HCV E2蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其是MHC-1限制性杀伤性CD8+T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的,因此HCV E2 DNA免疫有可能成为预防和治疗HCV感染的一条新途径.     

转基因作物非预期效应与自然变异的比较和鉴别

筛查转基因作物非预期效应遇到的最大难题是难以鉴别其非预期效应和自然变异.从转基因作物非预期效应与自然变异的发生机制、食用安全风险和遗传特性的比较分析阐述两者在发生机制及遗传特性方面的差异和特征,为设计减少自然变异干扰的非预期效应筛查模式和方案提供重要启示.     

临床医生诊疗现场信息需求现状的初步研究

??????? 目的 探索在医疗信息化背景下,医生诊疗患者过程中的信息需求特点,以帮助找到对策,提高医疗质量。方法 采用问卷调查结合半结构化访谈调查北京大学两家附属医院272名住院医生。结果 医生工作强度高,信息需求大,综合医院门诊医生平均每半天看30位患者;在诊疗过程中,综合医院医生56.1%每天出现≥6次信息需求。这些信息需求最多出现在制定医疗方案阶段;对于两医院的医生,网络信息资源也是一个重要信息获取途径;医生希望信息资源具有信息权威准确、及时更新,载体方便携带、随时可查询及结合临床实际、诊疗方案实现常规化等特点。结论 医生在给患者看病过程中普遍存在信息需求。移动医疗、临床路径结合循证医学有很强的应用前景。     

荧光高效液相色谱法测定三种失眠模型大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量

目的测定睡眠剥夺大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量。方法复制药物诱导失眠动物模型、平台水环境诱导失眠动物模型、刺激诱导失眠动物模型,以Agilent 1100荧光检测器高效液相系统为检测工具,Agilent ZORBAX SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,柱温25℃,激发波长λex=357 nm,发射波长λem=455 nm,甲醇-50 mmoL/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)为流动相,采取梯度洗脱,测定正常组及模型组大鼠脑组织中谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(γ-GABA)、牛磺酸(Tau)的含量。结果谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸分别在10.06～0.0503、10.13～0.0506、10.05～0.0502、10.03～0.0501μg/mL范围内,其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r分别为0.99995、0.99995、0.99985、0.99990)。测得药物诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.2042±0.0145)、(0.0086±0.0005)、(0.0919±0.0024)、(0.0421±0.0011)μg;平台水环境诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.2144±0.0159)、(0.0085±0.0004)、(0.0966±0.0035)、(0.0433±0.0012)μg;刺激诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.1818±0.0043)、(0.0084±0.0005)、(0.0824±0.0033)、(0.0414±0.0018)μg;正常大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.1744±0.0038)、(0.0085±0.0004)、(0.0791±0.0022)、(0.0406±0.0012)μg。结论本实验建立的方法能满足同时测定大鼠脑组织中谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸的含量测定的需要,Glu、Tau、γ-GABA与失眠可能存在一定的量效关系,三种失眠动物模型均能较好的反映出脑内氨基酸类神经递质的变化。     

HCV NS5B蛋白对HCV RNA的模板特异性研究

在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达并纯化HCV的依赖于RNA的RNA多聚酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp,NS5B蛋白).以HCV正、负链RNA 3′末端的序列为模板,体外研究NS5B蛋白催化的RNA合成.结果显示,正链RNA在体外不能指导RNA合成,而负链RNA模板可以产生一条全长的正链RNA产物,表明NS5B对负链RNA具有模板特异性.NS5B对负链RNA的特异性在模板竞争性实验中得到进一步证实,正链RNA的存在和竞争对以负链为模板的RNA合成没有影响.这样,就合理解释了在HCV RNA复制时正链RNA的数量远比负链RNA多这一问题.同时,本实验的结果也为进一步研究病毒或其它细胞因子参与以正链RNA为模板进行的RNA合成,以及有关负链RNA模板特性的研究奠定了基础.     

葡萄风信子花青素苷分析方法建立及成分鉴定

采用高效液相色谱(HPLC)技术,以葡萄风信子‘拉特夫拉姆’(Muscari latifolium)为材料,建立葡萄风信子花青素苷分析方法,研究了流动相配置、有机相初始及最高比例、流速等对葡萄风信子花青素苷洗脱效果的影响,并对该优化体系进行了可行性验证;采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术进一步对其成分进行结构鉴定。结果显示:(1)以0.1%甲酸水溶液-80%乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.8mL/min,Tosoh C18色谱柱柱温35℃为条件,可获得良好的洗脱效果。(2)在质量浓度为0.001~1mg/mL范围内线性良好,相关系数0.999 8;采用该技术方法对标准品矢车菊素的最低检出限为0.1μg/mL,加样回收率在94.4%~99.8%之间,相对标准偏差1.42%。(3)葡萄风信子花瓣中共鉴定出6种花青素苷,分别是飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷、锦葵素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-咖啡酰槐糖苷-5-O-阿拉伯糖苷、矢车菊素、矢车菊素-3-O-对香豆酰葡萄糖苷-5-O-丙二酰葡萄糖苷。     

血清腺苷脱氨酶检测在几种自身免疫性疾病中的临床意义研究

目的:探讨血清腺苷脱氨酶(ADA)检测在几种自身免疫性疾病诊断中的应用价值。方法:收集确诊的系统性红斑狼疮(127例)、类风湿性关节炎(103例)和重症肌无力患者(34例)的血清标本,以同时期体检的正常成人(149例)为对照,采用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和黄嘌呤氧化酶(XOD)法检测血清中ADA活性。结果:系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、重症肌无力患者和正常体检者血清中的ADA活性均值分别为(12.91±5.82)U/L、(10.91±3.70)U/L、(9.21±3.57)U/L、(8.73±2.79)U/L。系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎患者血清中ADA活性均显著高于正常体检者(P0.05),而重症肌无力患者血清中ADA活性和正常体检者相比差别无统计学意义(P0.05)。ROC结果显示将血清ADA活性10U/L同时作为RA和SLE诊断的阳性值,ADA活性诊断SLE的AUC为0.748,敏感性为59.8%,特异性为83.2%。ADA活性诊断RA的敏感性为42.7%,特异性为83.2%。血清ADA活性为10 U/L作为诊断的参考值上限,其诊断SLE的效果优于ESR和hs-CRP,其诊断RA的效果低于ESR和hs-CRP。结论:系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎患者血清ADA活性均有升高,在系统性红斑狼疮患者中升高更为明显,可作为系统性红斑狼疮潜在的辅助诊断标志物。     

腮腺炎病毒的结构多肽——分子量的电泳测定

腮腺炎病毒感染鸡胚后收集尿液和羊水,通过差异离心和蔗糖密度梯度离心提纯宥毒。经SDS—PAGE分离,以铬银染色法结合溴化乙锭和考马斯亮兰染色,发现病毒含有13种结构多肽,分子量分别为79,74,70,65,61,59,56,53,50,45,41,34和31 x103d。     

5-硝基愈创木酚钠对韭菜叶片硝酸还原同化的影响

以3年生‘大金钩韭菜’为供试材料,采用10μmol·L-1的5-硝基愈创木酚钠(5-NGS)进行叶面喷施处理,分析对韭菜叶片硝酸盐含量、氮代谢关键酶活性、氨基酸组分、营养品质及叶绿素荧光动力学活性的影响,以探索5-NGS对促进NO3-还原同化的相关机制。结果表明:(1)5-NGS处理使韭菜叶片硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT)和谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)等氮代谢关键酶活性分别比对照显著提高58.7%、26.5%、179.4%、131.3%,硝酸盐含量显著降低26.1%。(2)5-NGS处理韭菜叶片的可溶性蛋白、维生素C分别显著提高49.5%、25.0%,氨基酸总量及其组分含量也显著增加,但可溶性糖含量显著降低。(3)5-NGS处理使韭菜叶片的PSⅡ电子传递速率显著增加11.3%,其生物量、叶面积、叶绿素含量等也显著增加。研究认为,韭菜叶面喷施5-NGS使得末端的蛋白质合成活性增强,拉动了游离氨基酸向蛋白质的转化,同时调动了转氨作用的积极协同配合,还可能调动碳同化产物的协同配合,促进了前端硝态氮转化为谷氨酸和衍生氨基酸,从而降低了韭菜叶片的NO3-累积,并改善营养品质,促进了植株生长。