抗呼吸道合胞病毒融合蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定

目的：从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法：以RSV F蛋白为靶抗原,通过“吸附-洗涤-洗脱-扩增”过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coli HB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western及Dot blot分析。结果：经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western及Dot blot分析表明为单链抗体。结论：利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。     

海洋里真的有陆桥吗？

１７７０年６月 ,英国探险家库克船长率“努力”号探险船来到澳大利亚大堡礁近岸 ,看见一种腹部有个袋子的奇怪动物 ,就询问土著居民 ,对方回答了一句“坎格鲁” ,于是库克就把这种怪兽称为“坎格鲁”。后来才得知 ,“坎格鲁”并不是怪兽的名字 ,而是当地话“听不懂”的意思。动物学界把这种动物划归有袋类 ,是澳大利亚特有的袋鼠。今天一提起澳大利亚 ,人们自然就会想到袋鼠。可事实上 ,澳大利亚并不是袋鼠的故乡！动物地理学家认为 ,几百万年前袋鼠曾在欧洲居住过 ,欧洲很可能是它们的故乡。古生物学家也认为 ,有袋动物的故乡是在北半球。…     

用抑制性差减杂交构建新疆Kaposi肉瘤差异表达基因文库

目的:分离卡波氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma,KS)差异表达基因,并建立相应的cDNA文库,为从分子水平揭示KS发病机制打下良好的基础。方法:采集KS肉瘤及来源于同一患者的正常皮肤组织,抽提总RNA,经逆转录酶合成dscDNA,并经RsaⅠ酶切,与2种不同的接头衔接,分别以正常组织和肿瘤组织作为tester和driver,进行双向抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH),初步筛选KS肉瘤与正常皮肤差异表达基因,将差异基因PCR扩增,产物与pGEM-Teasy克隆载体连接,转化DH5α大肠杆菌,采用蓝白斑筛选,获得白色阳性克隆菌落,并煮沸破菌,PCR扩增出未知基因片段。结果:差减得到差异基因片段多位于200~500bp,成功构建了2个分别代表在KS肿瘤组织中表达上调和下调的基因文库。结论:经双向抑制性差减杂交获得了KS差异表达基因文库。抑制性差减杂交是一种快速、方便、有效的建立差异基因文库的方法。     

卡波氏肉瘤相关病毒感染激活Jurkat细胞抗-HIV基因表达的研究

目的:观察Jurkat细胞感染卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpes virus,KSHV)后细胞内几条主要的抗HIV作用的基因(RANTES、APOBEC3G、APOBEC3F、MX1、MX2)表达情况。方法:首先用佛波酯(TPA)(20ng/ml)刺激BCBL-1细胞72小时,提取KSHV病毒滤液。然后把含KSHV滤液的RPMI-1640培养Jurkat细胞。24小时后,分别在感染后第3、5天收集细胞,提取细胞总RNA,通过实时定量PCR检测分析相关基因的表达情况。结果:通过对KSHV感染不同时期的细胞抗-HIV基因表达分析,结果显示:与未感染组相比,KSHV感染组的Jurkat细胞内的多条抗HIV-1基因表达上调。感染第3天,RANTES上调123倍,APOBEC3G上调3.12倍,A POBEC3F上调1.18倍,MIX1上调2.75倍,MIX2上调4.35倍,感染第5天RANTES上调11.91倍,MX1上调2.72倍,MIX2上调2.22倍。结论:KSHV感染在一定程度上激活Jurkat细胞抗HIV相关基因的表达。     

贝加尔湖海豹的难解之谜

据俄罗斯伊尔库茨克州紧急情况局提供的报道说 ,１９９９年６月 ,在俄罗斯贝加尔湖岸边发现大量海豹尸体 ,湖上的大浪将３６只海豹尸体冲上斯柳佳区乌图里克村附近的岸边。这是在不到一个月的时间里第二次发现贝加尔湖中的海豹大量死亡。５月底 ,贝加尔湖边就曾发现４２只海豹尸体。贝加尔湖里大量海豹相继死亡一事已引起生态学家和环境保护者的严重不安 ,当地的动物生态学家正在对湖中的水样做化验分析并对动物尸体进行解剖 ,目前尚不清楚海豹死亡的原因。据推测 ,如此多的海豹死亡有可能是海豹群中发生了瘟疫 ,或者是人为偷猎造成的。贝加…     

大西洋能把太平洋挤掉吗?

地质学家说 :大西洋是由一条裂缝逐渐扩展而成的 ,这一扩展过程的同时 ,北美和欧洲、南美和非洲渐次分离开来。那末 ,不断扩展的大西洋的原名并不叫大西洋 ,古称ＯｃｅａｎｕｓＡｔ ｌａｎｔｉｃｕｓ,即“阿特兰他洋” ,得名于古希腊神话中的大力士神阿特拉斯的名字。这位阿特拉斯神知道任何一个海洋的深度 ,并用石柱将天和地分开。据说此洋是阿特拉斯居住的地方。１６５０年 ,荷兰地理学家伯恩哈德·瓦雷尼正式使用“阿特兰他洋”这个名称。大西洋的汉译名是根据明代欧洲传教士编绘的世界地图上的拉丁文名称意译的。在我国明朝年间 ,东西洋…     

三七总皂苷对肺纤维化小鼠血清中Ⅳ-C型胶原透明质酸的干预作用

目的:研究三七总皂苷对小鼠肺纤维化血清中Ⅳ-C型胶原及透明质酸的的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠60只,分为三七总皂苷高、中、低剂量组,强的松组.模型组,假手术组,每组10只.除假手术组外其余各组小鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组小鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水.造模后第2天开始给药,持续到处死动物的前一天.三七总皂苷高、中、低剂量组分别为120、60、30mg/kg/d,强的松组为0.56mg/kg,假手术组、模型组分别灌服等体积的生理盐水.于28d后处死,观察比较各组小鼠血清中Ⅳ-C型胶原及透明质酸的含量.结果:模型组小鼠肺组织中Ⅳ-C型胶原、透明质酸含量均明显高于假手术组(P<0.01),与模型组相比,三七总皂苷高中低剂量组均能降低小鼠血清中Ⅳ-C型胶原、透明质酸舍量,其中中、高剂量组的降低作用较为显著(P<0.01).结论:三七总皂苷可通过降低肺纤维化小鼠细胞外基质含量而发挥治疗肺纤维化作用.     

PTD4-GFP-VP3融合蛋白在人肝癌细胞HepG2中的定位观察及凋亡诱导效应的实验研究

目的 观测PTD4-GFP-VP3融合蛋白诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡效应及其在肿瘤细胞中的定位与其凋亡效应关系的研究.方法 构建PTD4-GFP-VP3融合蛋白的原核表达载体,利用人源肝癌细胞株HepG2,经细胞透膜实验在激光共聚焦显微镜下观察PTD4介导的融合蛋白透膜效应,DAPI染色观测该蛋白在细胞中的定位;利用TUNEL法观察PTIM-GFP-VP3融合蛋白诱导肿瘤细胞的凋亡效应,并利用流式细胞仪检测其凋亡率.结果 PTD4-GFP-VP3融合蛋白在孵育细胞0.5 h后即可透过细胞膜进入到细胞质中,12 h后定位于细胞核并诱导肿瘤细胞凋亡,48 h达到最高凋亡效应.结论 PTD4能携带GFP-VP3融合蛋白穿透细胞膜,在肿瘤细胞中具有核定位效应,并能诱导肿瘤细胞凋亡,为后期进一步研究VP3的凋亡机制及其抗肿瘤治疗奠定了基础.     

水稻遗传转化研究进展

水稻是重要的粮食作物之一,其遗传转化取得了巨大进展.通过对水稻遗传转化的主要方法,用于水稻转化的各种外植体,影响水稻遗传转化和植株分化的各种因素的介绍,概述了水稻遗传转化技术在水稻育种方面的应用.