桃种质资源亲缘关系的研究进展

种质资源是现代育种和生物技术研究的物质基础。桃种质资源亲缘关系的研究将为探讨桃的起源、进化、分类、育种和资源利用提供科学依据。本文从形态学、细胞学、孢粉学、生物化学及DNA分子标记等几个方面综述了桃种质资源亲缘关系的研究进展,探讨了桃种质资源亲缘关系的研究现状、前景及尚需解决的问题,并就进一步开展桃种质资源亲缘关系的研究进行了分析,提出桃种质野生种、近缘野生种厦不同栽培品种群间的分子系统学关系是今后研究的重点。     

离体条件下葡萄砧木＇5BB＇植株再生体系研究

以葡萄砧木＇5BB＇组培苗为试材,研究不同外植体类型、基本培养基、植物生长调节剂的种类及其浓度组合对＇5BB＇植株再生的影响.结果表明：MS基本培养基为适合叶柄不定芽再生的基本培养基;着生于顶端第2、3节位的叶柄为适宜的外植体;适于叶柄不定芽再生的植物生长调节剂种类及质量浓度组合为2.5 mg/L BA＋0.05mg/L IBA;叶柄不定芽再生率最高可达到43.33%.     

三种抗生素对丰水梨叶片不定芽再生的影响及其对根癌农杆菌的抑菌效果

以丰水梨(Pyrus pyrifolia‘Hosui')离体叶片为实验材料,研究了氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)对丰水梨叶片不定芽再生的影响及其对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的抑菌效果.结果表明,在100～500 mg·L-1浓度范围内,3种抗生素对丰水梨叶片愈伤组织诱导均无显著影响.Amp、Carb和Cef抑制丰水梨叶片不定芽再生的起始浓度分别为100、200和200 mg·L-1;当浓度高达500 mg·L-1时,Amp、Carb和Cef均极显著地抑制叶片不定芽再生.除500 mg·L-1Cef处理组外,不同浓度Amp、Carb和Cef对丰水梨每个外植体的再生不定芽数没有显著影响.与对照相比,在100～500 mg·L-1浓度范围内,3种抗生素均对根癌农杆菌菌株LBA4404和EHA105有显著的抑制作用,且对菌株EHA105的抑制效果强于菌株LBA4404.研究结果显示,在丰水梨遗传转化体系中,可以选择300 mg·L-1的Amp和Cef作为理想的杀菌剂.     

桃小食心虫CsasCSP14的基因克隆及分子对接

[目的]本研究旨在获得桃小食心虫Carposina sasakii Matsumura CsatsCSP14基因序列,分析其在雌雄不同组织中的表达差异,并与寄主挥发物进行分子对接,为该基因的功能研究提供参考.[方法]以桃小食心虫全组织cDNA为模板,通过PCR技术扩增克隆获得CsasCSP14 cDNA序列全长;利用生信分析软件分析其编码蛋白的理化性质和结构特征;通过荧光定量PCR技术分析CsasCSP14在桃小食心虫雌雄成虫不同组织(触角、头、胸、腹、足和翅)中的表达情况;使用Modeller(version 9.19)构建CsasCSP14蛋白的三维结构模型;运用Autodock 4.2将CsasCSP14与32种苹果挥发物和2种性信息素分子进行分子对接.[结果]克隆获得了桃小食心虫化学感受蛋白基因CsasCSP14的cDNA序列,其开放阅读框(Open reading frame,ORF)长度为369 bp,编码122个氨基酸,预测其蛋白分子量为14.13 ku,理论等电点为5.20,有17个氨基酸残基组成的信号肽序列,且18-122位氨基酸之间存在昆虫化学感受蛋白家族保守结构域;含有4个保守的半胱氨酸位点.CsasCSP14具有6个α螺旋;氨基酸同源比对结果显示,CsasCSP14与玉米螟Pyraustanubilalis OfurCSP5的氨基酸序列一致性最高,达到79.01％.荧光定量PCR结果显示,CsasCSP14在雌雄成虫的触角、头、胸、腹、足和翅中均有表达,但是其表达丰度有差异,在雌雄成虫触角中的表达量最高.通过Modeller软件搜索CsasCSP14三维结构的模板,得到与沙漠蝗Schistocerca gregaria CSPsg4序列相似性为65.7％.因此以CSPsg4为模板成功构建CsasCSP14三维结构.分子对接结果表明CsasCSP14与2-己烯醛、桃醛、醋酸丁酯、庚醛、异戊醛和法尼烯气味分子结合能比较低,并且Leu-22、Phe-29、Phe-42和Ile-46 4个疏水性氨基酸残基在结合过程中发挥了关键作用.[结论]本研究为进一步了解桃小食心虫CsasCSP14基因功能和利用化学生态的方法防控该虫提供了前期理论基础.     

不同因素对小黄李试管苗增殖与生根的影响

以‘小黄李’砧木的单芽茎段为外植体进行离体培养,研究不同培养基、植物生长调节剂的种类及其浓度、pH值对‘小黄李’增殖与生根的影响。结果表明:较合适的增殖培养基为F14 0.8mg·L-16-BA 0.2mg·L-1NAA 30g·L-1蔗糖 6g·L-1琼脂,pH值5.4~5.8;较合适的生根培养基为改良MS 0.1mg·L-1NAA 0.2mg·L-1IBA 30g·L-1蔗糖 6g·L-1琼脂,生根率达100%,单株平均根数3~4根;以蛭石∶珍珠岩∶泥炭(1∶1∶1)移栽生根苗,成活率达80%以上,实验结果为工厂化育苗生产奠定了基础。     

砂梨EST-SSR引物开发及其应用

利用GenBank和GDR数据库中的995条梨EST序列开发砂梨SSR引物,并根据开发的EST-SSR引物对砂梨'西子绿'×'喜水'F1群体的遗传变异进行分析.结果发现:(1)60个SSR位点分布于54条EST序列中,占整个EST数据库的5.4%,其中二核苷酸重复基元出现频率最高,达51.7%,其次为三核苷酸重复基元占25%.23类重复基序中AT重复基序出现的频率最高,为32.3%.(2)利用开发的25对EST-SSR引物对'西子绿'×'喜水'F1群体的遗传变异分析结果表明,其中9对引物呈现多态性,多态性引物占设计引物的36%;多态性引物扩增产物在F1群体中的等位基因数(No)平均为2,有效等位基因数(Ne)平均为1.932 4,平均杂合度观测值(Ho)和期望杂合度(He)分别为1和0.480 9.     

离体条件下葡萄砧木''5BB''植株再生体系研究

以葡萄砧木‘5BB’组培苗为试材,研究不同外植体类型、基本培养基、植物生长调节剂的种类及其浓度组合对‘5BB’植株再生的影响。结果表明:MS基本培养基为适合叶柄不定芽再生的基本培养基;着生于顶端第2、3节位的叶柄为适宜的外植体;适于叶柄不定芽再生的植物生长调节剂种类及质量浓度组合为2.5 mg/L BA 0.05mg/L IBA;叶柄不定芽再生率最高可达到43.33%。     

梅REMAP分子标记技术体系的优化及其应用

通过分析构成梅REMAP分子标记技术体系的主要成分适宜浓度、SSR引物选择性碱基的添加以及REMAP-PCR扩增产物检测的非变性PAGE最佳浓度,建立了适合梅REMAP分子标记的技术体系,并对24个梅品种的遗传多样性进行了分析.结果表明:(1)适宜梅REMAP-PCR的反应体系为:25.0 μL总体积中,基因组DNA 40.0 ng、2.5 mmol/ L MgCl2 1.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、10×PCR Buffer(TaKaRa) 2.5 μL、Taq DNA聚合酶1.5 U、10 μmol/L LTR引物1.0 μL、10 μmol/L SSR引物1.0 μL,且SSR引物的3′端加碱基可明显提高REMAP的扩增效果,但碱基数量无明显影响.(2)5.0%非变性PAGE电泳条带数量多,扩增范围广(300～2 000 bp),且各品种扩增产物均可显示,能够清晰地反映品种间的多态性.(3)24个梅品种的遗传多样性分析显示,花梅的绿萼型及朱砂型分别聚在一起,这与形态学分类的结果一致,证明建立的REMAP技术体系的有效性和可行性.