通过高表达Igf1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合使CHO细胞适于在无蛋白培养基中抗凋亡培养

哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中,哺乳动物细胞生长活力差,且容易发生细胞凋亡,因而难以大规模培养。为解决此问题,应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr^-细胞中同时表达Igf-1／Bcl-2或Bcl-2／CyclinE基因组合,通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力;通过1gf-1或CyclinE促进细胞生长分裂,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO-dhfr^-细胞,应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个,对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-Bcl做进一步Western blot和流式细胞分析,确认此两个细胞株分别高表达Igf-1／Bcl-2和Bcl-2／CyclinE基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡,并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡,证明CHO-IB3和CHO一BCl均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr^-对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明,CHO-IB3和CHO-BCl在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHO-dhfr^-对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长,适于作为生物工程宿主细胞。     

通过高表达Igf1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合使CHO细胞适于在无蛋白培养基中抗凋亡培

哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中,哺乳动物细胞生长活力差,且容易发生细胞凋亡,因而难以大规模培养。为解决此问题,应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr-细胞中同时表达Igf-1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合,通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力;通过Igf-1或Cyclin E促进细胞生长分裂,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO-dhfr^-细胞,应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个,对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-BC1做进一步Western blot和流式细胞分析,确认此两个细胞株分别高表达Igf-1/Bcl-2和Bcl^-2/Cyclin E基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡,并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡,证明CHO-IB3和CHO-BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr-对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明,CHO-IB3和CHO-BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHOdhfr-对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长,适于作为生物工程宿主细胞。     

白刺组织培养技术的研究

试验选用唐古特白刺幼嫩茎段和叶片作为材料,研究白刺不同外植体的离体培养技术。结果表明,白刺带芽嫩茎是诱导丛生芽的良好外植体,而叶片是诱导愈伤组织的良好外植体;白刺的最适增殖、壮芽培养基是：MS BA0.5mg／L NAA1．0mg／L GA32．0mg／L;最适生根培养基是：l／2MS IBA0.5mg／L;愈伤组织诱导培养基是：MS 2,4-D0.5～1．0mg／L。     

牛肝菌液体发酵及产多糖的影响因素研究

牛肝菌(Boletused)属外生菌根菌,美味牛肝菌多糖有明显的抗肿瘤效果。采用液体培养方法对牛肝菌菌丝体的发酵及产多糖特性进行了研究,实验考察了培养基中葡萄糖浓度和培养基的初始pH对牛肝菌菌丝量及产多糖的影响。结果表明,实验条件下,该株牛肝菌在pH值5．5—6．0,葡萄糖含量为60mg/mL时,多糖产量为6．7mg/mL。实验考察了从发酵菌丝体中提取多糖的几种方法,其中研磨法效果较好,与对照相比,多糖提取量增加了20％。     

风味冲调紫甘薯粉配方研究

以紫甘薯全粉为主料,以燕麦粉、小米粉、果粉和糖粉为辅料,采用U10（1010）均匀设计,研究了风味冲调紫甘薯粉不同配方的感官性状。结果显示：对感官性状影响最显著的因子是小米粉,其次是燕麦粉、糖粉、柠檬粉,鲜橙粉对感官性状影响很小,几乎可以忽略不计。经过对感官性状的回归分析,结果表明：风味冲调紫甘薯粉最适宜的配方为：紫甘薯粉64~68g、小米粉8~10g、燕麦粉7~9g、柠檬粉6~8g、鲜橙粉1~2g、糖粉9~10g。该配方兼顾了青少年和中老年的口味,具有较好的普适性。     

我国2003年以来注册的降脂保健茶的现状分析

目的：对2003年以来国家食品药品监督管理总局已注册的降脂保健茶的情况进行分析。方法：根据国家食品药品监督管理总局（CFDA）网站公布的降脂保健茶的注册信息,采用统计学分析方法进行分析。结果：我国2002年后共注册降脂保健茶产品数量69个,其中有88.41%涉及中药材,而银杏叶、绞股蓝、山楂、荷叶、泽泻等中药的使用频率相对较高,分别达到34.78%、30.43%、24.64%、20.29%、20.29%;总黄酮、茶多酚、总皂苷等功能因子的使用频率分别达到了63.77%、46.38%、40.58%;申报一保健功能的产品有52.17%,申报2种保健功能的产品有47.83%。结论：降脂保健茶与中药搭配应用已经很广泛,但在配方、药物的毒副反应、饮食宜忌以及产品宣传方面都存在一些不严谨的方面,应该加强对这些方面的重视和思考。     

一株新的溶磷草生欧文氏菌的分离、鉴定及其溶磷效果的初步研究

从湖南、湖北、云南等地磷矿开采场的土壤样品中筛选到一株溶磷能力较强的菌株P21,结合生理生化指标和16S rDNA序列分析鉴定其属于草生欧文氏菌菠萝变种(Erwinia herbicola var.ananas).该菌能溶解磷酸三钙、羟基磷灰石、磷酸铁、磷酸锌,其中对磷酸三钙和羟基磷灰石的每升液体培养基溶磷量(P2O5)分别高达1206.20mg、529.67mg.溶磷菌草生欧文氏菌菠萝变种P21对产地不同的8种磷矿石溶解能力不同,对云南晋宁和昆阳、四川雅安、江苏锦屏等地磷矿石有较强的溶解能力,每升液体培养基溶磷量分别为96.64mg、78.46mg、67.07mg、65.24mg,对其它产地的磷矿石溶解能力较差.实验表明,培养液的pH下降与溶磷菌P21的溶磷量无直接关系.     

金黄色葡萄球菌基因表达的DNA扣除法

[目的]金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值.[方法]对制备好的反转录(RT,含有cDNA和DNA)和非反转录(RTˉ,仅含DNA)样品进行Real-time PCR检测,根据经典(1 E)ˉ△△Ct相对定量算法并结合PCR效率公式建立一种基因表达相对定量分析的DNA扣除法,将得到的Ct值转换为各样品含量,从RT样品中扣除RTˉ样品的量,无需DNaseⅠ酶解处理就可以去除DNA的影响,RTˉ样品的检测结果还可同时作为稳定的DNA内参.[结果]采用以上方法分析金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(sea)、16S rRNA和RNA Ⅲ的表达情况,在含有葡萄糖的NB培养基中sea的相对转录水平随着葡萄糖浓度的增大而升高,RNAⅢ的相对转录水平随葡萄糖浓度的变化而产生小幅度的波动,16S rRNA在菌体生长初期时的表达量较为稳定;与绝对定量法比较,结果差异较小(均小于15%),且差异不显著(p＞0.05).[结论]这种基于DNA扣除法的Real-time RT PCR相对定量方法可以有效的对金黄色葡萄球菌的基因表达进行分析.     

益生菌Lactobacillus casei Zhang增殖培养基的优化

Lactobacillus casei Zhang是一株分离自传统酸马奶中的益生菌。本文研究了不同碳源、氮源、碳氮比例、微量元素及缓冲盐对Lactobacillus casei Zhang增殖培养的效果, 并采用响应面法对优选的碳源、氮源和缓冲盐类的组成含量进行优化, 得到Lactobacillus casei Zhang的增殖培养基为：葡萄糖 20.9 g/L、大豆蛋白胨10.45 g/L、酵母粉10.45 g/L、K2HPO4 3.5 g/L、醋酸钠14.6 g/L、柠檬酸钠2.3 g/L、MgSO4?7H2O 1 g/L、MnSO4?5H2O 54 mg/L、CuSO4?5H2O 10 mg/L、吐温80为1 g/L。Lactobacillus casei Zhang在此增殖培养基中经37℃18 h培养活菌数可达到4.78×109 CFU/mL, 比在MRS中(4.8×108 CFU/mL)提高近10倍。     

蔗糖能进入植物细胞的论证

在足够长的时间内,控制一定的条件,在蔗糖溶液中的洋葱表皮细胞发生质壁分离及自动复原现象.在植物组织培养基中分别用蔗糖和葡萄糖作碳源,比较观察外植体的生长发育状况,实验结果表明蔗糖分子可以进入植物细胞并被利用.