小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析

【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥重要作用,克隆与鉴定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明确其与配体化合物的结合特性有助于阐明小菜蛾嗅觉识别的分子机制。【方法】利用PCR技术克隆小菜蛾OBP2,对获得的编码序列全长进行信号肽及跨膜区域预测,用DNAMAN与其他昆虫的OBP2进行多序列比对,采用MEGA5.0邻接法(neighbor-joining method,NJ)构建进化树。通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同发育阶段和不同组织中的表达模式。构建原核表达载体p ET28aPxyl OBP2,进行原核表达及蛋白纯化。利用荧光竞争结合实验对Pxyl OBP2蛋白与39种配基化合物的结合特性进行分析。【结果】成功获得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登录号:KT070562)的编码序列全长,其完整开放阅读框大小为546 bp,编码182个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸结合位点。荧光定量PCR结果表明,发育表达模式显示,Pxyl OBP2在未交配雄性成虫中的表达量均明显高于雌性成虫和已交配雄虫;组织表达模式显示,Pxyl OBP2在足中的表达量高于其他组织。经预测成熟蛋白大小为22.24 k Da,等电点5.69。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。荧光竞争结合实验对3种性信息素和36种植物挥发物结合发现,Pxyl OBP2与性信息素Z-11-16:Ald可以结合,解离常数48.951μmol/L;可以和11种寄主植物挥发物有效结合,其中,与芳樟醇、正壬醇结合能力最强,解离常数分别为4.733和6.861μmol/L。【结论】本研究明确了Pxyl OBP2的核苷酸、氨基酸序列,并根据qRT-PCR和荧光竞争结合实验结果,推断Pxyl OBP2与小菜蛾雄虫寻求配偶有关,且寄主挥发物芳樟醇、正壬醇起协同促进作用。     

清栓酶(蝮蛇抗栓酶)的临床应用

清栓酶是第238医院与沈阳药学院合作,从中国东北陆生白眉蝮蛇毒中提取的一种酶制剂,经过一系列的药理实验证实,该药有降低血浆纤维蛋白源、血液粘度、血小板聚集功能及粘附率、溶栓、扩血管、改善微循环作用,从而有显著抗凝效应,治疗血栓病有效。该药急性毒性试验,半致死量(LD_(50)),静脉给药为3.75±0.84u/公斤,临床应用有效剂量为0.010～0.012u/公斤,相当小白鼠LD_(50)的1/200,安全系数为200倍,可认为是安全的。亚急性、慢性毒性试验证实,活疗剂量该药对心、肝、肾等功能无影响,对机体无害。该药药代动力学检查:半衰期为4小时,24小时90％从体内排出,48小时排完,主要由肾脏、消化道排泄,肝脏解毒。临床治疗观察50000余例,对闭塞性脑、心周围血管、眼底血管病等二十余个病症效果显著,其中脑血栓30000例,有效率为92.3％;脉管炎311例,有效率为96.6％;深部静脉炎118例,有效率为98％;冠心病159例,心绞痛有效率为96.2％心电图ST—T缺血性改变有效率为79.3％。经过临床系统观察目前对以下二十余个病症有较好的疗效。脑血栓,短暂性脑缺血发作(TIA)、脑动脉硬化及痴呆(近期)、震颤性麻痹;脉管炎、深部静脉炎、无脉症、雷诺氏病、上下腔静脉血栓、冠心病、心绞痛、心肌梗塞;眼底动静脉血栓、突发性耳聋;断肢(指)再植中抗凝、硬皮病、牛皮癣、皮肌炎、系统性红斑狼疮,干燥综合症、新生儿硬肿症、高凝血症、老年性糖尿病等。该药每日一次,每次按0.01～0.012u/公斤计算。成人一般0.5—0.75u/2—3支。用生理盐水或葡萄糖浠释,静脉给药,15～20天一疗程,停药3—7天可重复另一疗程。病重或病情特殊者可根据情况增减用量。该药无眩晕、复视等神经毒付反应,不降低血小板,治疗剂量无毒付作用。清栓酶是目前治疗血栓病疗效较高,起效快、付作用少等一种较理想的药物。     

6-BA和GA_3对盐胁迫下红杆铁皮石斛幼苗生理生化影响

以红杆铁皮石斛Dendrobium officinale为材料,研究植物生长调节剂6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和赤霉素(GA3)对其幼苗在Na Cl胁迫下的生理生化影响。结果表明,盐胁迫下,低浓度6-BA和GA3处理均可不同程度地提高红杆铁皮石斛幼苗的茎生长率,抑制根的伸长,且GA3抑制效果大于6-BA;随着6-BA浓度增加,盐胁迫下红杆铁皮石斛叶片叶绿素含量降低,类胡萝卜素含量则呈先升后降的趋势,而较高浓度GA3(4.0 mg·L-1)处理同时提高叶绿素和类胡萝卜素含量;低浓度6-BA(2.0 mg·L-1)处理能提高红杆铁皮石斛叶片可溶性糖含量,相同浓度GA3处理则降低可溶性糖含量,但高浓度GA3处理的可溶性糖含量与对照无显著差异。因此,添加适当浓度的植物生长调节剂能提高光合色素及可溶性糖的合成与积累,从而缓解盐胁迫对红杆铁皮石斛植株的伤害。     

哺乳动物非经典分泌信号肽介导重组EGFP蛋白向毕赤酵母细胞壁转运

为探索哺乳动物非经典分泌信号肽在毕赤酵母表达系统中引导重组蛋白分泌的作用,本研究将一段来源于小鼠同源异型框蛋白(En2)的分泌信号序列(SS)融合至EGFP蛋白的N端,在毕赤酵母中表达。实验结果显示SS信号肽能通过一种不同于经典的内质网-高尔基体分泌通路的方式将EGFP蛋白分泌至细胞膜表面,与α交配因子前导肽相比,显著降低了细胞的内质网压力。本研究提示哺乳动物非经典分泌信号肽可作为递送重组蛋白至酵母膜表面的一项工具。     

PICC置管后致静脉血栓的护理

目的总结分析经外周静脉置入中心静脉导管(PICC)后并发静脉血栓的情况、治疗方法及转归,并制定针对性的护理干预措施。方法选择我院放疗科一病区2012年1月~2015年6月收治的150例鼻咽癌患者为研究对象,患者均因治疗需要行PICC置管,并在循证基础上给予针对性护理干预。结果 9例患者置管后发生静脉血栓,发生率为6.00%;溶栓治疗后9例患者症状均明显缓解,无栓子脱落导致脑栓塞和肺栓塞病例。结论做好PICC置管后上肢静脉血栓的预防性护理和上肢静脉血栓形成后的护理,杜绝或减少静脉血栓的发生原因,从而降低静脉血栓的发生率。同时及早发现上肢静脉血栓形成,并及时采取恰当的处理措施,可减轻患者的痛苦及经济负担,延长PICC留置时间。     

微波处理对绿豆象的杀虫效果及对红小豆发芽率的影响

通过设置不同时间和功率的微波对裸露绿豆象Callosobruchus chinensis (L.)成虫、与红小豆混合的成虫、绿豆内幼虫及卵进行处理,以研究微波对绿豆象的杀虫作用及对绿豆象成虫产卵量、幼虫羽化率及卵孵化率等生物学特性的影响。试验结果表明：微波处理裸成虫的死亡率随处理时间及功率增加而升高。成虫在中高火和高火分别处理60 s和50 s以上时间时死亡率过半,为51.21%～99.92%。处理与红小豆混合的成虫死亡率随功率和时间变化趋势同相同处理的裸虫,但相同条件下与红小豆混合的成虫死亡率明显高于相同处理的裸虫。低火至中低火处理60 s、解冻50 s及中火至高火40 s以上时间时成虫死亡都过半,为55.75%～100%,而中火处理70 s、中高火至高火60～70 s可使成虫全部死亡。微波处理具一定后续效应,处理的成虫虽没立刻死亡但随后死亡率仍比对照高。成虫高火处理50 s后的第3天校正死亡率可达87.74%。微波处理还可降低绿豆象成虫产卵量、幼虫羽化率、卵孵化率及红小豆发芽率。成虫、卵和豆内幼虫对微波敏感性依次增高。红小豆在中低火处理60 s、解冻50 s、中火40 s、中高火至高火30 s以上时间时发芽率都低于一半,为0.21%～48.33%。微波对绿豆象杀虫效果显著,但使用时需考虑微波仪器、处理功率和时间、产品用途及含水量等诸多因素的影响并进行优化试验以取得最佳效果。     

^60Coγ射线与EMS复合处理对山黎豆抗氧化酶活力及ODAP含量的影响

Lathyrus sativus seeds were treated with 60Co gamma-ray and EMS(ethyl methane sulfonate), and their emergence rate and SOD, POD and CAT activities were determined. The result indicated that the treatment decreased the emergence rate. The activities of SOD and POD were changed in accordance with the increase of irradiation dose and EMS concentration, while that of CAT had no obvious change. After treatment, the ODAP content in Lathyrus sativus decreased. Amutant was developed, with toxin content of 0.1%, compared to 0.2% in control.     

成梯度增加的流体流动剪切力促进明胶基底上人脐静脉内皮细胞粘附

采用脉动平板流动腔 (flowchamber)系统 ,研究了的单水平流动剪应力加载 ,和从 5或 7.5dyne/cm² 开始的成梯度增加至 1 0或 1 5dyne cm² 的流动剪应力加载 ,在 5h、1 0h、2 4h对生长在明胶基底上的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)粘附性的影响 ,探讨了梯度增加的流动剪切力加载对细胞粘附能力的促进作用。实验结果表明 :与 7.5dyne cm² 的单一水平的加载相比 ,成梯度增加的流动剪切力可明显提高HUVEC在明胶基底上的粘附 ,增加HUVEC对流动剪应力的耐受程度 ,有利于引起HUVEC转变成与在体相同的形态和排列。     

新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因的克隆和抗冻活性分析

根据GenBank中已发表的昆虫抗冻蛋白基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术结合3'-RACE扩增的方法,从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲 Microdera punctipenis dzunarica中获得了长约294 bp不含信号肽的抗冻蛋白cDNA片段,命名为MpAFP5,其全长序列为363 bp(GenBank注册号为：AY821792)。基因测序结果表明, MpAFP5-cDNA片段与加拿大拟步甲Dendroides canadensis AFP 8基因片段、黄粉甲Tenebrio molitor THP 4-9基因片段的核苷酸同源性分别达68.4%和71.8%,氨基酸序列同源性分别达70%和81%。将MpAFP5构建到原核表达载体pGEX4T-1中,重组质粒pGEX4T-1-MpAFP5在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达融合抗冻蛋白,SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为37 kD,Western印迹分析证明MpAFP5在大肠杆菌中正确表达。细菌的抗冻实验结果显示准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白对细菌具有显著的抗冻保护作用,保护效果与抗冻蛋白剂量呈正相关性。     

两种国产苏铁属植物的核型分析

报道了苏铁属（Cycas L.）2种植物的染色体数目及其核型.它们的体细胞染色体数目均为2n=2x=22,核型均属3B型.核型公式分别是：海南苏铁C.hainanensis K（2n）=2x=22=4m＋2sm＋4st＋12T,仙湖苏铁C.szechuanensis subsp.fairylakea K（2n）=2x=22=2m＋4sm＋4st＋12T.两种苏铁的核型均为首次报道.支持基于染色体资料把苏铁属分为两个类群的观点.