基因编辑技术对大肠杆菌yjjW基因点突变的两步法策略

【目的】为了实现对大肠杆菌靶基因的点突变,本研究将同源重组系统与CRISPR-Cas9技术相结合,探索一种高效、简捷的两步法策略。【方法】将靶基因的上下游同源臂和标记基因(amp)与pKOV质粒连接,获得pKOV-HR重组质粒。将pKOV-HR转化至大肠杆菌,借助其自身RecA重组系统,介导DNA发生同源重组,获得靶基因敲除菌株。随后,靶基因的点突变采用pSGKP-km和pCasKP-apr双质粒系统。首先,设计与amp结合具有定向引导作用的spacer序列,并利用overlap PCR获得带有靶基因点突变的同源臂,将spacer和同源臂与pSGKP-km质粒连接,获得重组质粒pSGKP-km-spacer-HR;接着,将pSGKP-km-spacer-HR和pCasKP-apr质粒转化至上述敲除菌株;最后,利用质粒表达的Cas9切割蛋白和λ-Red重组蛋白,发生DNA同源重组,获得靶基因点突变菌株。【结果】利用上述方法,既成功获得了大肠杆菌yjjW敲除菌株D7ΔyjjW::ampR,又实现了yjjW第24位碱基T到C的点突变,获得点突变菌株D7yjjW-24。【结论】本研究建立了一种高效、简捷的大肠杆菌靶基因点突变方法,amp基因的插入提供了有效的筛选标记,此外该方法建立的重组质粒pSGKP-km-spacer,可应用于同种菌株其他靶基因的点突变,能够缩短后续实验操作,为基因编辑技术的发展提供了科学理论以及实验操作基础。     

柯尔克孜族成人的体型

探讨新疆柯尔克孜族成人体型特点及其规律,并分析该族群在不同地区（南、北疆）体型的差异性。应用人体测量法,在知情同意原则的基础上,2017年7月至2018年8月,随机抽取新疆南疆和北疆地区柯尔克孜族成人作为调查对象,共计1270名（男551名,女719名）。按年龄、性别、地区分组,对所有调查对象的身高、体质量等10项指标进行了测量,并应用Heath-Carter体型评价法进行体型判定。研究发现,南疆地区柯尔克孜族成人体型具有性别间的差异;南、北疆柯尔克孜族成人体型存在地区间的差异;从体型上看柯尔克孜族与汉族较相似。     

鱼类基因数据库与生物信息学在鱼类基因开发上的应用

近十年来,随着分子生物学技术的发展,各国际组织间的合作研究使得资源基因组计划得以普遍实施.各种动物、植物基因组数据库均在互联网上陆续发布,生物信息量随之迅猛增长,然而如何利用并发掘这些数据蕴涵的宝藏,从中提取解释生命个体生长发育、免疫调节以及病害控制等机理的宝贵信息,已成为人类所面临的巨大挑战.     

陕西省袭人胡蜂种类与分布

通过调查基本明确了陕西省袭人胡蜂的种类和发生危害情况,确定了袭人胡蜂不同种类在陕西省各地区的分布情况,并制定了分类检索表,描述了3种主要的袭人胡蜂和其它2种胡蜂的基本特征。     

藏族生物人类学研究回顾

藏族生活在具有世界屋脊之称的青藏高原,特殊的生态环境和特殊的文化背景造就了藏族特殊的适应高原缺氧机制和体质特征,引起了国内外学者的广泛关注和浓厚的研究兴趣。本文从国内外数据库收集了492篇国内外杂志发表的关于藏族人类学研究方面的论文。通过统计、分析并结合我们的工作,初步回顾了30年藏族人类学研究,重点分析了藏族与汉族的族源关系。这些文献显示,从体质特征、血型、分子生物学和考古材料等方面都证明藏族是中华民族大家庭中不可缺少的的一员。本文最后展望了藏族生物人类学今后的发展。     

耐碱和耐热木聚糖酶研究进展

木聚糖酶是一种重要的工业用酶,近年来由于它在制浆和造纸工业中的特殊用途而受到广泛关注。在制浆和造纸工业中需要耐碱和耐热的木聚糖酶。要得到这样的木聚糖酶有两种办法,一是从极端环境中筛选这样的高产木聚糖酶的微生物,其二是用先进的生物技术对现有的木聚糖酶进行遗传改造,以达到耐热和耐碱的目的。     

小鼠单个植入前胚胎cDNA文库的构建及应用

哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法,阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种较好的方法。用小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2细胞、4细胞和8细胞胚胎分别构建了cDNA文库。滴度分别为:62×105、83×105、104×106、151×106和162×106。随机挑选了29个克隆并进行了序列分析,结果表明,和已知表达序列标签(ESTs)同源的序列为6552%(1929),未知序列为1379%(429),并发现了2个重复序列。用特异性引物,分别对小鼠持家基因(βactin)和发育特异基因(OCT4)进行PCR扩增,结果表明,所建立的cDNA文库可以反映小鼠胚胎在不同发育阶段整个基因群体的转录活性,为阶段特异性基因的筛选和小鼠早期阶段基因表达模式的研究提供了一种有价值的资源库 。     

工业固体糖发酵生产L—赖氨酸

<正> 本文报道用中国科学院微生物研究所L—赖氨酸产生菌株A—77,发酵工业固体糖生产L—赖氨酸的试验研究结果。试验表明,A—77菌株对生长因子要求较高,因此对工业固体糖的发酵产酸能力较差。当添加20%甜菜糖蜜的混合糖为糖源,并提高豆饼水解液的质量时,菌株产酸能力得以充分显示出来。在一般培养条件下,该菌株可在发酵液中积累L—赖氨酸43%,转化率为31.5%,     

不同温度处理对珠芽魔芋球茎休眠调控的影响

为探究不同温度处理对珠芽魔芋球茎休眠调控的影响，以珠芽魔芋叶面球茎为材料，在球茎休眠期设置昼/夜变温（24℃/9℃、24℃/13℃、24℃/17℃）、恒温（9℃、13℃、17℃、21℃）及室温处理，萌发期设置26℃、33℃催芽处理，分析不同温度处理后珠芽魔芋球茎在休眠 Ⅰ 期、休眠 Ⅱ 期以及萌发前期、中期、后期、末期的生物表型变化、内源生理变化规律及其休眠调控相关基因的变化情况。结果表明：（1）休眠期恒温处理有利于提高珠芽魔芋球茎的出芽比，其中13℃恒温打破休眠和萌发期33℃催芽处理球茎的发芽率最先达到峰值，且其出芽比最高。（2）休眠Ⅱ期的球茎淀粉含量低于休眠Ⅰ期，而其可溶性糖含量高于休眠Ⅰ期，13℃恒温处理球茎淀粉含量下降最快，其可溶性糖含量最高；前期恒温处理球茎淀粉、可溶性糖含量在萌发前期和萌发后期之间均存在显著性差异（P＜0.05），而前期昼夜变温处理球茎仅可溶性糖含量在萌发前期和萌发后期之间存在显著性差异（P＜0.05）。（3）珠芽魔芋球茎ABA含量在休眠 Ⅰ 期和休眠 Ⅱ 期逐渐增多，而其GA3含量逐渐减少，萌发期珠芽魔芋球茎ABA含量呈现“先升后降”的规律，26℃催芽处理的珠芽魔芋球茎GA3含量呈现“先升后降”的规律，33℃催芽处理的珠芽魔芋球茎GA3含量整体呈上升的趋势。（4）珠芽魔芋NCED基因表达量随着休眠程度的加深逐渐增加，而在萌发期逐渐减少，CYP707A基因表达量随着休眠的加深逐渐减少，而在萌发期表达量增加。研究发现，珠芽魔芋打破休眠的最佳温度为恒温13℃，促进萌发的最佳温度为33℃；随着珠芽魔芋打破休眠，球茎中的淀粉含量降低，可溶性糖含量升高；ABA含量“先升后降”，GA3含量“先降后升”；NCED和CYP707A基因可能是珠芽魔芋休眠调控中的关键基因。     

腐生植物

阐述了腐生植物的概念、营养方式,并着重介绍了我国腐生植物的主要类群和近年新发现的几种腐生植物的特征。