DCM和DMF对DCC—HOBt系统催化酯化及酰化反应的影响

ＤＣＣ－ＨＯＢｔ系统在ＤＣＭ和ＤＭＦ溶剂中,催化Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ与王氏树脂的酯化反应,其结合率分别为１８％和１０％,该系统催化Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ与Ｈ２Ｎ－Ｌｅｕ－＝ｒｅｓｉｎ的酰化反应中,溶剂为ＤＣＭ时,反应３０ｍｉｎ,其结合率为１００％;当ＤＣＭ：ＤＭＦ体积比为１：３．５时,反应１３０ｍｉｎ,其结合率为８１％,表明ＤＣＣ－ＨＯＢｔ系统宜在ＤＣＭ非极性溶剂论肽键的形成。     

分子伴侣TCP1的结构预测及分析

利用必良的Ｃｏｕ ａｎｄ Ｆａｓｍａｎ方法和Ｐｒｏｓｉｓ软件包中的Ｒｏｂｓｏｎ方法,对四个Ｔ－复合物多肽１（ＴＣＰ１）及五个同源蛋白南进行结构预测。预测结果显示,ＴＣＰ１中可能存在两个结构域及结构域中间的一个“铰链区”。推测这两个结构域可能是α／β筒状结构,一段公认的ＡＴＰ结合区、中心为８７－９１位的ＧＤＧＴＴ,在二级结构预测中显示无规卷曲。     

脱脂蛋白模型多肽与脂质体相互作用的高效液相色谱研究

应用凝胶过滤高效液相色谱,测定了两个两亲性多肽Ａｍｐ１和Ａｍｐ２进入磷脂酰甘油／磷脂酰胆碱脂双层的表观分配常数,并利用三硝基苯磺酸分析研究了与脂质体结合的多肽的氨基暴露状况。由结果推测,处于膜结合状态的多肽的氨基端是暴露于水相的;Ａｍｐ１与脂双层相互作用强于Ａｍｐ２,一方面表现为Ａｍｐ１比Ａｍｐ２埋膜较深,另一方面表现为Ａｍｐ１与脂双层的结合能力比Ａｍｐ２强,而主要表现在于后者。此外也发现两个多肽在缓冲液中处于几乎不存在暴露的氨基的聚合状态。     

植物多肽PA1b打开胰腺β细胞L型钙通道促使钙内流和细胞分泌

利用海藻酸在pH2.7的条件下对小分子多肽的吸附作用,从豌豆种子中分离并纯化出含37个氨基酸的小分子肽PA1b(pea albumin 1b),它的肽链内具有6个半胱氨酸并形成一个胱氨酸结构模体.采用荧光显微技术和膜片钳技术,发现胞外施加PA1b在胞外钙离子存在的情况下使胰腺β细胞内钙离浓度增加,该效应被特异性的L型钙通道的阻断剂尼莫地平(nimodipine)阻断,在零钙外液中PA1b对胞内钙离子浓度无影响;此外,PA1b使β细胞膜去极化并使膜电容增加.因此推断PA1b使原代β细胞上去极化细胞膜,使L型钙离子通道开放,细胞外钙离子内流并促发细胞分泌.     

重组人心房利钠肽 (ANP) 的原核表达、纯化及鉴定

为提高重组人心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)的表达量,将3个ANP通过赖氨酸(Lysine,K)串联,并构建相对应的重组表达载体p ET28a(+)/ANP3。转染大肠杆菌进行诱导表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的60%。经过包涵体变复性,赖氨酸酶(Lys-C)和羧肽酶(CPB)水解,以及一系列层析纯化,每升培养液可获得约16 mg的ANP蛋白。最终,纯化后的ANP经UPLC及Tricine SDS-PAGE鉴定,纯度大于90%,LC-MS鉴定显示其分子量为3 080 Da,且为二硫键正确形成的ANP单体,通过ELISA试剂盒检测,其具有和参比品一致活性。本研究为ANP的大规模制备打下了基础。同时,所采用的串联表达技术也为其他多肽类药物的重组表达提供了新的思路。     

核桃多肽对高糖诱导HepG2胰岛素抵抗模型的影响

摘 要：目的：探究核桃多肽在细胞水平上的降糖作用机制,为核桃资源开发利用提供科学依据。方法：在实验室提取的HT多肽,分离纯化HT-1、HT-2的基础上,通过GLUT4转膜活性筛选,L6肌管细胞葡萄糖摄取活性筛选以及高糖诱导HepG2细胞模型胰岛素抵抗实验,探究核桃多肽的降糖生物活性及降糖作用机制。结果：HT多肽、HT-1、HT-2均有一定的促GLUT4转膜活性,其中量效曲线趋势分布较好的为HT-2,15min开始响应,30min达峰值,在25min细胞膜上GLUT4增加1倍;葡萄糖摄取活性都较好,摄取率分别为1.16、1.06和1.36;IRβ、IRS-1蛋白、GLUT2蛋白的表达水平与HT-2呈浓度依赖性增加,表明HT-2通过胰岛素信号传导途径改善葡萄糖代谢。结论：HT多肽、HT-1、HT-2的降糖活性都较好,其中HT-2效果明显,且是通过胰岛素信号传导途径改善葡萄糖代谢。     

全球寡核苷酸类药物开发现状与趋势

从产品开发角度分析寡核苷酸类药物的发展现状和未来趋势。     

胎盘多肽注射液对慢性湿疹患者血清TNF-2α,INF-γ和ECP水平的影响

目的:探讨胎盘多肽注射液治疗慢性湿疹的疗效观察及对血清肿瘤坏死因子(TNF)-2α、干扰素(INF)-γ、嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)水平的影响。方法:选择2014年5月至2016年5月我院接诊的86例慢性湿疹患者,通过随机数表法分为观察组(n=43)和对照组(n=43)。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上加用胎盘多肽注射液。观察并比较两组患者治疗前后血清TNF-2α,INF-γ及ECP水平、临床疗效及复发率。结果:治疗后,观察组TNF-2α、INF-γ、ECP水平均比对照组低(P0.05);观察组红斑、丘疹、表皮脱落、苔藓化症状得分均优于对照组(P0.05);观察组总有效率比对照组高(P0.05);在随访的3个月中,观察组复发率比对照组低(P0.05)。结论:在慢性湿疹患者中应用胎盘多肽注射液效果显著,可有效缓解临床症状,增加机体免疫力,提高预后,值得应用推广。     

参麦注射液联合不同类型他汀类药物治疗不稳定型心绞痛的近期疗效比较

目的:探究参麦注射液联合不同类型他汀类药物治疗不稳定型心绞痛的近期疗效。方法:收集本院收治的不稳定型心绞痛患者37例,随机分成实验组与对照组。对照组18例予参麦注射液联合普伐他汀治疗;实验组19例予参麦注射液联合阿托伐他汀治疗。比较两组治疗前后血脂水平的变化及临床疗效。结果:治疗后,两组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平均较治疗前显著下降(P0.05),心绞痛发作次数及时间均明显减少或缩短(P0.05);与对照组相比,实验组治疗后的TC、LDL-C水平均较低(P0.05);不良反应发生率(15.8%)低于对照组(27.8%)(P0.05)。结论:参麦注射液联合不同类型他汀类药物治疗不稳定型心绞痛的近期疗效相当,但阿托伐他汀治疗可更有效降低患者的血脂水平,安全性更高。     

Rhodococcus sp. R04细胞色素P450单加氧酶及CYP125A18与唑类药物的互作分析

红球菌 (Rhodococcus sp.) R04基因组有15种细胞色素P450单加氧酶,其中CYP125A18与结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis) 和马红球菌 (Rhodococcus equi) 的CYP125有较高同源性。利用NCBI蛋白质数据库搜索同源序列,对Rhodococcus sp. R04的15种CYP450一级结构序列进行比对和系统发育分析;对CYP125A18基因进行了克隆表达,并用紫外分光光度法对蛋白质的光谱学特性以及与唑类药物互作情况进行分析。实验结果表明,Rhodococcus sp. R04 15种CYP450均含有保守的氨基酸序列和铁血红素催化中心。SDS-PAGE分析表明,CYP125A18分子量约为50 kD,CYP125A18还原态和CO结合后与CYP125A18氧化态的差示光谱表现为典型的CYP450光谱特性。CYP125A18与底物4-胆甾烯-3-酮结合后,血红素铁全部转变为高自旋状态;与唑类药物滴定后发生了II型光谱转变。解离常数表明,7种唑类药物与CYP125A18的亲和力由强到弱依次为酮康唑、益康唑、4-苯基咪唑、氟康唑、4-甲基-2-苯基咪唑、克霉唑、甲硝唑。上述发现对研究CYP125代谢胆固醇具有重要意义,同时为疾病耐药性研究及药物选择提供数据和理论支持。