金樱子茎提取物体外抑菌活性研究

采用纸片扩散法和试管稀释法,研究金樱子茎不同溶剂粗提取物对临床常见病原细菌的抑菌活性。结果表明,金樱子茎水提取物对绿脓杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌无抑菌活性;对伤寒杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为20 mg（生药）/mL;对金黄色葡萄球菌的MIC为10 mg（生药）/mL。金樱子茎75%乙醇提取物对绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌无抑菌活性;对金黄色葡萄球菌MIC为10 mg（生药）/mL。金樱子茎乙酸乙酯、氯仿、石油醚提取物对绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌无抑菌活性。     

4株羊瘤胃功能性细菌的筛选

通过DNS法测定羊瘤胃源功能性细菌产生的纤维素酶和淀粉酶的活力,福林酚法测定产生的蛋白酶的活力,检测细菌产生酶的特性。同时检测菌株的发酵液对大肠埃希菌(ATCC25922)、副溶血弧菌(ATCC17802)、藤黄八叠球菌(HY78)和产气杆菌(AS1489)等指示菌的抑制能力,分析它们的抑菌活性。结果表明,羊瘤胃源细菌C13产生的纤维素酶活力最高,产酶量也最高;而细菌C5产淀粉酶活力和蛋白酶活力最高,产生淀粉酶和蛋白酶的能力也最高。抑菌活性检测发现,细菌C9对副溶血弧菌(ATCC17802)有很高的抑制作用,而细菌C12对大肠埃希菌(ATCC25922)的抑制能力最明显。     

止痛透骨贴微生物限度检查方法的验证

目的:建立适合于止痛透骨贴微生物限度检查的方法。方法:参照《中国药典》2010版一部微生物限度检查法验证试验的要求,采用中和-离心薄膜过滤法进行细菌数检查,采用平皿法进行霉菌和酵母菌数检查,采用直接接种法进行控制菌检查。结果:5种验证菌株的回收率均高于70%,控制菌检查经方法验证,可用直接接种法对金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、大肠菌群进行检查。结论:建立的方法准确可靠,适用于止痛透骨贴的微生物检查。     

桑氏链霉菌几丁质酶ChiKJ40基因的克隆表达及其抑菌作用

【背景】目前关于桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)生防基因的研究不多,仅从其基因组中克隆了2个几丁质酶基因片段,其单个几丁质酶的完整基因序列相关研究未见报道。【目的】克隆S.sampsonii KJ40的几丁质酶基因Chi KJ40并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其抑菌作用。【方法】采用PCR扩增法从S.sampsonii KJ40中克隆几丁质酶基因Chi KJ40,连接到表达载体p ET-32a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。使用His标记蛋白质微量纯化试剂盒对重组几丁质酶进行纯化,Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定粗酶液和纯化酶液的浓度,几丁质酶试剂盒测定粗酶液和纯化酶液的几丁质酶活性。观察重组几丁质酶对桉树焦枯病菌(Cylindrocladium scoparium)、栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)、链格孢菌(Alternaria alternate)、紫丝核菌(Rhizoctonia violacea)几种致病真菌的抑菌作用。【结果】Chi KJ40基因(登录号为MF434484)在E.coli中经IPTG诱导表达,获得42 k D的重组几丁质酶,不同浓度IPTG在37°C诱导3 h,蛋白产量无明显变化。0.2 mmol/L IPTG 16°C诱导过夜,重组几丁质酶主要以可溶性形式存在于上清,小部分以包涵体存在于沉淀中。粗酶液几丁质酶活性为0.080 U/m L,酶比活力为0.041 U/mg,纯化酶液几丁质酶活性为0.046 U/m L,酶比活力为0.115 U/mg,纯化倍数为2.8,酶活回收率为57.5%。重组几丁质酶处理后,C.scoparium、C.parasitica和A.alternata菌丝细胞出现分节、膨胀,R.violacea菌丝溶解且部分被破坏成碎片。【结论】Chi KJ40基因的研究补充了S.sampsonii的生防背景,为几丁质酶基因找到了新的来源,并为其应用奠定了理论基础。     

地衣芽胞杆菌（CMCC63519）及代谢产物对部分细菌的抑菌作用

本文通过两个试验,证实了地衣芽杆菌的代谢产物对某些细菌有类似抗生素样作用。抑菌作用与代谢产物有关。     

人参对微生物的促进和抑制代谢过程的动力学模型及其应用的微量热法研究

用微量热仪测定了人参对金黄色葡萄球菌促进代谢作用和对大肠杆菌、枯草杆菌抑制代谢作用的热谱图,并按微生物生长的新模型进行了数学处理,得出了生长速度常数,进而获得了人参促菌的最低用药浓度和人参抑菌的最佳用药浓度。     

限制性条件下药物对细菌抑制作用微量量热法研究

用微量量热计测定了福氏志贺氏菌(Shipella flexneri)中7株菌(6、2b、3b、sb、la、x、y)在合成药物抑制作用下生长的热谱图,按限制性条件下微生物生长的模型进行了数学处理,得出了比生长速率(μ),由此确定了各细菌比生长速率(μ)与药物浓度?之间的定量关系,求出了比生长速率(μ)为零时的用药浓度,并对该合成药对各细菌的抑菌效果进行了分析．     

胶体半导体光诱导的抑菌作用

用生长速率测定法研究了ＺｎＳ胶体光诱导的抑菌（ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ）作用。实验结果表明,ＺｎＳ胶体在光照时能够明显地抑制大丽菊轮枝霉（ＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍＤａｈｌｉａｅ）的生长,而在不光照时没有这一效果。其原因是ＺｎＳ胶体在光激发下能够生成大量的活性氧自由基。在本文实验条件下ＺｎＳ胶体的半致死浓度（ＬＣ５０）是４．３３×１０－５ｍｏｌ／Ｌ。     

长足大竹象雄性附腺提取物抑菌作用研究

以3种细菌(大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Bacillus subtilis、枯草芽孢杆菌Staphyloccocus aureus)为供试菌,测定了长足大竹象Cyrtotrachelus buqueti雄性附腺提取物的抑菌活性。结果表明:长足大竹象雄性附腺提取物对革兰氏阳性菌如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌活性。不同浓度的粗提物对枯草芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌抑菌影响差异均具有高度统计学意义(P0.01),抑菌活性随着粗提物浓度的增加而增强。粗提物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为0.2 mg·m L~(-1)、0.4 mg·m L~(-1)。不同处理温度对长足大竹象雄性附腺粗提物的抑菌作用有一定影响。     

粘帚霉几丁质酶GcCHI1的结构鉴定及其抑菌作用

【目的】对分离纯化自链孢粘帚霉(Gliocladium catenulatum)HL-1-1菌株的几丁质酶Gc CHI1进行化学结构鉴定,并测定该酶对几种病原真菌的抑菌机制。【方法】几丁质酶Gc CHI1化学结构鉴定采用Nano-ESI-MS/MS技术。该酶对病原真菌菌丝生长、病原菌孢子萌发和病原菌菌核萌发的抑制作用采用牛津杯法等方法。【结果】获得几丁质Gc CHI1胰蛋白酶水解肽段的肽质量指纹谱图,较好的MS/MS图谱,以及3个肽段的氨基酸序列(均15个氨基酸),分别为LYNSNDAIEAFISR、VIGYFTQWGIYGR、LNLGIGYYGR。经Mascot数据库检索认为与来自Stenotrophomonas maltophilials 34S1的几丁质酶A具有高度的相似性。几丁质酶Gc CHI1能明显抑制立枯丝核菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌等多种植物病原真菌的菌丝生长、孢子萌发和菌核萌发。【结论】几丁质酶Gc CHI1对多种植物病原菌有抑制作用,因此几丁质酶Gc CHI1是HL-1-1菌株抑菌作用的机制之一。