LGT蛋白质组阳性肿瘤患者免疫功能的观察报告——LGT系列论文之八

目的：了解LGT（lost goodwill target）蛋白质组阳性表达患者CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋、T细胞和NK细胞的变化规律.方法：对30例LGT蛋白质组阳性表达的肿瘤患者分别采用美国BD公司生产的流式细胞检测仪及提供的相应单克隆抗体检测患者空腹血清CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋、T细胞和NK细胞并用美国赛费吉（Ciphergen）公司制造的蛋白质指纹仪及该公司提供的弱阳离子交换芯片（WCX2）按其操作方法（SELDI检测技术）配对检测肿瘤患者空腹血清中的蛋白质指纹,对有病情加重的患者均检查两次以上.以指纹图上质荷比（M/Z）为11100＋H～11900＋H之间出现一峰簇样（cluster）的指纹标志为LGT阳性诊断标准,并按蛋白质指纹LGT检测阳性次数分成二组.对二组内CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋、T细胞和NK细胞与正常参考值之间进行统计学显著性检验.结果：CD3^＋T细胞值在LGT蛋白质组持续阳性表达组是增高的,在另一组是无变化,二者之间有显著性差异,而CD8^＋T细胞在二组内同时增高,CD4^＋T细胞和NK细胞二组同时低下,无显著性差别.结论：本研究提示肿瘤晚期可能存在有酪氨酸蛋白激酶修饰的细胞内信号传导,使之病情加重,而肿瘤早期则不明显.这是一种新的看法,应加强这个方面的研究.     

孔雀活化素基因(activin)ßA 亚基成熟肽序列的分子克隆及其对白孔雀起源与分类的佐证分析

参考已经克隆的活化素(activin)基因βA亚基成熟肽序列,设计一对兼并引物,从绿孔雀(pavo muticus)、蓝孔雀(pavo cristatus)和白孔雀基因组中克隆到活化素基因βA亚基成熟肽序列。测序结果表明,活化素基因βA亚基成熟肽序列长345bp,编码115个氨基酸。序列分析表明,蓝孔雀与绿孔雀核苷酸同源性为98.0%,而蓝孔雀与白孔雀核苷酸同源性为98.8%。NCBI收索结果显示,活化素基因βA亚基成熟肽序列在不同物种间都非常保守。氨基酸功能位点分析表明,活化素βA亚基成熟肽可能在细胞信号传递过程中发挥了很重要的作用。另外,利用活化素基因βA亚基成熟肽序列构建了三种孔雀的限制性酶切图谱及系统发生树。结果显示,白孔雀与蓝孔雀的亲源关系比与绿孔雀的亲源关系近。我们认为,白孔雀来源于蓝孔雀,很可能是蓝孔雀一个杂交后代或亚种,而不是人们通常所认为的仅仅是蓝孔雀的一个颜色突变体。Abstract: The sequences of activin geneβA subunit mature peptide have been amplified from white peafowl, blue peafowl (pavo cristatus) and green peafowl (pavo muticus) genomic DNA by polymerase chain reaction (PCR) with a pair of degenerate primers. The target fragments were cloned into the vector pMD18-T and sequenced. The length of activin gene βA subunit mature peptide is 345bp, which encoded a peptide of 115 amino acid residues. Sequence analysis of activin gene βA subunit mature peptide demonstrated that the identity of nucleotide is 98.0% between blue peaflowl and green peafowl, and the identity of that is 98.8% between blue peaflowl and white peafow. Sequences comparison in NCBI revealed that the sequences of activin geneβA subunit mature peptides of different species are highly conserved during evolution process. In addition, the restriction enzyme map of activins is high similar between white peafowl and blue peafowl. Phylogenetic tree was constructed with Mega 2 and Clustalxldx software. The result showed that white peafowl has a closer relationship to blue peafowl than to green peafowl. Considered the nucleotide differences of peafowls’ activin geneβA subunit mature peptides, a highly conserved region, we supported that white peafowl was derived from blue peafowl, and it is more possible the hybrid but just the product of color mutation, or maybe as a subspecies of Pavo genus.     

一个新的产氢细菌的鉴定及产氢特性的研究

利用Hungate滚管技术从福建省漳州垃圾处理厂厌氧消化器的颗粒污泥中分离到一株产氢的细菌L15。菌株L15为严格厌氧的革兰氏阳性杆菌,菌体大小为0.5μm～0.7μm×2.5μm～5.0μm,以侧生鞭毛运动。在孢肉培养基上产生端生的卵圆形芽孢。温度生长范围15℃～45℃（最适温度30℃～37℃）;pH 范围5.0～8.4（最适pH 6.3～6.8）。该菌株不水解明胶和七叶灵,不还原硫酸盐,牛奶变酸但不凝固,发酵多糖和少数的单糖、双糖和寡糖;发酵葡萄糖的最终产物为乙酸、丁酸、H2和CO2。G+C含量为298mol%。16S rDNA序列分析表明,该菌株属于梭菌的簇Ⅰ,与Clostridium paraputrificum较为接近（相似性为97.1%）。通过生理特征和16S rDNA序列的同源性分析,表明菌株L15应是梭菌属簇Ⅰ中的一个新种,命名为Clostridium defluvii。菌株L15保藏在中国普通微生物菌种保藏中心,保藏号为AS1.3489。菌株L15的最佳产氢温度为34℃、pH为7.0。当葡萄糖浓度为0.4%时,氢气产率可达到1.41mol H2/mol 葡萄糖。该菌可利用下列底物产酸产氢,括号内为产氢率(底物浓度1%)：果糖(1.00mol H2/mol)、麦芽糖(2.17mol H2/mol)、蔗糖(1.69mol H2/mol)、菊糖(4.70mol H2/mol)、糖原(5.49mmol H2/g)、淀粉(7.34mmol H2/g)。     

利用反向PCR方法扩增细菌热激蛋白HSP60基因

利用PCR简并引物扩增出HSP6 0基因中一段约 6 0 0bp的核心片段 ,将该核心片段标记为探针 ,与基因组DNA进行Southern杂交 ,选择出适宜的限制性内切酶 ,以便消化基因组DNA得到大小合适的、含有HSP6 0基因的酶切片段。将酶切片段自身环化后作为模板进行反向PCR ,引物的延伸方向自核心片段出发延环化分子向未知序列区进行 ,可扩增出核心区上下游的序列。应用该方法 ,扩增并测定了寓齿双歧杆菌 (Bifidobacteriumdenticolens)DSM1 0 1 0 5 T、奇异双歧杆菌 (Bifidobacteriuminopinatum)DSM1 0 1 0 7T 和阴道加德纳氏菌 (Gard nerellavaginalis)ATCC1 40 1 8T 的HSP6 0全基因序列及青春双歧杆菌 (Bifidobacteriumadolescentis)JCM1 2 75 T98%以上的HSP6 0全基因序列。结果表明 ,反向PCR方法可有效的扩增细菌HSP6 0基因     

棘托竹荪挥发油化学成分及抑菌作用的研究*

利用水蒸汽蒸馏法提取棘托竹荪的挥发油,得油率为0.45%。.应用气相色谱—质谱联用系统首次对其挥发油的化学成分进行研究。以FFAP柱分离出36个峰,用质谱法鉴定出28个成分,其主要成分为13-甲基-环氧十四烷-2-酮 (23.53%)、亚油酸(17.56%)、芹子烯(12.37%)、棕榈酸(8.20%)、9-十六碳烯酸(7.84%)、(-)-Lepidozenal(7.82%)等, 占总挥发油的97.76%。对挥发油进行抑菌试验,其结果为:桔黄青霉、啤酒酵母最敏感, 黑根霉、黑曲霉次之,白色假丝酵母、金色葡萄球菌,大肠杆菌稍差。     

稻瘟病菌无毒基因Avr-Pi1、Avr-Pi2和 Avr-Pi4a的遗传分析及其分子标记

用CO39近等基因系品种C101LAC（Pi-l),C101A51(Pi-2),C104PKT(Pi-3),C101PKT(Pi-4α）,C105TTP-4L-23(Pi-4b)对稻瘟病菌菌株81278ZB15和GUY11及其有性后代进行毒性分析,结果表明,81278ZB15含Avr-Pil,Aur-Pi2,Aur-Pi4α,Aur-Pi4b无毒基因,有性后代在Pi-1,Pi-2,Pi-4α上的无毒,有毒分离比例符合1：1,有8个后代个体发生了这3个无毒基因座的重组,推断81278ZB15对Pi-l,Pi-2,Pi-4α的的无毒性是由3个不同的单一基因座控制的,且3个基因座紧密连锁,进一步采用rep-PCR法比较了亲本及其在性后代的DNA指纹,获得了与3个无毒基因座紧密连锁的DNA标记（RPF1.2),RPF1.2与Aur-Pil,Aur-Pi2,Aur-Pi4α的遗传距离分别为5.9cM,2.2cM和2.2cM,2个亲本对Pi-3,CO39均有毒性,对Pi-4b均无毒性,但是后代中出现3个对Pi-3,1个对CO39无毒的个体;8个对Pi-4α有毒的个体,对其中可能的原因进行了初步探讨。     

苹果叶绿体基因组特征分析

苹果（Malus×domestica）是最重要的温带水果之一。为了能更好的了解本种的分子生物学基础．对已发布的苹果叶绿体全基因组序列进行了结构特征分析。结果显示苹果的叶绿体基因组全长为160068bp,具有典型的被子植物叶绿体基因组的环状四分体结构,包含大单拷贝区（LSC）,小单拷贝区（SSC）和两个反向互补重复区（IRs）,长度分别为88184bp,19180bp和26352bp。基因组共有135个基因（20个基因分布在反向互补重复区,因此整个基因组包含115个不同的基因）。按照功能进行分类,这115个基因包括81个蛋白质编码基因,4个rRNA编码基因和30个tRNA基因。其中,ycf15．ycf68和infA三个基因包含多个终止密码子,推测可能为假基因。苹果的基因组结构．基因顺序．GC含量和密码子使用偏好均与典型的被子植物叶绿体基因组类似。在苹果的叶绿体基因组中,共检测到30个大于30bp的重复序列,其中包括21串联重复,6个正向重复和3个反向重复序列;并检测到237个简单重复序列（SSR）位点,大部分的SSR位点都偏向于A或者T组成。此外,每10000bp非编码区平均分布有24个SSR位点,而编码区平均有5个SSR位点,表明SSRs在叶绿体基因组上的分布是不均匀的。本文对苹果叶绿体基因组序列特征的报道,将有助于促进该种的居群遗传学、系统发育和叶绿体基因工程的研究。     

印度小裂绵蚜在土壤中的垂直分布及其种群消长

【目的】印度小裂绵蚜Schizoneurella indica Hille Ris Lambers是在云南昭通苹果上发现的一种新害虫,发生普遍且严重。研究印度小裂绵蚜种群在土壤中的垂直分布及其消长动态是为了掌握其发生与危害特点。【方法】2002—2006年,我们采用盆栽和田间调查的方法对印度小裂绵蚜在土壤中的垂直分布和种群消长开展了研究。【结果】印度小裂绵蚜田间种群数量高峰期主要集中发生在9—12月,5—7月份为其田间种群快速增长期,种群增长率可达200%~273%。印度小裂绵蚜无翅蚜种群在0~30 cm的土壤范围内占总虫量的49.0%,30~60 cm的占27.0%,>60 cm的占24.0%。无翅蚜的各虫龄全年均有发生,冬季以第4龄若虫和无翅成虫为主。有翅蚜的发生全年只有1个时期,为11月上旬至12月下旬。【结论】印度小裂绵蚜田间种群数量全年发生1个高峰期,主要集中在0~30 cm的土壤范围内,随着土壤深度的增加,印度小裂绵蚜种群数量亦逐渐下降。田间有翅蚜虫量极少,较难观察到。     

pIRES2-GDNF-NT-3真核表达载体的构建与鉴定(英文)

目的:采用一种简便和高效的方法构建双基因共表达载体pIRES2-GDNF-NT-3。方法:人胶质细胞源性神经营养因子和神经营养素3是采用PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取,将人胶质细胞源性神经营养因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-GDNF-EGFP.神经营养素3 cDNA片段通过替换EGFP的方式插入到pIRES2-GDNF-EGFP中构建成为pIRES2-GDNF-NT-3双基因共表达载体。结果:人胶质细胞源性神经营养因子和神经营养素3被克隆,通过测序和酶切鉴定的得知与基因库报道序列一致。结论:人神经生长因子和神经营养素3双基因真核表达载体成功构建,它提供了一个新的表达系统,为进一步研究双基因的功能奠定了基础。     

基础卵泡刺激素水平对IVF/ICSI-ET超排卵周期卵巢反应

目的：基础卵泡刺激素(bFSH)可以刺激精子生成和促进卵子成熟,是人体内重要的激素之一。本研究针对体外受精(IVF)周 期bFSH 水平的变化情况,探讨bFSH对卵巢反应的预测价值,为临床研究提供理论基础。方法：回顾性分析2012 年1 月-2012 年 12 月在我院生殖医学中心接受体外受精- 胚胎移植(IVF-ET)治疗的154例患者的临床资料,根据基础卵泡刺激素水平分为A 组 (bFSH≥10 IU/L)、B 组(8≤bFSH≤10 IU/L)和C 组(bFSH<8 IU/L)。对比分析三组对象的年龄、基础窦卵泡数(bAFC)、黄体生成素 (LH)含量、FSH/LH 值、促性腺激素(Gn)的用量、使用时间、受精率及临床妊娠率等。结果：三组患者的年龄、bAFC 及FSH/LH相比 较,差异具有统计学意义(P<0.05);三组的Gn 用量和时间、获卵数及妊娠率比较,差异显著且具有统计学意义(P<0.05);三组基础 LH 值及超排卵周期受精率无显著差异(P>0.05)。结论：基础卵泡刺激素(bFSH)对体外受精女性的卵巢储备功能具有一定的预测 价值,bFSH 水平的高低可作为预测女性不孕患者超排卵周期卵巢反应性的一项重要指标,值得临床推广和应用。