哈佛大学发现新的化合物和抗体使化学诱导iPS细胞成为可能

美国哈佛大学干细胞·再生生物学部的Kevin Eggan博士等从有800种生物活性的低分子库中,成功筛选出有可能代替转录因子Sox2、Klf4、Oct4的低分子化合物,这3个转录因子是构成诱导iPS细胞的山中程序的要素。Eggan博士说：“发现活性化合物的过程出乎意料的简单。”但另一方面,还不能对化学诱导iPS细胞的确立持完全乐观态度,iPS细胞的标准化是今后研究发展当务之急的课题。     

超抗原SEA与抗黑色素瘤ScFv融合基因的构建及表达

采用酶切连接和重叠PCR连接两种方法将抗黑色素瘤单链抗体基因和去除N端信号肽的金黄色葡萄球菌肠毒素A基因进行融合,并将融合基因克隆于pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3)。用NiNTA系统对表达产物进行分离、纯化。MTT法检测融合蛋白对黑色素瘤细胞的体外抑制率。结果表明6HisScFvSEA融合蛋白可在E.coli BL21(DE3)中稳定表达,表达量占菌体蛋白的30%,主要以包涵体的形式存在。融合蛋白可通过激活效应细胞对表达相关抗原的黑色素瘤细胞发挥抑制作用。     

压电免疫传感器的表面固定方法

抗原／抗体在石英晶体电极表面固定而不丧失其活性是压电免疫传感器成功的关键,直接影响到它的灵敏度和可重复性等性质。本文分别从固定抗体和抗原的角度介绍了压电免疫传感器表面固定方法。并对戊二醛交联法、自组装单层膜法(SAMs)、蛋白A固定法做了较深入和详细的介绍,展望了其以后的发展前景。     

磁免疫电化学发光检测肺癌血清p53抗体

肿瘤抑制基因——p53基因的突变可能产生p53抗体.p53抗体在肿瘤的诊断、预后及监测等方面具有重要的临床价值.目前检测p53抗体的方法,如酶联免疫分析方法,需要多个步骤,比较费时,且大部分检测指标只能是半定量,具有一定的局限性.提出了一种磁免疫电化学发光(IM-ECL)分析方法定量检测人血清p53抗体.这种新的分析方法检测人血清p53抗体的最低检测极限可达到10 ng/L,标准曲线的动力学范围和线性范围达到5个数量级（0.01～1 000 μg/L）.我们应用IM-ECL分析法检测肺癌病人血清,只需要50 μl的样品量,30 min的孵育时间和少于50 s的采集时间,得出肺癌血清中p53抗体的阳性率为28.6 ％,然后通过标准曲线定量阳性血清中p53抗体的浓度.从肺癌血清的结果中发现,随着临床分期的升高,p53抗体浓度增加.IM-ECL分析方法在检测限、线性范围、分析时间等方面都优于酶联免疫分析,是一种可行的快速、灵敏、定量检测人血清p53抗体的分析方法.     

利用自身免疫病人血清鉴定新的中心体蛋白质组分

与其他亚细胞结构相比, 中心体由于其分离和纯化方面的困难使其蛋白质组学研究一直处于滞后状态. 通过免疫荧光证明特异性识别中心体的6名自身免疫病人的自发抗血清被用来鉴定它们相应的抗原即中心体蛋白. 利用细胞全蛋白的Western blot检测血清后, 从Western blot膜上每条单独条带上洗脱结合的抗体, 并确定产生中心体特异性荧光染色的抗体洗脱来源. 通过免疫沉淀获得并通过质谱鉴定该抗体相应的抗原蛋白, 共鉴定出6种中心体蛋白, 包括2种已知的中心体蛋白和4种未知定位或未见中心体定位报道的蛋白. 这些蛋白涉及细胞周期调控、信号转导通路、分子伴侣和代谢酶类, 反映了中心体功能的多样性.     

抗人胎盘酸性铁蛋白单链抗体的构建、表达与鉴定

目的:制备人胎盘酸性铁蛋白(PAF),构建、表达并鉴定抗人PAF单链可变区抗体片段(scFv)。方法:设计以SfiⅠ、NotⅠ为酶切位点、以(Gly4Ser)3为linker的2对引物,从抗人PAF单克隆抗体可变区基因的克隆载体中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,构建VH-linker-VL的scFv基因。经SfiⅠ、NotⅠ酶切后克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化大肠杆菌TG1和筛选后测序验证,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr)。以人PAF为抗原,scFv为一抗,抗His单克隆抗体为二抗,间接ELISA鉴定其抗体活性。结果:重叠延伸PCR扩增产物经凝胶电泳可见约700bp的条带,DNA序列分析证明2株抗体具有完整的scFv序列,并含有c-myc和His。IPTG诱导阳性菌表达产物经SDS-PAGE鉴定有Mr约27000的显示条带,符合scFv与表达标签融合蛋白的理论值;间接ELISA证明表达产物可与PAF结合。结论:成功构建并表达了抗人PAF单链抗体,为进一步建立检测PAF的间接ELISA奠定了基础。     

脱落酸人工抗原合成及多克隆抗体制备

目的:为了对植物细胞中的脱落酸(ABA)进行定量和定位分析,研究了脱落酸人工抗原的合成以及多克隆抗体的制备。方法:用重氮化法将ABA分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)联结,得到ABA的免疫抗原和包被抗原,并采用紫外全波长扫描和SDS-PAGE对合成的抗原进行了鉴定。以经过鉴定的抗原免疫白兔,制备出ABA的多克隆抗体;采用间接酶联免疫法(ELISA)对抗血清进行效价检测,通过离子交换层析法获得纯化的抗体。结果:ABA与BSA的平均偶联比为5.3∶1,抗血清效价为1∶16000。结论:人工抗原和多克隆抗体制备成功,为采用ELISA和免疫胶体金技术(ICG)检测ABA提供了有效工具。     

酶联免疫破伤风抗体定量试剂的研制及应用

制备一种精确的破伤风抗体定量试剂,用于人源破伤风抗体的定量及人群破伤风抗体水平的测定。以人源破伤风免疫球蛋白国家标准品建立定量反应曲线,经系统优化后建立双抗原夹心法定量检测系统。定量反应曲线显示,抗体浓度在10~120m IU/m l之间,相关系数r=0.9993。精密度(CV)≤7%。实际应用验证,未经(TTC)免疫的献血员中,具有保护性抗体水平(0.01 IU/m l)的比例只占12.2%。经3针(TTC)免疫后,抗体水平均大于0.01 IU/m l,经动物体内中和试验法(NT)定量的3批破伤风免疫球蛋白,用制备的酶联免疫破伤风抗体定量试剂测定,其回收率分别为109%、98%和93%。结论,该试剂可用于破伤风抗体的精确定量。     

抗体工程研究进展

噬菌体抗体库技术的出现为抗体工程的研究带来了革命性的变化,本文总结了当前国内外抗体工程,特别是单链抗体方面的研究进展。     

试剂盒半小时擒获艾滋病毒

上海科华生物工程股份有限公司研发出一种艾滋病诊断试剂盒,只需一滴血加上少量药水,半小时内就能检测出血液中是否有艾滋病病毒。近日,该试剂盒被克林顿基金会确定为其在全球的艾滋病诊断系统四大供应商之一。通过这一渠道,科华公司的艾滋病抗体诊断试剂盒将大批量出口到亚非拉及欧洲部分地区。而在此次人选克林顿基金会的4家诊断系统供应商中,该试剂盒的表现优于美国、以色列和印度公司。