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BALB/c小鼠I-Ad αβ链RFP融合双顺反子表达载体的构建及其在COS-7中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
构建了在β链C端融合红色荧光蛋白(RFP)标签的BALB/c小鼠I-Adαβ链真核双顺反子表达载体pRed-IRES-I-Ad,使用LipofectAMINE2000转染COS-7细胞,用激光共聚焦显微镜观察外源蛋白在细胞中的表达与定位.I-Adαβ分子在COS-7细胞中能够以较高的效率表达,并且在COS细胞中能形成聚集状态.与通常的真核翻译帽子结构起始相比,IRES启动真核翻译系统的效率低于前者;与空质粒对比,IRES介导的真核翻译起始,RFP的表达量较低. 相似文献
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随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立 总被引:10,自引:1,他引:9
指数富集配基的系统进化(SELEX)技术是一种新的组合化学技术.体外构建了一个长度为81 nt、含有35个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件.通过对比不对称PCR和生物素-链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA.由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高,因此选择以微孔板为介质,分离与靶蛋白结合的适配子.经过9轮循环筛选,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(C蛋白)的结合率从0.5%上升到32.5%. 相似文献
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水动力转染基因在小鼠体内的长期高效表达 总被引:4,自引:0,他引:4
水动力转染技术是近年新出现的一种体内基因转染方法,可以实现目的基因在小鼠体内的高效表达,有可能作为受精卵显微注射的一种简单替代技术。但该技术的缺点是转染基因多瞬时表达,外源基因在体内高效表达的时间通常不超过1周,而且局限于肝、肾等器官,从而限制了该技术广泛应用。为了延长水动力转染基因在小鼠体内长期高效表达的时间,从而能对目的基因的体内功能进行长期研究,国外研究进行了广泛的探索,本综述了相关研究的最新进展。 相似文献
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人血红蛋白α,β基因在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
从人外周血细胞中提取出RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)得到人血红蛋白的α和β基因片段,与pT7Blue质粒连接,然后将α、β基因克隆进pBV220原核表达载体中,采用Sanger双脱氧终止法测序的结果与文献报道一致。宿主菌经热诱导,在1.6×105处有特异的蛋白带表达,表达量占总菌体总蛋白的20%。 相似文献
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1985年,Sndth在《科学》杂志上提出构建"融合噬菌体",即在这种丝状病毒的包膜蛋白上表达融合蛋白[1].1990年,Scott和Smith山利用这种表面表达载体建立了随机多肽文库,可以很方便地筛选出抗体及其他功能蛋白的强结合配基[2].我们建立了十二肽的随机多肽库,将从中筛选出抗HIV-gP160抗体的抗独特型多肽.1材料和方法1.1质粒、菌株和培养墓噬菌粒成h血四、大肠杆菌XLI-Blue和辅助噬菌体VCSM13由军事医学科学院微生物流行病研究所王海涛教授惠赠.SB液体培养基:30gtmptone,20g酵母膏,10gMops溶于IL去离子水中,调pH7.0.枝… 相似文献
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介绍了酵母三杂交系统的原理、应用、前景和存在的不足.在酵母双杂交基础上发展起来的酵母三杂交系统,将应用范围扩大到研究蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA、蛋白质-小分子药物间的相互作用. 相似文献
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为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒 (HCV) NS3 螺旋酶 (NS3h) 的寡核苷酸适配子 (aptamers). 利用 SELEX 技术,以 HCV NS3h 为靶分子,从体外合成的 81 bp 随机单链 DNA 文库中筛选与 HCV NS3h 特异结合的寡核苷酸适配子 . 克隆测序后,进行了解离常数 (Kd) 测定和 Clustal W 软件包分析适配子一级结构 . 经过 8 轮循环筛选,随机 ssDNA 库与 HCV NS3h 的结合率从 0.45% 上升到 29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分 5 个家族,其中 4 个家族具有共同的保守序列 . 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子 H2 与 HCV NS3h 特异结合的亲和力最高,Kd值为 140 nmol/L. 适配子 H2 (10 μmol/L) 在体外对 HCV NS3h 的活性具有一定的抑制作用,抑制率达 44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗 HCV NS3h 的寡核苷酸适配子 . 相似文献
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