染色体着丝粒中结构蛋白CenpB的基因在乳腺癌组织中的活跃表达

利用Northern印迹技术对31例乳腺癌组织块及每一例病人的癌旁正常(非癌性)组织块进行分析,发现多数情况下(87．1％)癌组织中着丝粒蛋白CenpB mRNA过表达;组织原位杂交分析表明,在CenpB mRNA过表达的乳腺癌组织中,呈现出比癌旁正常组织更强的杂交信号;用免疫印迹法研究同样的标本,结果与RNA水平上的研究高度一致。结果显示,CenpB基因的过表达可能与乳腺细胞恶性增殖有关。     

一个在肺癌血清中高表达的标志分子SAA的发现及鉴定

应用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)对175例肺癌病人和43例正常人血清进行了蛋白质谱检测. 通过Biomarker Wizard™ 和Biomarker Patterns™软件分析显示11.6 kD蛋白峰在肺癌病人血清中明显高于正常对照组, 同时该蛋白峰的表达水平与肺癌病人的临床分期密切相关, 随着病情的加重而逐渐升高. 进而采用Tricine-SDS-PAGE结合质谱分析鉴定出芯片上11.6 kD的蛋白峰为血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein, SAA). 使用抗SAA的特异性抗体通过免疫沉淀进一步证实了该蛋白峰为SAA. 同时还采用了ELISA方法对上述部分血清样本中SAA表达水平进行了测定, 结果显示其敏感性和特异性分别为84.1%和80%. 与蛋白质芯片使用单一差异蛋白质SAA划分结果基本一致. 上述实验结果表明, SAA能很好地划分肺癌病人和正常对照组, 很可能成为肺癌诊断和病情检测的一个标志分子.     

应用免疫荧光细胞化学方法研究src基因产物与细胞粘着斑的分子相互关系

细胞癌变原理是肿瘤研究中的关键问题。虽然1969年已提出“癌基因”假说,但由于癌变过程的复杂性及技术上的限制,长期以来进展较慢。七十年代中期以后,由于分子生物学理论和技术的迅速发展,人们采用DNA重组技     

动粒蛋白CENP-K和CENP-H可形成异源超螺旋复合体

动粒（kinetochore）是位于纺锤体主缢痕处表层的特化结构.它通过与纺锤体微管的结合,在有丝分裂期拉动染色体向两极运动,同时具有机械力产生和与中期检验点有关的功能,是细胞中机械强度最高的结构之一.动粒由一个很大的复杂的蛋白网络组成,目前了解较清楚的核心蛋白网络是KMN网络（K,KNL1;M,Mis12复合物;N,NDC80复合物）和CCAN网络（常驻性着丝粒相关网络,constitutive centromere-associated network）,但对其蛋白组分之间相互作用的分子机制仍然了解很少.本研究采用串联亲和纯化（TAP）技术在稳定表达TAP-CENP-K的HEK293细胞中寻找CENP-K的稳定蛋白复合体,结果表明CENP-K和CENP-H形成强稳定的（耐受750mmol/L盐浓度）、比例接近11的蛋白复合体.经过预测,CENP-K与CENP-H都是超螺旋（coiled-coil）蛋白.CENP-K与CENP-H片段进行的体外Pull-down实验也证明了两者的N端片段之间以及C端片段之间分别存在直接的相互作用,并且C端片段之间的相互作用更明显.综上所述,CENP-H与CENP-K之间的强相互作用可能是通过形成异源超螺旋复合体实现的,可能在介导动粒与微管连接中起到重要的作用。     

细胞培养中的支原体污染问题(续)

6.放射性同位素自显影方法可用~(?)H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷或尿嘧啶核苷自显影实验检查支原体的污染。此法的简单原理是:无污染的正常细胞在S期(DNA合成期)可摄取大量的胸腺嘧啶脱氧核苷到细胞核中。而当细胞被污染后,培养液的胸腺嘧啶脱氧核苷被支原体的嘌呤嘧啶核苷磷酸化酶     

S_(180)-V系细胞周期中cAMP,cGMP含量与细胞形态变化扫描电镜的观察

本实验用氚标记环磷酸腺苷(~3H-cAMP)及碘标记环一磷酸鸟苷(I~(125)-cAGP)的放射免疫法,测定了体外培养S_(180)-V系细胞周期中悬浮的M期细胞和其贴瓶细胞与均相细胞内cAMP及cGMP的含量,并对相应的细胞形态的变化做了扫描电镜观察。此外,对这三种群体细胞体积进行了测量,据此对这些细胞内cAMP及cGMP浓度进行了换算。实验结果表明:M期细胞体积的平均值接近其它时相细胞平均细胞体积的2倍,M期细胞的cAMP含量明显低于贴瓶细胞和均相细胞内cAMP含量,而cGMP含量略有提高,但差异不显著,但cAMP/cGMP比值与贴瓶细胞(非M期的其它时相细胞)及均相细胞(包括M期时相的混合细胞)相比,显著降低,相差2—3倍。用扫描电镜对上述测定的各类细胞组份进行了对应的观察,从其外形的变化表明,S_(180)-V系细胞的骨架系统很不发达,在cANP含量低的漂浮组(M期细胞)比贴瓶细胞的骨骼系统更不发达.     

哺乳动物细胞去核产物(胞质体及核体)的结构与功能研究

1967年Carter发现细胞松弛素可以诱发组织培养细胞的自发排核之后,Prescott(1972)借助细胞松弛素存在下的离心处理,使这一排核现象普遍化,从而确立了体外细胞去核的标准方法。经过不断改进(croce et al., 1974;Veomett et al., 1976;Lucas etal., 1976;Wigler et al., 1975),现在,这一技术已广泛应用于细胞学研究的各个重要领域(Mc Burney et al., 1979;Goldman et al., 1974;du Bols et al., 1980)。细胞去核技术及其应用的研究在我国已有初步开展(陈瑞铭等,1979;沈鼎武等,1980)。本实验对二种上皮型传代细胞系进行了去核手术,用扫描电镜和透射电镜对所获得的胞质体     

大鼠前体脂肪细胞分化过程中波形纤维形态结构的变化和波形纤维蛋白基因表达的研究

通过对不同分化阶段的大鼠前体脂肪细胞中波形纤维蛋白的结构形态和分布的间接免疫荧光观察,发现随着前体脂肪细胞的分化,波形纤维形态结构发生特异性改变,即从前期的围绕细胞核聚集且向细胞周边平行延伸到后期的围绕脂滴间隔形成致密笼状结构。此外,通过地高辛标记的寡核苷酸探针的原位杂交和免疫印迹研究了前体脂肪细胞的分化对波形纤维蛋白基因表达的影响。结果表明,分子量为57kD的波形纤维蛋白在mRNA水平和蛋白水平的表达贯穿于前体脂肪细胞分化的全过程,表达量呈递减趋势。这提示在前体脂肪细胞分化中,波形纤维与脂滴的特异性结合对于脂滴的前体脂肪细胞分化有着功能性的联系,特别是对脂肪细胞的脂滴形成极可能起到支撑的作用。     

分化抑制因子Id在若干种癌及永生性细胞中的表达

利用半定量RT PCR方法对 1 7种细胞的Id基因表达进行了检测 ,发现在CD34+阳性干细胞增殖过程中 ,Id1由不表达到适度表达 ,而Id2由中等程度表达到高表达。Id3、Id4的表达在扩增前后变化不大。说明Id1和Id2在脐带造血细胞扩增过程中可能参与作用。在 2种肺癌、2种肠癌及一种肝癌、乳腺癌细胞中Id1～Id4的表达呈现一定的规律 ,对于同一类癌细胞株其表达基本相同或相似 ,而不同类癌细胞株其表达则相差较大 ,说明对某一类细胞株 ,Id1～Id4有相对稳定的作用。实验对深入认识Id基因的作用、红白血病发生机理和治疗均有重要意义。     

对细胞骨架教学的体会(根据在细胞骨架教学比赛会议上的发言整理)

1细胞生物学课讲什么刚才几位教授都谈到:教科书上写的,同学们大都已经读过,或至少是可以读的。照本宣科,时间不够,也不必要。给本科生和研究生讲的是不同的,但共同之处是:我们不是要做"搬运工",学生也不是"仓库"。所以我觉得值得我们认真思考的,不光是我们应当讲什么,更重要的是要让学生听了之后能真正