不同实验方法检测常用有机溶剂对细菌活性的影响及其安全使用限量

【目的】采用不同实验方法测定常用有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)、丙酮和乙醇对细菌活性的影响,以指导抗菌类药物体外抑菌实验所用溶剂的选择和添加限量。【方法】采用常规体外抑菌实验方法(纸片扩散法、肉汤稀释法),并参照生长曲线法检测有机溶剂DMSO、丙酮和乙醇对大肠杆菌(Escherichia coli)及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用,采用扫描电子显微镜(SEM)观察溶剂作用后的细菌形态变化。【结果】3种溶剂对E.coli和S.aureus抑菌率达到20%时,在肉汤稀释法下,DMSO、丙酮、乙醇的浓度(体积比)分别为1.00%、0.25%、2.00%和1.00%、1.00%、0.50%;在生长曲线法下,溶剂浓度(体积比)分别为0.50%、1.00%、0.50%和1.00%、0.50%、0.50%;而在纸片扩散法下,32%(体积比)DMSO和32%(体积比)乙醇对E.coli产生明显抑菌圈,但3种溶剂对S.aureus均无抑菌圈出现。3种方法比较后得出:当3种溶剂的抑菌率达到20%时,溶剂浓度(体积比)均低于0.5%,对细菌整体生长活性影响较小。SEM结果表明控制溶剂使用限量可有效减少其对E.coli生长过程的影响。【结论】相对于DMSO和丙酮,乙醇对微生物生长繁殖能力的影响更加明显;采用相同浓度有机溶剂时,液态条件下(肉汤稀释法和生长曲线法)微生物受到有机溶剂的影响较大。     

小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究

构建小鼠β-防御素-2( mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性.旨在为选一步研究其生物学特性奠定基础.通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒.将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达.通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白.将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性.成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21( DE3).在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4h条件下获得的融合蛋白.采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用.本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白.     

花椒挥发油的化学成分分析及体外抑菌活性研究

目的:明确花椒挥发油的主要化学成分及对部分细菌、真菌的体外抑菌活性.方法:①采用水蒸气蒸馏法提取花椒中挥发油并进行GC/MS分析;②K-B纸片扩散法和浓度稀释法测试6种菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853、枯草杆菌ATCC6633、白色假丝酵母菌ATCC90028、近平滑假丝酵母菌ATCC22019)体外抑菌活性.结果:①GC/Ms法分离出80余个峰,鉴定出81种物质,用面积归一法确定其相对百分含量;其中5种化合物已占到总量的60%以上,分别为桉树脑15.64%、4-萜品醇15.60%、D-柠檬油精13.72%、β-月桂烯10.20%、α-蒎烯4.03%.②花椒挥发油除对铜绿假单胞菌抑菌活性不明显外,对其它5种菌株均有较好的抑菌活性.结论:①花椒挥发油中化学成分复杂,其中含量超过5%的成分仅4种且最高含量小于16%.②花椒挥发油具有明显体外抑菌活性.     

三种抗生素对丰水梨叶片不定芽再生的影响及其对根癌农杆菌的抑菌效果

以丰水梨(Pyrus pyrifolia‘Hosui')离体叶片为实验材料,研究了氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)对丰水梨叶片不定芽再生的影响及其对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的抑菌效果.结果表明,在100～500 mg·L-1浓度范围内,3种抗生素对丰水梨叶片愈伤组织诱导均无显著影响.Amp、Carb和Cef抑制丰水梨叶片不定芽再生的起始浓度分别为100、200和200 mg·L-1;当浓度高达500 mg·L-1时,Amp、Carb和Cef均极显著地抑制叶片不定芽再生.除500 mg·L-1Cef处理组外,不同浓度Amp、Carb和Cef对丰水梨每个外植体的再生不定芽数没有显著影响.与对照相比,在100～500 mg·L-1浓度范围内,3种抗生素均对根癌农杆菌菌株LBA4404和EHA105有显著的抑制作用,且对菌株EHA105的抑制效果强于菌株LBA4404.研究结果显示,在丰水梨遗传转化体系中,可以选择300 mg·L-1的Amp和Cef作为理想的杀菌剂.     

四种中药对耐药肺炎链球菌的抑菌作用

目的探讨中草药对肺炎链球菌的体外抑菌作用。方法用临床分离细菌为受试菌,采用琼脂稀释法,观察黄连、黄岑、黄柏和连翘等4种中草药水煎剂的最低抑菌浓度。结果4种中草药水煎剂均有不同程度的抑菌作用,其中黄连抑菌效果最好,黄连水煎剂对肺炎链球菌M IC范围达7.8-15.63 g/L,M IC50为8 g/L,M IC90为8 g/L。黄岑、黄柏也有较好的抑菌效果,连翘抑菌效果较弱。结论黄连等中药在体外对肺炎链球菌均有良好抑菌作用。     

灵芝浸出液在香蕉组织培养中的抑菌作用

设计不同浓度的灵芝浸出液培养基,以香蕉(Musa sapientumL.)作为培养材料,通过定量接种不同种类的细菌及真菌以观察灵芝浸出液的抑菌效果。结果表明,采用野生灵芝10 g于1 000 ml蒸馏水中煮2 h的浸出液配制的培养基,不仅能使香蕉正常生长,而且已感染细菌的材料经一段时间培养后,细菌污染消失,恢复正常。研究结果对于香蕉转基因操作以及完善组织培养技术具有重要的参考意义。     

红果龙葵茎和叶的抑菌作用研究

目的:研究红果龙葵茎、叶的水和乙醇提取液对常见微生物的抑菌作用。方法:制备红果龙葵茎和叶的水和乙醇提取液,用平板打孔法测定抑菌圈的方法,测定提取液对5种细菌的抑菌作用。结果和结论:红果龙葵茎和叶的水提取液和乙醇提取液对5种细菌有明显的抑制作用,乙醇提取液对5种细菌的抑菌作用强于水提取液;各提取液都显示出最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。     

乳酸杆菌代谢产物对引起阴道炎常见细菌的抑制作用的初步探讨

目的探讨乳酸杆菌代谢产物对临床常见引起阴道炎的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、伤寒杆菌和肠球菌的抑菌作用。方法采用营养琼脂平板培养基定量涂菌,国际标准药敏杯给药的药敏试验法,检测乳酸杆菌代谢产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、伤寒杆菌和肠球菌的抑菌环的大小。结果乳酸杆菌代谢产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和伤寒杆菌有明显的抑菌作用,对肠球菌、白色念珠菌无抑菌作用。结论在临床上可应用乳酸杆菌及其制剂调节阴道微生态平衡,治疗细菌性阴道炎。     

苦参凝集素的分离纯化及部分性质研究

从苦参 (SophoraflavescensAit.)根浸出液经硫酸铵分级 ,得苦参凝集素 (SFL)粗品 ,再经DEAE_Sepharose、SephadexG_1 5 0和HPLC层析 ,获得具有强凝集活性的SFL样品 ,用PAGE和SDS_PAGE检测均为单一蛋白染色带。SDS_PAGE显示SFL分子仅有一条肽链 ,SephadexG_1 0 0和SDS_PAGE测得其分子量均为 32kD。当SFL浓度为 0 .97μg/mL时能凝集兔红细胞 ,无血型专一性 ,其凝血活性可被甘露糖和果糖抑制 ,麦芽糖和葡萄糖有弱的抑制作用 ,凝集素分子含有 2 .89%的中性糖 ;当SFL量为 6 2 μg时 ,对棉花枯萎病菌 (FusariumvasinfectumAtk .)、小麦赤霉病菌(Gibberllasaubinetii (Mont.)Sacc .)和水稻稻瘟病菌 (PiriculariaoryzaeCav)菌丝体的生长发育有明显地抑制作用。用Edman法在蛋白测序仪上测出SFL的N端肽链 30个氨基酸的排列顺序为 :T/A/VDXLXFTFSDFDP NGEDLLFQGDAHVTSNN。     

铁皮石斛对微生物生长影响的研究

目的探讨铁皮石斛对部分酵母菌、益生细菌和有害菌生长的影响,为铁皮石斛调节微生态平衡提供实验依据。方法通过液体培养比浊法检测铁皮石斛对各供试菌株生长的抑促情况。结果铁皮石斛对白色假丝酵母菌、酿酒酵母菌、汉逊德巴利酵母菌的生长具有明显的促进作用:铁皮石斛对保加利亚乳杆菌和枯草芽胞杆菌等有益细菌的生长也具有明显的促进作用:能够抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和沙门菌等(条件)致病菌的生长:铁皮石斛对产气杆菌、铜绿假单胞菌、嗜热链球菌和地衣芽胞杆菌的生长没有明显的影响。结论铁皮石斛能促进部分有益菌的生长,对部分(条件)致病菌有抑制作用,通过抑制有害菌、促进有益菌调控微生态平衡。