卵巢催乳素受体mRNA在小鼠卵泡发育及排卵过程中的表达

目的探讨卵巢催乳素受体(Prolactin receptor,PRLR)mRNA在小鼠不同发育阶段及排卵过程中的表达情况。方法选择不同发育时期的昆明小鼠,以及性未成熟昆明小鼠予以PMSG-HCG(Pregnancy Mare Serum Gonadotro-phin-Humane chorionic gonadotrophin,孕马血清促性腺激素-人绒毛膜促性腺激素)序贯处理,采用实时定量聚合酶链反应(Real-Time Polymerase Chain Reaction,Real-Time PCR)检测小鼠卵巢中PRLR mRNA的表达。结果PRLR mR-NA的表达水平随小鼠的不断发育而显著性升高,PRLR在6周龄小鼠卵巢中的表达量是3周龄小鼠的3.86倍(P0.01),11周龄与33周龄小鼠的表达水平分别是3周龄小鼠的19.67倍、19.81倍(P0.01);PMSG处理后12h,PRLR表达水平是对照组的1.44倍(P0.05),24h、48h后分别达到5.48倍和7.14倍(P0.01),HCG处理后4h、8h、12h,PRLR表达水平有所下降,但仍高于对照组(P0.01),24h、48h后其表达水平再次升高,分别是对照组的5.64倍和6.04倍。结果 PRLR对小鼠卵泡的生长、发育及其黄体形成与维持发挥重要作用。     

猪瘟病毒感染性cDNA克隆的构建及其致病性

为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT-PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK-15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线,通过电镜观察到重组病毒呈球形,具有囊膜结构。进一步把获得的猪瘟病毒粒子感染非免疫实验猪,结果子代病毒与石门株类似,对非免疫实验猪有强烈的致病性,证明该全长cDNA克隆可靠稳定,忠实地保留了石门株病毒的感染性和致病特征。由此为进一步探讨猪瘟病毒的致弱机制及病毒与机体相互作用的机制打下了良好的基础。     

双光子激发荧光各向异性度的成像

荧光各向异性度 (fluorescence anisotropy) 测量可以获得荧光分子的转动速度信息,进而了解分子质量、结构、以及与周边环境的相互作用情况 . 围绕一台双光子激发扫描荧光成像系统,通过改变外光路和图像记录与处理程序,从而实现了双光子激发荧光各向异性度成像,并针对一些典型样品和体系,展示了该方法的应用 . 实验中观察了 FITC 荧光分子、 FITC 结合的 CD44 抗体分子及与肿瘤细胞表面受体结合的 FITC-CD44 抗体分子 . 测量结果表明,不同分子质量、不同微观环境状态下的荧光分子,其各向异性度大小不同,在各向异性度图中能够被明显区分 . 荧光各向异性度成像能够定量测量样品微区的各向异性度值,并以二维图像的形式直观表达,是各向异性度测量与成像技术的良好结合 .     

药用野生稻转育后代一个抗白叶枯病新基因的定位

从药用野生稻渗入后代选育的水稻株系B5表现为高抗褐飞虱、白背飞虱和白叶枯病。对B5与籼稻品种明恢63杂交组合的187个重组自交系(RILs)进行了抗白叶枯病接种鉴定,采用分离集团分析法(Bulked Segregant Analysis,BSA),在第1染色体上筛选到与水稻抗白叶枯病基因相连锁RFLP分子标记。利用RILs抗病性表现型鉴定资料和构建的分子标记连锁图谱,将抗白叶枯病基因定位在第1染色体短臂的C904和R596之间,这两个分子标记间遗传距离为1．3cM。该基因对RILs群体抗病性变异的贡献率为52．96％,是一效应值较大的主效基因。这一抗白叶枯病基因不同于已报道的抗白叶枯病基因的位点,因此将其命名为Xa29(t)。     

可描述横向电场中外周神经兴奋的电缆方程

传统的电缆方程只能用于描述纵向电场中外周神经的兴奋,无法描述外周神经在横向电场作用下的兴奋,其于两阶段过程模型,提出一种改进的电缆方程,可以描述外周神经在横向电场中的兴奋,其结果和Struijk的离体实验数据相吻合。此改进的电缆方程可用于描述任意电场中外周神经的兴奋。     

传代内皮细胞形态和功能变化的关系

现在内皮细胞体外培养技术已在医学实验中得以日渐广泛的应用,为了更为合理地选择传代内皮细胞来进行各种研究,本实验结合了 传代内皮细胞在相差显微镜下的形态学改变及图象分析技术和蛋白质分泌功能的变化,探讨了传代内皮细胞形态和功能变化的关系。结果显示,传代内皮细胞存在着形态和功能相对稳定的阶段,在此阶段的几代细胞是作为实验选材的理想对象。而非稳定阶段的各代细胞间形态和功能都存有显著性差异,不应作为实验选材。     

牛樟芝中一个新型还原型聚酮合酶基因的克隆及表达分析

为了研究牛樟芝中PKS基因与化合物之间的关系,该研究通过对牛樟芝基因组分析获得牛樟芝聚酮合酶基因,以此序列为模板设计含有起始密码子和终止密码子的特异引物并以牛樟芝c DNA为模板克隆获得一个高度还原型PKS(HR-PKS)基因全长,命名为AcPKS2;对AcPKS2基因进行生物信息学分析,并比较该基因在不同培养基上的表达量。结果表明:AcPKS2全长7 842 bp,有24个内含子,其外显子共编码2 613个氨基酸,该蛋白的相对分子质量为293.5 kDa,理论等电点pI为5.78。用CDD分析其结构域显示,该基因属于HR-PKS,其结构域组织排列为KS-AT-DH-MT-ER-KR-ACP-TE,8个结构域其活性位点分别为β-酮基合成酶(DTACSSSL)、酰基转移酶(GHSIGETA)、脱水酶(RNDGSTSPL)、甲基转移酶(SFDIITAFDV)、烯酰还原酶(HAGVSSPAA)、酮基还原酶(GSPGQANYTAA)、酰基转移酶(YGLDSLTSVRL)、硫酯酶(KQPNGPY)。系统发育树显示AcPKS2与其他化合物未知的HR-PKS蛋白聚为一支,结构域和系统进化树分析显示该基因可能编码一种新的含TE结构域高度还原型聚酮合酶;表达分析结果显示葡萄糖和果糖能够诱导该基因的表达。     

牛樟芝HMGR基因的克隆和表达分析

为研究牛樟芝(Antrodia camphorata)萜类生物合成MVA途径中关键酶3-羟-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutary CoA reductase,HMGR)的调控机制,从牛樟芝基因组中分离并克隆出AcHMGR基因,对其进行生物信息学分析、不同碳氮源添加物对该基因的诱导表达情况进行分析。分析显示:AcHMGR基因含7个外显子、6个内含子;开放阅读框为3 402 bp,编码1 133个氨基酸残基组成蛋白质序列;AcHMGR包含HMGR典型的多肽位点,即2个HMG-CoA结合基序:PLG(Ⅰ/Ⅴ)AGPLK(Ⅰ/Ⅴ)DG和AEGTLVASTSRG,2个NADP结合基序:TGDAMGMNMI和IEVGT(Ⅰ/Ⅴ)GGGT;分子系统进化分析显示,AcHMGR蛋白序列与其他多孔菌科真菌的HMGR聚为一支;表达谱分析显示:碳源中的果糖、氮源中的酪蛋白胨诱导表达AcHMGR基因的能力最强。本研究为探讨牛樟芝萜类,尤其是三萜类化合物的生物合成及调控机理提供了帮助。     

Leptographiumbhutanense提取物抑菌活性的初步分析

内生真菌是动植物体内的微生物类群,其多样性、复杂性和特殊性的特点使其能够产生化学结构新颖、具有多种生物活性的次生代谢产物。本研究采用纸片法检测Leptographium bhutanense发酵提取物对13种致病细菌的抑菌活性,并对抗菌化合物的最低抑菌浓度(MIC)、热稳定性、光稳定性进行检测;同时,采用OSMAC策略寻找产抗菌化合物的最佳培养基、最佳培养时间和最佳接种量。分析显示提取物对3种人体致病细菌(蜡样芽孢杆菌,副溶血性弧菌,溶血性葡萄球菌)具有抑菌活性;其MIC值分别为:12.5mg/m L、6.25 mg/m L和6.25 mg/m L;提取物具有较好的热稳定性和光稳定性。产抗菌化合物的最佳培养基为:MFS,最佳培养时间和最佳接种量分别为15 d和1.0 g/100 m L。本研究为昆虫内生真菌抗菌化合物的开发利用提供帮助。     

葡萄果实发育过程中果肉细胞超微结构的观察

用透射电镜观察了“巨峰”葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca)果实3个发育时期中果肉细胞超微结构的变化。果实第一次快速生长期的果肉细胞超微结构表现出物质和能量代谢旺盛的特点。缓慢生长期的果实虽外部形态平静少变,但果肉细胞超微结构表现出深刻的变化:细胞核形状特化为裂瓣状是最显著的特点;线粒体数目丰富;粗面内质网槽库膨大形成的囊泡富集,出现向液泡汇融和向质膜靠近的现象;质膜内陷;液泡膜完整。另外,原生质也出现一些降解的现象。但总体结构特点表明果肉细胞在此期处于十分活跃的物质周转代谢和信息交换过程中。果实第二次快速生长期果肉细胞超微结构表现出衰老降解的特点,但线粒体结构依然完整,数量仍然丰富,原生质膜也保持了很好的完整性,这似乎与维持第二次快速生长或成熟有关。