肽抗生素hPAB-β3拷贝工程菌的发酵与重组蛋白纯化

肽抗生素 (peptideantibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽 ,在临床病原菌对常用抗生素耐药性日益严重的今天 ,人们希望将肽抗生素开发为一种新型的抗感染制剂。为大量制备人源肽抗生素hPAB β ,本研究在前期对筛选出的 3拷贝优势工程菌的摇瓶发酵条件进行摸索的基础上 ,采用 3.7L发酵罐对发酵pH值、溶氧条件 (PO2 )和补料时机、方式等参数进行优化。同时 ,对表达产物进行了如下纯化 :利用Ni NTA亲和层析捕获 3拷贝融合蛋白 ,继而用 2mol/L羟胺裂解 ,产物用SOURCE 30RPC填料进行反相层析 ,目标肽经GSH…     

利用废水液体发酵生产单细胞蛋白的实验研究

利用工厂废水或动物血制作培养基,以液体发酵方式培养产朊假丝酵母NCTC3576菌及甘饲8501菌.离心分离菌体,测定菌体生物生长量,并观察蔗糖、温度、酸碱度、发酵时间、种子液接种量对生物生长量的影响.生化方法分析NCTC3576菌单细胞蛋白的品质,氨基酸分析仪分析单细胞蛋白的氨基酸组成.结果表明,玉米淀粉厂废水,不必调pH,不用添加其它任何组分,即可直接用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC3576菌;pH4.0～7.0均对生长量无明显影响;24h培养已达到最好生长量,再延长时间已不能提高产量;28℃及37℃培养无明显差别,在3%～17%种子液接种量范围内,接种量与生长量有正相关关系.研究表明,玉米淀粉厂废水单一成分即可用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC3576菌,原料成本低,且易于产品分离纯化和工业化生产中的连续培养,是单细胞蛋白生产的良好途径.     

噬菌体治疗的研究进展

动物实验及临床研究表明,在噬菌体与宿主菌严格配型的基础上,噬菌体是治疗细菌感染的一种有效手段.噬菌体治疗的前景有赖于人们对噬菌体寄生性的基因控制及特异吸附的分子生物学基础的深刻理解.     

噬菌体整合酶--基因转移的工具酶

噬茵体整合酶是整合位点序列特异性的酶类。由于这一特性,它可用于向染色体定位特异性地导入目的基因,在遗传工程、基因治疗、转基因动物等领域极具应用前景。本文综述噬茵体整合酶的发现与分类、结构与功能及其应用前景。     

宏基因组学:基本策略及在医学研究领域中的可能应用

宏基因组学（metagenomics）的提出是分子生物学领域的一个重要进展。在自然生境中有大量不可培养微生物的存在,无法通过培养法进行研究,而宏基因组学的策略则突破了这一束缚。宏基因组学是从生境中取得全部微生物的基因组,并进行系统研究的方法。该文介绍宏基因组学的基本情况,并着重探讨其在医学研究领域中的可能应用。     

细菌生物被膜的耐药机制及控制策略

在特定的条件下,细菌可以形成生物被膜,包被有生物被膜的细菌称为被膜菌.被膜菌无论其形态结构、生理生化特性、致病性还是对环境因子的敏感性等都与浮游细菌有显著的不同,尤其对抗生素和宿主免疫系统具有很强的抵抗力,从而导致严重的临床问题,引起许多慢性和难治性感染疾病的反复发作.细菌生物被膜粘附在各种医疗器械及导管上极难清除,以至引发大量的医源性感染.近年来,随着人们对细菌致病机制认识的逐步深入,控制细菌生物被膜的方法已有较大发展.本文拟探讨被膜菌的耐药机制并着重综述细菌生物被膜控制方法的最新研究进展.     

伤寒沙门菌对宿主细胞磷酸肌醇的调节与利用

宿主细胞的磷酸肌醇是细胞信号通路中的重要成分,参与许多细胞内过程(如细胞生长与分化、肌动蛋白的组装、细胞运动、细胞死亡、膜运动、葡萄糖转运等)的调节,是细胞生物学中极为重要的一组分子.近来的研究表明,病原菌(尤其是胞内寄生菌)可以利用磷酸肌醇信号通路,颠覆宿主细胞的功能.本文综述伤寒沙门菌对宿主细胞磷酸肌醇信号通路的调节与利用,有利于了解胞内寄生菌的寄生和致病机制.同时,细菌与宿主细胞相互作用的模型给人们提供了重要的手段来破解真核细胞内的复杂信号传导之谜.     

铜绿假单胞菌噬菌体PaP4的分离与鉴定

[目的]鉴定一株新分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP4的生物学特性.[方法]双层琼脂培养法制备PaP4的单个噬斑,观察噬斑特点;用聚乙二醇8000浓缩PaP4颗粒后,再用氯化铯密度梯度离心纯化;用透射电子显微镜观察磷钨酸负染色的PaP4颗粒;提取PaP4基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;按照感染复数(MOI)分别为0.000 1、0.001、0.01、0.1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,充分裂解细菌后,测定噬菌体滴度;以MOI=10的比例加入噬菌体及宿主菌,进行一步生长实验,绘制一步生长曲线.[结果]PaP4的噬斑直径约3 mm-5 mm,圆形透明边缘清晰;PaP4噬菌体呈多面体立体对称的头部,直径约50 nm,有一个约30 nm的短尾;限制性酶切实验表明PaP4基因组为双链DNA;当MOI为0.001时PaP4感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;用一步生长曲线描绘了其生长特性.[结论]PaP4属dsDNA短尾科裂解性噬菌体;最佳感染复数是0.001;由一步生长曲线得出感染宿主菌的潜伏期是25 min,裂解期是20 min,平均裂解量是150.     

高致病性2型猪链球菌IV型样分泌系统virB1-89K基因的敲除及其对毒力的影响

摘要:【目的】构建高致病性2 型猪链球菌IV 型样分泌系统virB1-89K基因的敲除株和互补株,研究virB1-89K基因缺失对细菌毒力的影响。【方法】通过同源重组技术敲除virB1-89K基因,多重PCR筛选敲除株并测序鉴定。再将virB1-89K基因克隆到穿梭质粒pSET1后转入virB1-89K敲除株中,构建互补株。比较野生株05 ZYH33、突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K三者基本生物学特性的差异,小鼠实验分析virB1-89K基因敲除后对细菌毒力的影响。【结果】成功构建突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K,在基本生物学性状无明显改变的情况下,敲除株的毒性降低到野生株的30%,互补株可恢复其毒性。【结论】virB1-89K基因作为2型猪链球菌高致病性菌株05 ZYH33的IV样分泌 系统的重要组分,与其高致病性密切相关。     

高致病性2型猪链球菌Ⅳ型样分泌系统virB1-89K基因的敲除及其对毒力的影响

[目的]构建高致病性2型猪链球菌Ⅳ型样分泌系统vir B1-89K基因的敲除株和互补株,研究vir B1-89K基因缺失对细菌毒力的影响.[方法]通过同源重组技术敲除vir B1-89K基因,多重PCR筛选敲除株并测序鉴定.再将virB1-89K基因克隆到穿梭质粒pSET1后转入vir B1-89K敲除株中,构建互补株.比较野生株05ZYH33、突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K三者基本生物学特性的差异,小鼠实验分析virB1-89K基因敲除后对细菌毒力的影响.[结果]成功构建突变株△vir B1-89K和互补株CvirB1-89K,在基本生物学性状无明显改变的情况下,敲除株的毒性降低到野生株的30％,互补株可恢复其毒性.[结论]virB1-89K基因作为2型猪链球菌高致病性菌株05ZYH33的Ⅳ样分泌系统的重要组分,与其高致病性密切相关.