影响虎杖毛状根高频诱导的因素探讨

利用发根农杆菌ATCC15834对虎杖（Reynoutria japonica Houtt．）进行遗传转化,探讨影响其毛状根高频诱导的因素。结果表明：成熟叶片是转化效率较高的外植体,感染10d左右可形成毛状根,平均诱导率为55．66％,诱根密度为4．30。经PCR检测．证实农杆菌Ri质粒中的rolB及tms基因全部转入毛状根中。改良YEB培养液活化菌种后对出根作用小显著;叶片未经预培养而直接进行感染,其出根效果要明显好于经过MS。或利用TDZ预培养处理（P〈0．01）．毛状根平均诱导牢可达到81．84％,诱根密度为7．04;稀释菌液浸泡、超声振荡或微波辐射处理均可促使叶片提前出根．其中以超声处理30s效果最显著（P〈0．01）;感染叶片上表皮向上放置进行共培养有利于毛状根形成。在优化各种转化条件后,虎杖毛状根平均诱导率可提高到97．1％,诱根密度达到11．3。     

雌激素受体关联受体α 调节脂肪细胞甘油三酯分解

雌激素受体关联受体a (Estrogen-related receptor a,ERRα) 是调控机体能量代谢的关键转录调控因子,也是脂肪生成的关键调控者。为研究ERRα对脂肪细胞甘油三酯分解的影响及其分子机制,分化的猪脂肪细胞在PKA (Protein kinase A) 或/和ERK (Extracellular signal-related kinase) 抑制剂预处理和不处理的情况下,再用Ad-ERRα侵染或XCT790处理48 h。通过测定脂肪细胞中甘油三酯浓度和培养液中的甘油释放量分析脂肪细胞的脂解变化;Western blotting方法检测PPARγ (Peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)、perilipin A、p-perilipin A、HSL (Hormone sensitive lipase,HSL) 和ATGL (Adipose triglyceride lipase,ATGL) 蛋白表达。结果显示,ERRα显著促进猪脂肪细胞分化及甘油三酯积累,同时促进了甘油三酯水解;分别及同时阻断PKA和ERK通路并不影响ERRα对脂肪细胞甘油释放的促进作用;ERRα显著上调HSL、ATGL、PPARγ及perilipin A蛋白表达,但p-perilipin A水平并未发生变化。推测过量表达ERRα可能导致HSL和ATGL蛋白表达上调并促进甘油三酯水解,从而为脂肪细胞分化提供更多的游离脂肪酸 (Free fat acid,FFA) 作为甘油三酯合成周转的底物。     

高效液相色谱法测定雷帕霉素

建立了雷帕霉素高效液相色谱测定方法。其色谱条件：色谱柱Zorbax Eclipse XDB-C8（4.6 mm×150 mm, 3.5 μm）反相柱,以乙腈和水溶液为流动相,紫外检测波长278 nm,流速1.0 mL/min,柱温55 ℃。结果表明：此方法标准曲线范围是0.2～20 μg,线性良好,加样回收率为99.4%～100.79%,日间相对标准偏差（RSD）（n=4）为1.25%～2.25%。本方法操作简便、准确,可有效应用于雷帕霉素提取纯化过程中的检测。     

极北鲵消化道6种内分泌细胞的免疫组织化学研究

应用卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)免疫组织化学法,对极北鲵(Salamandrella keyserlingii)消化道5-羟色胺(5-HT)、胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)、胰高血糖素(Glu)、人胰多肽(PP)和P-物质(SP)6种内分泌细胞的分布进行了研究。文中采用Duncan多重比较的方法,对消化道内分泌细胞的分布密度进行统计学分析。结果显示,5-羟色胺细胞在消化道各部位均有分布,胃体(2.80±0.70)和十二指肠(2.60±0.75)分布密度最高,幽门最低(0.85±0.67);胃泌素细胞仅分布于小肠,十二指肠(1.85±0.75)密度最高;生长抑素细胞分布于食管、胃体、幽门、十二指肠和回肠各部位,且幽门(2.25±0.64)分布密度最高;胰高血糖素细胞只见于胃贲门部和胃体,人胰多肽细胞和P-物质细胞在整个消化道均未检测到。各种内分泌细胞的形态多样,呈圆形、椭圆形、锥体形和梭形等。极北鲵消化道内分泌细胞的这种密度分布和形态特点与其他两栖类动物及黑龙江产地的极北鲵相比,既有共性又有差异,其原因可能与物种、食性和栖息地环境等因素有关。     

工业生物催化前线动态及名家观点

随着现代生物技术的进步,尤其是酶的快速筛选和活力优化技术的发展,使酶的获取更加容易、酶的操作更加简单,进而促使生物催化成为手性合成的便利工具。综述了一些著名的国际化工或制药公司最近在生物催化技术研发和应用方面的动态信息以及相关技术的一些评论,以便我国从事工业生物催化工作的相关人士能从中获得有益启示。     

生物燃料系统分析模型

定量化系统分析模型是生物燃料潜力预测、影响分析及制定技术路线图和政策目标的重要工具。生物燃料供应链涉及很多行业,需要进行基于农 (林) 业、能源、经济和环境等多学科领域的综合分析。以下从生物燃料系统分析所需解决的问题出发,梳理了国内外生物燃料系统分析的一般方法,重点对农 (林) 业系统模型、能源系统模型、综合评价模型、微观成本、能耗和排放分析模型以及生物燃料专项宏观分析模型的主要优缺点和适用性进行了分析,给出了相应的应用实例,并强调根据特定的研究问题,选择具有不同适用性的模型和研究路线。有助于研究人员和政策制定者更好地了解生物燃料系统分析方法,也为我国学术研究机构建立生物燃料分析模型提供了参考。     

猪脂肪基质细胞成骨与成脂分化潜能的研究

目的:探索猪脂肪基质细胞体外培养和向成骨与脂肪细胞分化的条件。方法:常规方法培养猪脂肪基质细胞,分别向成骨细胞与脂肪细胞进行诱导,应用免疫组化(碱性磷酸酶法、茜素红)及油红O染色对诱导分化的细胞进行鉴定。结果:在体外培养条件下,猪的脂肪基质细胞呈成纤维样,生长旺盛,在一定的条件下,可分别被诱导分化为成骨细胞与脂肪细胞,向成骨分化的细胞表达碱性磷酸酶,在培养皿中可形成钙化斑。而在向脂肪细胞诱导分化过程中,细胞中可见有小脂滴生成,用油红O染色呈橘红色。结论:脂肪基质细胞是一种混合细胞,除了能向脂肪细胞分化外,在一定的诱导条件下,也能向成骨细胞分化。     

n-3PUFA调节脂代谢机制的研究进展

日粮中的n-3PUFA具有多种作用,除了调节质膜组成和影响细胞信号之外,同时还涉及多 种与脂代谢有关酶与蛋白的基因表达,如:PPARα、SREBPs、LXR等,通过它们来影响靶基因(如: ACO-A、FAS等)的表达,从而起到调控脂肪沉积的作用。     

雷帕霉素发酵条件研究

研究了不同发酵条件对雷帕霉素产量的影响。结果显示在最优条件下,进行了100L发酵罐的发酵试验,发酵190-200h雷帕霉素的产量为1200mg／L,产量较优化前提高一倍,达到了工业化生产的要求,为进一步放大生产奠定了基础。     

重组猪乳铁蛋白N端的高效表达及抑菌活性检测

为获得表达猪乳铁蛋白基因的重组菌株,并检测其表达的重组猪乳铁蛋白抑菌活性,应用RT-PCR方法从泌乳3d后母猪乳腺组织中扩增了猪乳铁蛋白N端1077bp的PLF-N基因片段,与GenBank上发表的4株猪乳铁蛋白基因序列相比,核苷酸同源性均达到99%以上。为了得到高表达量的PLF-N基因,以扩增的PLF-N片段为参考模板,经过密码子优化,全基因合成了编码猪乳铁蛋白N端的基因PLF-NS。将其定向插入到原核表达载体pET-30b中,转化大肠杆菌BL21,获得了表达PLF-NS的重组菌pET-PLF-NS/BL21;经IPTG诱导,并对表达条件进行优化,以及通过SDS-PAGE和Western blotting分析均表明猪乳铁蛋白得到了正确表达,其产物分子量约为42kDa,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的32%,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经裂解、纯化、复性处理后纯度达到98%。用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明重组猪乳铁蛋白具有明显的抑菌作用。表明通过基因优化对表达量低的基因进行改造使之高效表达,是一种提高表达效率的有效手段。