球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用

本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协同作用。结果表明 ,Bin和Cry4Aa、Bin和Cry 4Ba间有明显的协同作用 ,此外 ,Cry4Aa和Cry4Ba、Cry4Aa和Cry11Aa、Cyt1Aa和Cry4Aa之间也有明显的协同作用     

甜菜夜蛾核多角体病毒的体内重组和基因缺失株的分离

甜菜夜蛾核多角体病毒 (Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,ＳｅＭＮＰＶ)作为安全无毒的生物杀虫剂用于控制甜菜夜蛾害虫具有广阔的应用前景。然而 ,需要进一步通过遗传工程的手段构建重组病毒以提高杀虫性能或筛选高毒力的野生型毒株。由于ＳｅＭＮ ＰＶ在离体昆虫细胞中的复制迅速导致缺失病毒的产生 ,这些缺失病毒丢失大约 2 5ｋｂ的遗传信息 ,对昆虫不再具有感染力。这一特点限制了采用传统的方法在离体细胞中构建和筛选重组病毒 ,也限制了采用空斑纯化的方法筛选高毒…     

甜菜夜蛾人工饲料的进一步研究

作者曾报道了一种可较理想饲养甜菜夜蛾幼虫的人工饲料配方 ,但利用该饲料连续饲养甜菜夜蛾 7代后 ,卵孵化率则从第 1代的 89.1 %下降为 6 5 .5 % ,且保持该孵化水平至第 1 1代 ,1 2代后 ,卵孵化率进一步下降。为解决以上问题 ,本实验室对配方作了进一步研究。研究表明 ,在饲料中再添加 5种可促进甜菜夜蛾生长发育的微量物质 ,即可有效阻止甜菜夜蛾因连续继代而出现卵孵化率迅速下降的问题。经实验 ,利用改进后的人工饲料连续饲养甜菜夜蛾9代 ,卵孵化率仍达 80 %以上 ,比原配方相应代数的孵化率提高 1 5 %左右 ,而且其它各测定指标如 :幼虫…     

甜菜夜蛾核多角体病毒杀虫剂研究进展

一、利用人工半合成饲料批量饲养甜菜夜蛾从 2 8种不同的人工饲料配方中 ,筛选出一种有利于甜菜夜蛾生长发育的人工饲料。经大批量连续饲养表明 ,该饲料具有饲养效率高、产卵量多和历期短等特点。其中孵化率为 85 %、幼虫存活率 93.3%、幼虫历期 9.5± 2 .1ｄ、化蛹率 92 .6 %、雌蛹重 1 2 1 .2± 1 4.3ｍｇ、雄蛹重1 0 8.6± 1 0 .9ｍｇ、羽化率 1 0 0 %、产卵量 1 45 2 .2粒 /雌、成虫期 (寿命 ) :雌 1 2 .2± 2 .3ｄ、雄 1 1 .0± 2 .8ｄ。经多年连续批量饲养 ,已建立了一套较为成熟的饲养技术 ,平均每人每月饲养幼虫达 1 0 - 1 2万条。…     

斜纹夜蛾两个天蚕素D基因的克隆及序列分析

天蚕素是昆虫抵御病菌入侵的一类抗菌肽家族。根据斜纹夜蛾Spodoptera litura天蚕素B基因设计特异引物,通过PCR扩增得到2个新的天蚕素基因部分序列,分别命名为cecD1和cecD2（GenBank登录号分别为EF555567和EF555568）。2个基因编码同一个天蚕素D蛋白,该蛋白的成熟肽与天蚕素B存在2个氨基酸残基差异。序列分析发现cecD1和cecD2中分别包含568 bp和377 bp的内含子序列,它们有相同的5′和3′拼接位点,A+T含量分别为59.7%和69.8%,符合大多数真核生物内含子高A+T含量的特征。     

杆状病毒Ac60基因的原核表达与亚细胞定位研究

用PCR方法从AcMNPV基因组中扩增到ORF60基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建pETAc60质粒,再将该质粒转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达了分子量约为16 ku的融合蛋白.用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,应用该抗体检测了AcMNPV感染的昆虫宿主细胞(Si9)中ORF60基因的表达,结果显示:在感染后的细胞中有2条分子量分别约为33 ku和17 ku蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应.间接免疫荧光分析发现:在病毒感染的晚期,Ac60蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中.     

Xenorhabdus nematophila BP杀虫毒素基因的序列分析及其杀虫活性

XnBP83是从Xenorhabdus nematophila BP基因组粘粒文库中筛选出的一个对棉铃虫有较强口服杀虫活性的克隆．采用亚克隆结合primer-walking DNA测序技术对粘粒XnBP83的插入片段进行序列测定．该插入片段全长38939bp,其中包括5个与杀虫活性相关的tc类基因xptA1、xptB1、xptC1、xptA2、xptD1．序列分析显示：a．插入片段中的xptD1不完整,与X．nematophila PMFI296 XptD1相应氨基酸序列有99％的相似性．b．BP xptA1读码框全长7569bp,编码2520个氨基酸,与PMFI296的XptA1氨基酸序列有98％的相似性,两者在第2200-2223氨基酸区域连续有23个氨基酸不同．c．BP xptB1读码框全长3051bp,编码1016个氨基酸,与PMFI296 XptB1氨基酸序列有98％的相似性,在第620-650氨基酸之间有28个氨基酸差异．d．BP xptC1读码框全长4225bp,编码1408个氨基酸,与PMFI296的XptC1氨基酸序列有96％的相似性．在BP的第232氨基酸后插入了一个TAQRYLAK的氨基酸序列,在第627-646氨基酸区域内,有18个氨基酸不同．e．BP xptA2读码框全长7574bp,编码2524个氨基酸,与PMFI296的XptA2氨基酸序列有90％的相似性,在BP品系XptA2的第788-855氨基酸和第1630～1784氨基酸有两个明显变异区．将XnBP83培养物上清和沉淀饲喂棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾和粉纹夜蛾,结果表明XnBP83对所测昆虫有广谱杀虫活性．     

杆状病毒基因Ac108的克隆和原核表达

目的:克隆和表达苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa califorica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)开放阅读框108(open reading frame,ORF108,Ac108)基因,为进一步研究其功能打下基础.方法:将Ac108基因克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达AC108蛋白.以纯化的AC108蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔制备蛋白的多克隆抗体.用该抗体检测了该蛋白在病毒感染细胞中的表达.结果:实现了AC108蛋白的表达,获得了AC108蛋白的多克隆抗体,Western blot检测发现在AcMNPV感染的Sf-9细胞中有一条大小约为27kDa的杂交带,远大于预期的11kDa.结论:AC108蛋白可能以同源或异源聚合物形式在电场中迁移.     

苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析

溶原性噬菌体的随机爆发是微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生产的首要危害.[目的]本文的目的就是通过研究B.t生产菌株溶原性噬菌体的遗传背景,以便从分子水平上控制其在生产中的随机爆发.[方法]通过对广东梅州某公司的生产菌株MZ1采用Mitomycin C进行诱导,提取噬菌体颗粒MZTP01的基因组DNA,克隆和表达该噬菌体的pep基因,并进行了功能分析.[结果]诱导获得的溶原性噬菌体MZTP01斑点清晰,直径约1mm,成斑时间12h;从噬菌体基因组DNA双酶切(Hind Ⅲ/EcoR Ⅰ)片段中回收长度为2362bp的D片段(Genbank登录号:AY639599),又从D片段中克隆了长度为1101bp、编码367aa、分子量为47kDa的Pep基因,表达载体M15(pQE30pep)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中表达获得了47kDDa的清晰表达带,在1h时开始产生蛋白并有逐步上升的趋势;Western blot也在47kDa处得到一条清晰的条带;可溶性分析表明PEP蛋白在重组菌株中是以不可溶的包含体形式存在的,该蛋白的产生明显地抑制了宿主的生长速度;噬菌体PEP氨基酸序列之间的同源性比较表明,噬菌体MZTP01 PEP蛋白与来自E.coli K12噬菌体的PEP蛋白的同源性程度最大.[结论]我们获得了一种新的噬菌体MZTP01,并首次报道了该噬菌体D片段的核苷酸序列及pep基因的功能,试验证明PEP表达蛋白能够水解酪蛋白,其活力相当于0.3mg/mL的胰蛋白酶.     

中国南方害虫生物防治50周年回顾

综述了中国南方50年来害虫生物防治的研究与应用概况,特别是大卵（蓖麻蚕卵）繁殖赤眼蜂防治甘蔗螟虫的成功先例,为后来国内应用柞蚕卵繁殖赤眼蜂提供了宝贵经验。应用平腹小蜂防治荔枝蝽,解决了荔枝生产的主要害虫问题;引进澳洲瓢虫、孟氏隐唇瓢虫、松突圆蚧花角蚜小蜂均是我国生物防治成功的例证;以生物防治为主的水稻害虫综合防治研究坚持了20多年,从生产实践和理论方面均取得显著的成绩;在昆虫病原微生物的研究与应用方面,利用苏云金杆菌以色列变种防治蚊虫、松毛虫质多角体病毒的发现和应用、斜纹夜蛾核多角体病毒的分离以及中试和工厂化生产、昆虫病原线虫的大量繁殖与应用,取得了一批有应用价值的成果;在分子生物学研究方面,利用基因重组扩大了病原微生物的毒力与杀虫谱。总结和继承我国乃至世界上最早的以虫治虫（黄蚁防治柑桔害虫）的经验,对促进我国生物防治事业的发展具有重要意义。