重组Bacillus subtilis产B.stearothermophilus环糊精葡萄糖基转移酶的发酵优化

利用本研究室已构建的重组菌Bacillus subtilis/pBSMuL3-α/β-CGTase对产B.stearothermophilus环糊精葡萄糖基转移酶的发酵产酶进行了优化,考察了培养基中重要成分:碳源、有机氮源、无机氮源、有机与无机氮源质量比、碳源与氮质量比、金属离子种类等单因素对该重组菌产α/β-CGTase的影响,并采用正交实验对发酵培养基进行优化,对优化结果分析可知,重组菌B.subtilis/pBSMuL3-α/β-CGTase发酵产α/β-CGTase的最优培养基成本为:葡萄糖5 g/L,氮源(鱼骨蛋白胨∶NH4Cl=3∶1)25 g/L,1 mmol/L Mg^2+。在最优条件下发酵培养,α/β-CGTase的酶活由原来TB发酵培养基的9.20 U/mL提高至20.32 U/mL,是优化前酶活的2.2倍,为α/β-环糊精葡萄糖基转移酶的工业应用提供了理论支持。     

重组β-环糊精葡萄糖基转移酶生产偶合糖的工艺优化

偶合糖为一种可代替蔗糖的新型甜味剂,因其具有着色性能良好、保水性能优良、抗龋齿等优点,在食品、医药等领域具有良好的应用前景。本研究旨在找到廉价且易获得的供受体,并利用环状芽孢杆菌Bacilluscirculans 251来源的环糊精转移酶 (β-CGTase) 生产偶合糖,并优化确定制备偶合糖工艺。以蔗糖为受体,分别从加酶量、淀粉种类、温度、pH、供受比、异淀粉酶复配等因素对β-CGTase制备偶合糖工艺进行了优化。采用105 g/L马铃薯淀粉、95 g/L蔗糖为底物,向反应体系中添加13.5 U/g固定化β-CGTase和45.0 U/g异淀粉酶,在pH 5.5、40 ℃条件下反应21 h偶合糖产率达到88.4%。本研究创新性使用异淀粉酶协同β-CGTase制备偶合糖,该方法在产率和成本上均具有明显优势,为酶法制备偶合糖的工业化应用进一步奠定了理论和实验基础。     

饲料添加β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、血清代谢、免疫相关基因表达和抗亚硝酸氮应激能力的影响

实验旨在研究β-1,3-葡聚糖的不同投喂方式对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、血清代谢和抗亚硝酸氮应激能力的影响。选用480尾初体重(0.43±0.01) g的凡纳滨对虾, 随机分为4组, 即G0(全程投喂基础饲料)、G1组(全程投喂0.1%β-1,3-葡聚糖饲料)、G2组(0.1% β-1,3-葡聚糖饲料7d+基础饲料7d循环)和G3组(0.1% β-1,3-葡聚糖饲料14d+基础饲料14d循环)。在养殖84d后, 应用亚硝酸钠进行120h亚硝酸氮应激实验。结果显示, 各实验组凡纳滨对虾生长性能和全虾营养成分没有显著性差异。在养殖84d后, G2和G3组凡纳滨对虾肝胰腺脂肪酶活性显著高于G0和G1组(P<0.05), G1、G2和G3组凡纳滨对虾血清胆固醇和甘油三酯含量显著高于G0组(P<0.05), G3组凡纳滨对虾肌肉脂多糖/?-1,3-葡聚糖结合蛋白(LGBP)、酚氧化物酶原(proPO)和超氧化物歧化酶(SOD)mRNA表达显著高于G0和G1组(P<0.05)。亚硝酸氮应激120h, G1、G2和G3组凡纳滨对虾累计死亡率显著低于G0组(P<0.05), G3组凡纳滨对虾累计死亡率显著低于G0、G1和G2组(P<0.05)。在亚硝酸氮应激120h后, 与G0组相比, G1、G2和G3组凡纳滨对虾血清总蛋白含量显著升高(P<0.05), 葡萄糖含量、谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著降低(P<0.05); G3组凡纳滨对虾肌肉LGBP、proPO和SOD mRNA表达显著高于G0 (P<0.05), G1组凡纳滨对虾肌肉丝氨酸蛋白酶(SP)mRNA表达显著高于G0、G2和G3组(P<0.05)。结果表明, 14d间隔投喂0.1% β-1,3-葡聚糖可能通过促进能量代谢和LGBP、proPO和SOD mRNA表达提高凡纳滨对虾抗亚硝酸氮应激能力。     

重症心力衰竭患者运动病理生理学特征的临床研究*

目的: 通过症状限制性极限运动心肺运动试验（CPET）,从整体整合角度研究慢性心力衰竭患者（CHF）的运动病理生理学特征。方法: 选2016年10月至2017年10月就诊于中国医学科学院阜外医院签署知情同意书后的CHF 83例,并选同期12例正常人作为对照。在严格定标、规范化操作下按照美国加州大学洛杉矶分校医学中心标准完成连续递增功率方案的症状限制性CPET,并检测运动中呼吸循环代谢等功能指标。结果: CHF病人CPET核心指标中峰值摄氧量为（14.33±2.69） ml/（min·kg）, （44.25±14.74）%pred显著低于正常对照组（29.42±5.46） ml/（min·kg）, （83.88±6.28）%pred。此外,CHF组患者的无氧阈（AT）、峰值氧脉搏、摄氧通气效率峰值平台（OUEP）、二氧化碳通气当量最小值（Lowest VE/VCO₂）、二氧化碳通气当量斜率（VE/VCO₂ Slope）均与正常对照组有显著统计学差异（P<0.01）;CHF肺功能核心指标一秒用力呼气容积（FEV₁）、用力肺活量（FVC）、一秒率（FEV₁/FVC）、肺一氧化碳弥散量（DLCO）百分预计值均显著低于正常对照组（P<0.01）。CHF组收缩压的5个功能状态均显著低于正常对照组（P<0.05）,舒张压无统计学差异,心率在无氧阈、峰值和恢复2 min时均显著低于正常对照组（P<0.01）。分钟通气量、潮气量和呼吸频率在静息和热身状态下显著高于正常对照组（P<0.05）,在运动极限时显著低于正常对照组（P<0.05）,潮气量在恢复期显著高于正常对照组（P<0.05）。摄氧量在无氧阈、峰值和恢复2 min显著高于正常对照组（P<0.01）;氧脉搏在无氧阈、峰值显著高于正常对照组（P<0.01）;脉搏氧饱和在5个功能状态均显著低于正常对照组（P<0.01）。结论: 心源性疾病导致的CHF患者整体功能下降主要源于循环受限,同时呼吸和代谢也有受限。     

新生儿首次呼吸前后脐带动静脉血液氧和二氧化碳变化探索呼吸调控机制的初步报告I—血液氧和二氧化碳分压脐带动静脉差值的组间分析*

目的: 胎儿没有实际上的呼吸,新生儿出生后才开始呼吸,我们假设人的第一次呼吸主要是由于低氧而触发。本研究对流经主动脉体外周化学感受器后的脐带动脉血液氧分压（PuaO₂）变化规律和下限进行分析以探讨新生儿自主呼吸产生机制。方法: 选择签署知情同意书的正常分娩产妇数十例,仅14例新生儿在自主呼吸开始前成功完成脐带动脉或静脉置管。分别进行逐搏取血及顺序血气分析,计算血气指标的平均值、最高值和最低值,统计比较脐带动静脉的异同。结果: 在14例新生儿自主呼吸开始前完成采集脐带动脉（Pua）样本9例,脐带静脉（Puv）样本8例。就PO₂而言,所有9例PuaO₂随时间（心跳次数）呈逐渐降低倾向,直至在自主呼吸产生大约8~10次心跳后Pua挛缩、基本上无法取得足够的血样。PuaO₂平均值是（25.94±6.79,18.04~37.51）mmHg,最高值是（29.11±6.46,23.00~45.90）mmHg,最低值是（21.34±5.54,14.00~33.60）mmHg;但PuaCO₂变化趋势和规律则不够稳定,PuaCO₂平均值是（47.26 ±7.71） mmHg。PuvO₂随时间（心跳次数）虽也呈逐渐降低趋势,但多数还呈现随母亲呼吸节律的规律性交替升降的倾向,特别是母亲吸氧时。所有8例PuvO₂平均值是（53.35±21.35,32.56~100.73）mmHg,最高值是（90.38±48.44,43.40~153.00）mmHg,最低值是（36.96±14.90,24.80~73.80）mmHg;PuvCO₂平均值是（41.04±6.44)mmHg。虽然有着较大的个体差异,但 PuvO₂平均值、最高值和最低值均显著较PuaO₂高（P<0.05）;PuvCO₂虽略低于PuaCO₂,但无显著差异（P>0.05）。结论: 胎儿娩出为新生儿后自主呼吸前PuaO₂随时间（心跳次数）逐渐降低,在达到触发呼吸的阈值时诱发第一次吸气,从而开始自主呼吸。     

经尿道膀胱肿瘤电切术的护理

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤。近年来,其发病率有升高趋势．流行病学调查表明．城市发病率高于农村。经尿道膀胱肿瘤电切术不仅具有损伤小、恢复快等优点。而且不会造成肿瘤腹壁种植．反复手术也不增加难度。     

利用基因芯片对一高保守基因进行肿瘤相关分析

本对大规模人类cDNA测序过程中获得的一条高保守基因进行了初步功能研究,生物信息学研究发现该基因在人类、小鼠、果蝇、拟南芥和裂殖酶母中都有很高的保守性,其他分析预测该基因可能具有肿瘤相关性。RT－PCR分析表明,该基因在成人和胎儿组织中广泛谱表达。利用基因芯片分析该基因在7例肝癌、5例胰腺癌、2例喉癌和2例肺癌中表达情况,结果证实了该基因的肿瘤相关性,并且提示该基因在不同类型中可能处于不同的地位。     

利用基因芯片对一高保守基因进行肿瘤相关分析

本文对大规模人类cDNA 测序过程中获得的一条高保守基因进行了初步功能研究,生物信息学研究发现该基因在人类、小鼠、果蝇、拟南芥和裂殖酵母中都有很高的保守性,其他分析预测该基因可能具有肿瘤相关性。RT-PCR分析表明,该基因在成人和胎儿组织中广谱表达。利用基因芯片分析该基因在7例肝癌、5例胰腺癌、2例喉癌和2例肺癌中表达情况,结果证实了该基因的肿瘤相关性,并且提示该基因在不同肿瘤类型中可能处于不同的地位。 Abstract:Preliminary function research of a highly conserved human gene,which was cloned from human fetal cDNA library during large-scale cDNA sequencing,is illustrated in this article.Bioinformatics analysis indicates that this gene is highly conserved in human、mouse、fruit fly、thaliana and fission yeast.Other bioinformatics analysis implies its relevance with tumors.RT-PCR analysis shows its wide-ranging expression patterns.Its expression in 16 cancer cases(including 7 liver cancer cases、5 pancreas cancer cases、2 larynx cancer cases and 2 lung cancer cases) is studied by using gene microarray analysis.The result shows its relevance with tumors and implies it may have different status in different classification of tumors.     

原油污染土壤中生物表面活性剂菌株的筛选和产物鉴定

【目的】从原油污染的土壤中分离出产表面活性剂的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SX-20,并对其产物进行提取及结构分析。【方法】采用氯化十六烷基吡啶和溴百里酚蓝混合溶液(cetylpyridinium chloride-bromothymol blue,CPC-BTB)显色反应结合血琼脂平板简单高效的筛选得到产脂肽的枯草芽孢杆菌。通过酸沉淀、甲醇萃取和旋转蒸发提取发酵所产生的粗产物,该产物对痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)具有良好的抑制作用。运用傅里叶红光变换光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)、氨基酸分析和液相质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)对粗产物的成分进行分析。【结果】筛选所得的菌株所产物质是含C15脂肪酸链和7个氨基酸形成的环状的脂肽表面活性剂。【结论】本研究为筛选脂肽类生物表面活性剂提供了一定的理论基础和技术路线,有利于后续获得高产的低成本的生物表面活性剂。     

慢病毒介导CDCA5敲低的三阴乳腺癌细胞的构建及鉴定

目的:利用RNA干扰技术与慢病毒感染体系构建稳定干涉细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)基因的三阴乳腺癌细胞系,研究CDCA5在三阴乳腺癌细胞增殖过程中发挥的功能。方法:首先通过分子克隆技术构建稳定干涉CDCA5基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)质粒,并用PCR、琼脂糖凝胶电泳和深度测序技术进行验证;在此基础上,利用慢病毒感染体系将干涉质粒进行病毒包装、感染三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过SDS-PAGE、Western印迹检测MDA-MB-231细胞中CDCA5蛋白质的表达水平;通过细胞活力检测实验研究干涉CDCA5对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。结果:琼脂糖凝胶电泳与DNA测序结果显示稳定干涉CDCA5载体构建成功;SDS-PAGE及Western印迹结果显示稳定干涉CDCA5质粒在MDA-MB-231中获得表达,并能够敲低CDCA5蛋白表达水平,稳定干涉CDCA5的三阴乳腺癌细胞系构建成功;细胞活力检测实验结果表明,与对照组相比,干涉CDCA5蛋白表达水平能有效抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力。结论:运用RNA干扰技术与慢病毒感染体系能够构建稳定干涉CDCA5的三阴乳腺癌细胞系,该细胞系的建立为进一步研究CDCA5在三阴乳腺癌发生、发展及转移过程中的作用及分子机制提供了重要的实验材料。